Immuno : Anticorps Flashcards
Que sont les immunoglobulines ?
- Glycoprotéines
- Protéines sériques
Par quelle cellules sont produites les immunoglobulines ?
Lymphocytes B
Par quelles cellules sont sécrétées les AC ?
Plasmocytes
Pourquoi les plasmocytes sécrètent des AC ?
En réponse à une substance étrangère
Où trouve-t-on les immuoglobulines ?
- Plasma
- Liquides biologique
- Sécrétion
Différence entre immunoglobuline et AC ?
Immunoglobuline → Biochimistes
Anticorps → Immunologiste
=> C’est la même chose
Rôle des AC ?
Protection de l’organisme contre les infections microbiennes
Quelles sont les protéines sériques majoritaire que l’on trouve dans le sérum ?
- Albumine
- Globuline : γ, α1, α2, β
Rôle de l’albumine ?
Maintient de la pression osmotiques indispensable à la bonne répartition des liquides entre les vaisseaux et les tissus
Caractéristiques des globulines ?
- Groupe hétérogène de protéines
- grande et + soluble que l’albumine
Que sont les γ globulines ?
Les immunoglobulines !
Utilité de l’électrophorèse des globine et l’albumine ?
Diagnostique certaines maladie du système immunitaire → Immunité humorale +++
Que signifie une variation du taux d’albumine ?
Maladie rénale ou hépatique
Que signifie une variation des globuline alpha ?
Déficit immunitaire
Que signifie une variation des globulines gamma ?
Désordre immunologique
Qu’a permit de définir l’hétérogénéité de immunoglobuline ?
→ 5 classes d’immunoglobulines :
* IgG
* IgA
* IgM
* IgE
* IgD
Localisation des immunoglobulines ?
Région gamma globuline
Combien de pneumocoques différents existe-t-il ?
80 → Définis selon les antigènes capsulaires
Quels sont les pneumocoques les plus virulents ?
I, II et III
Qu’est-ce que la maladie de Kahler ?
Myélome multiple
Qu’est-ce qu’un myélome ?
Prolifération monoclonale d’un plasmocyte qui ne produit qu’un seul type d’AC
Part des protéines du myélome chez un patient atteint du myélome multiple ?
95% des immunoglobulines sérique
Quantité de LB produit par jour ?
1 à 2 milliards
Particularité des LB produits ?
Ils ont tous un AC unique
Quels sont les possibles scénarios lors de la reconnaissance d’un AG par un LB ?
- AG reconnu, LB s’excitent, se prolifèrent et s’arrête → Apoptose
- AG reconnu, LB s’excitent, se prolifèrent, par cytokines transformation en plasmocyte, sécrétion d’AC → élimination du pathogène
- AG reconnu, prolifération, transformation plasmocytes, acquisition gène oncotique → immortels → Myélome
Caractéristiques des plasmocytes des myélomes ?
Sécrétion excessive des immunoglobulines → urine des patients → Protéine de Bence-Jones
Qu’a permis l’étude du myélome multiple ?
Purification et cristalisation de la structure de base des immunoglobulines
Pourquoi ne peut on pas laisser les AC sous forme linéaire lors de leur production ?
Elle risque d’être dégradée
Comment les immunoglobulines se protège ?
En se mettant sous forme d’hélice alpha et feuillets bêtas → Structure secondaire, tertiaire ou quaternaire
Comment obtient on les structures 3D des AC ?
Par cristallographie
Structure des AC ?
- 2 chaines lourdes identiques
- 2 chaines légères identiques
- 1 partie variable sur chaque chaine
→ 4 chaines polypeptidiques - Groupement glucidique
- Ponts disulfures
Quelles sont les classes de régions constantes des chaines légères ?
- Kappa
- Lambda
Quelles sont les combinaisons possible de chaines légères ?
- Kappa-Kappa
- Lambda-Lambda
Prédominance de la chaine Kappa chez l’Ho et la souris ?
60/70%
Quelles sont les région hypervariable des domaines variable des AC ?
→ 3
* CDR1
* CDR2
* CDR3
Quel est le rôle des régions CDR ?
Site de liaison à l’AG → le paratope de l’AC
Qu’est-ce que la région “Fr” de la partie variable des AC?
Framwork region ou région charpente → partie avec le - de variabilité
De quelle nature sont les liaisons entre les épitopes et les paratopes ?
Liaison H → facilement réversible → nécessité d’une bonne affinité
Localisation des chaines disulfures dans l’AC ?
- 1 entre les chaines légère
- (Au moins) 2 entre les chaines lourdes
Localisation du groupement glucidique de l’AC ?
