Avaliação da Resposta Imune I Flashcards
O que é um imunoensaio?
Ensaios que detetam ou quantificam um analito numa amostra biológica usando o princípio da reação antigénio-anticorpo
Técnicas de imunoensaios com reações de precipitação
Dupla difusão Imunodifusão radial Imunoeletroforese contracorrente Imunoeletroforese Imunoeletroforese Rocket Imunofixação
A técnica de imunodifusão radial avalia…
A presença e concentração do antigénio
Quando é que usamos imunodifusão radial?
Quantificação de Ig
Quantificação de factores de complemento (e outras proteínas séricas)
Qual é o problema da imunodifusão radial?
É uma técnica manual, mais demorada e cara.
Qual é a diferença entre reações de precipitação e de aglutinação?
Precipitação - moléculas solúveis
Aglutinação - Elementos particulados (células aglomeradas - vê-se a olho nu)
Aglutinina por excelência
IgM
Aglutinina pobre
IgG
A tipagem AB0 é feita com recurso à…
Aglutinação
Aglutininas
Anticorpos usados nas reações de aglutinação
A tipagem AB0 é feita com recurso a aglutinação em 4 poços. O que está em cada um desses poços?
1) Antigénio A
2) Antigénio B
3) Antigénio A e B
4) Nenhum antigénio
As reações de aglutinação usam-se para..
Tipagem AB0
Tipagem Rhesus
Identificação microbiana
Identificação de anticorpos contra antigénios bacterianos
Ao contrário da imunodifusão, as reações de aglutinação são…
Qualitativas, não quantitativas. Só dizem se o anticorpo existe.
A nefelometria mede…
Intensidade da luz refratada. (quanto mais luz refratada existe, mais imunocomplexos!)
A turbidimetria mede…
Intensidade da luz transmitida. (quanto mais luz transmitida, menos imunocomplexos)
A turbidimetria é mais vantajosa que a nefelometria quando..
A concentração de antigénios do sangue do doente é mais baixa
Por que motivo a nefelometria e a turbidimetria são tão usados para quantificação de antigénios e proteínas?
São automatizados
A nefelometria e turbidimetria são usadas para…
Doseamento de Ig
Doseamento de factores de complemento
Doseamento de proteínas de fase aguda
O que são factores reumatoides?
Anticorpos anti porção Fc da IgG utilizados no rastreio da artrite reumatóide.
Para além dos factores reumatoides, quais são os anticorpos pesquisados na artrite reumatoide?
Anti péptido cíclico citrulinado (CCP)
Nos ensaios competitivos, estamos a testar…
Se o doente tem anticorpos no soro.
Nos ensaios sandwich estamos a testar…
Se o doente tem antigénios no sangue
Qual é o Enzyme Immuno Assay mais usado?
ELISA
Enzimas usadas nos EIA
Fosfatase alcalina
Peroxidase de rábano
Glicose-6-fosfato desidrogenase
Beta-galactosidase
Aplicações do EIA (ELISA)
Doseamento de Ig Avaliação dos fatores do complemento Monitorização de serologia infeciosa (HIV, HBV, HCV, HAV, CMV, Rubéola, Toxoplasma) Monitorização de imunização Marcadores tumorais Dosear hormonas
O ELISpot avalia…
Produção de citocinas e perforinas
O que significa FIA?
FluroImmunoAssay
Quais são os 4 elementos da FIA?
Antigénio em fase sólida
Anticorpos da amostra
Anticorpos com enzima conjugada
Substrato fluorgénico
Principal aplicação de FPIA
Hormonas tiroideias (T4)
Aplicação da FEIA
IgE total e específica IgG e IgA Proteína catiónica eosinofílica Triptase Anticorpos autoimunes
Por que motivo a FEIA permite o doseamento de IgE específicas?
Porque na placa vamos ter alergénio!
O ISAC serve para…
Avaliação de IgE, IgG e IgA específicas
Qual é a grande vantagem do ISAC?
Permite testar vários tipos de antigénios/alergénios simultaneamente
Os ensaios que usam marcadores/sondas são ensaios de…
Rastreio
Mecanismo responsável por falsos positivos nos ensaios que usam marcadores/sondas
Reatividade cruzada
O ELISA é um teste de rastreio. Como confirmo um diagnóstico?
Immunoblot
Quais são os passos de um immunoblot?
1- Eletroforese
2- Blotting para membrana estável
3- Identificação da proteína com um anticorpo
O immunoblot é usado para…
Reações de hipersensibilidade mediadas por IgE
Serologia infecciosa
Auto-anticorpos
A imunofluorescência é usada em que doenças?
Infeciosa
Autoimune
Para que é que se usa a imunofluroescência direta?
Para detetar antigénios na superfície celular na anatomia patológica
A imunoflurescência indireta é particularmente importante para que doenças?
Autoimunes (ANA, ANCA, ASMA, Anti-TSH)
Infeciosas (deteção de anticorpos contra bichinhos)
Se eu não lavar os anticorpos em excesso, vou ter..
falsos positivos.
Quando faço uma imunofluorescência numa doença autoimune, tenho de ter atenção a duas coisas.
Titulação - permite quantificar
Padrão de distribuição - núcleo, nucléolos…
Principal teste da via clássica que permite detetar défices C1-C9
CH100/CH50
Principal teste que deteta défices D, B, P, H, I, C3 e C5-9
AH50
Qual é a diferença na preparação do CH50 e do AH50?
No CH50, os eritrócitos de animais devem ter imunocomplexos à superfície
Se eu tiver um CH50/100 alterado, mas um AH50 normal…
Há alteração de C1, C2 ou C4
Se eu tiver um CH50/100 normal mas um AH50 alterado…
Há alteração de factor D, B, P, H ou I
Se eu tiver um CH100 e um AH50 alterados…
Défice de C3
Défice de C5-9
OU
Consumo do complemento
Se eu tive um CH100 e AH50 alterados mas um C3 normal…
Tenho alteração de C5-9
Para dosear C3 e C4, uso…
Nefelometria/Turbidimetria
Para fazer o estudo funcional de C3 e C4 uso…
ELISA
IDR
No contexto de infeção, uma IgM positiva e IgG negativa significa…
Primeira infeção aguda
Uma infeção com IgG positiva e IgM negativa significa..
Infeção antiga
Uma infeção com IgM e IgG positivas significa…
1 - Estou em serconversão
2 - Reinfeção com IgG positiva e ligeiro aumento de IgM
Em caso de dúvida, o que é que eu testo para saber se a pessoa está infetada pela primeira vez?
A avidez.
Os anticorpos anti-DNA e anti-smith estão aumentado em…
LES
Os anticorpos anti-cardiolipina estão aumentados em…
SAAF
Quais são os anticorpos que devo procurar numa suspeita de SAAF?
Anti-cardiolipina
Anticoagulante lúpico
Anti-Beta2GPI
Quais são as típicas manifestações de SAAF?
Abortos
Tromboses
A SAAF pode ser secundária a…
Lúpus
Screening de autoanticorpos
Imunofluorescência indireta
Como confirmo a presença de autoanticorpos?
Ensaios imunoenzimáticos
Immunoblot
Reações de precipitação
Multiplex
Percentagem de pessoas que, pela imunofluorescência indireta têm ANA positivos sem patologia
3-15%
Substrato preferencial para pesquisa de ANA
Células Hep2
O teste para anticorpos anti-nucleares é positivo a partir de…
Título 1/160
Quais são os principais padrões de imunofluorescência indireta?
Difuso (+)
Mosqueado (++)
Centrómero
Nucleolar
O padrão de IFI difuso está associado a que anticorpos?
Anticorpos contra a estrutura da cromatina, anti-DNA, anti-histonas e anti-nucleossomas
O padrão de IFI difuso está associado a que patologias?
Lúpus Eritematoso Sistémico
Lúpus induzido por fármacos
Quais são os fármacos que causam mais Lúpus induzido por drogas?
Procainamida
Hidralazina
Quinidina
Anticorpos anti-histonas está muito ligado a…
Lúpus induzido por fármacos
O padrão de IFI mosqueado sugere…
Antigénios nucleares extraíveis (anti-RNP, Sm, SSA…)
Anticorpos específicos da Sínd. Sjögren
Anti-SSA
Anti-SSB
(padrão mosqueado)
Anti-RNP está associado a…
Doença mista do tecido conjuntivo (padrão mosqueado)
Anti-Sm está associado a…
LES
O padrão de IFI de centrómero está associado a…
CREST
Cirrose biliar primária
O que é CREST?
Forma limitada de Esclerose Sistémica. (esclerodermia)
O que significa CREST?
C- Calcinose R - Raynaud E - Dismotilidade esofágica S - ESclerodactilia T - Telangiectasias
O padrão nucleolar na IFI é sugestivo de…
Esclerose sistémica difusa
Se eu vejo um padrão nucleolar TENHO de pesquisar…
Anticorpos anti-Scl-70
Anticorpos anti-fibralina
Os anticorpos anti-Scl70 estão associados a…
Esclerodermia
Esclerose sistémica
Os anticorpos anti-fibralina estão associados a…
Esclerose sistémica
Padrão mosqueado está associado a que doenças?
Autoimunes reumáticas
LES
Doença mista do tecido conjuntivo
Sjögren