Sur la portion Fc de la chaine lourde
Caractéristiques du paratope ?
Structure 3D complémentaire à celle de l’épitope
Autre nom du complexe “antigène-anticorps” ?
Complexe immun
Localisation des parties constantes sur les chaines lourdes et légères ?
C-terminal
Localisation des parties variables sur les chaines légères et lourdes ?
N-terminal
Quels sont les domaines de la chaine légère ?
→ 2
* VL → variable
* CL → constant
Quels sont les domaines des chaines lourdes ?
- 1 VH → variable
- 3/4 CH → constants
Quels sont les différents CH présents sur les chaines lourdes ?
- CH1
- CH2
- CH3
(* CH4 → seulement IgM/IgE)
Que permet la région charnière ?
Flexibilité de l’AC pour aller chercher un AG
Quelles sont les parties qui diffèrent entre les différentes classe d’AC ?
Les parties constantes de la chaine lourde
Localisation des ponts disulfures intracaténaires ?
Sur les chaines lourdes et légères
Que forment les pont disulfure intracaténaires ?
Des domaines → 80 AA environ
Nombre de domaines sur les chaines lourdes ?
4 ou 5 → IgM et IgE
Nombre de domaines sur les chaines légères ?
2
Autre nom de la partie constante des chaines lourdes ?
Fc → fraction cristallisable
Localisation précise de la glycosylation des AC?
Domaine CH2
Que permet la glycosylation des AC ?
- Elimination des complexes immuns
- Solubilité des Ig
- Augmentation de la demie-vie de des AC
Quelle est la fonction des parties constantes des AC ?
Reconnaissance des AG
Quelle est la fonction des parties constante des AC ?
Fonction effectrice → transmission du message
Comment varient les chaines lourdes des AC ?
Selon les différentes classes et sous classes d’immunoglobulines
Nombre d’AA qui constituent chaque chaine lourde ?
450 AA
PM de chaque chaine lourde ?
50 KDa
Comment sont reliée les chaines lourdes entre elles ?
Par 1 ou plusieurs liaisons COVALENTES → ponts disulfures
Variabilité des chaines légères ?
Nulle → pas de différence entre les différentes classes d’AC
Nombre d’AA constituants les chaines légères ?
220 AA
PM des chaines légères ?
25 KDa
Localisation des ponts disulfures sur les chaines légères ?
- Inter chaine → liaison aux chaines lourdes
- Intra chaine
Part des Chaines légères Kappa chez l’Ho ?
2/3
Part des chaines lambda chez l’HO ?
1/3
Définition des domaines globulaires ?
Chaque domaine pris individuellement
Définition des domaines fonctionnels ?
2 domaines face à face → Au même niveau sur 2 chaines
Quelles sont les particularité des LB ?
- Ig et AC sur leur surface
- Possède 10^5 BCR sur sa membrane
- Capable de reconnaitre un AG dans la circulation par BCR
Qu’est-ce que le BCR ?
Immunoglobuline membranaire
Comment avec 23 000 gènes nous parvenons à produire 1 à 2 milliards d’AC par jour ?
→ Théorie du réarrangement
Comment est ciblée la variabilité d’un AC par rapport à un autre ?
Sur la partie variable
Comment est formé la partie variable d’un AC ?
Par le réarangement des différents segments des gènes des AC → V, D et J
Localisation des gènes V,D et J des AC chez l’Ho ?
Xsome 14
Principe di réarrangements des gènes de la partie variable des AC ?
Ensemble de jonction entre 3 segments V, D (et J → chaine lourde)
Nombre de segments V ?
50aine
Nombre de segment D ?
25
Nombre de segments J ?
6
Comment se fait le réarrangement des gènes V, D et J ?
Choix d’un seg D → Collage à un seg J → Obtention réarrangement DJ → Choix seg V →Collage à seg DJ → Partie variable VDJ → Collage à Cµ
Quels sont les AC naturellement produit ?
IgM
Pourquoi les AC IgM sont les AC produit naturellement ?
Car on colle au segment VDJ le segment constant le + proche → Cµ
Différence entre le réarrangement des gènes VDJ pour les chaines lourdes et légères ?
- Même fonctionnement sauf que pour chaine légère → Seulement segment V et J
- V et J sont différents entre la chaine lourde et légère
Comment sont déterminer la classe et la sous classe d’un AC ?
Par la nature de la partie constante des chaines lourde
Qu’est-ce que l’isotypie ?
Chez tous les individus de la même espèces : classes et sous classes possèdent des caractéristiques communes
Quelles sont les classes d’Ig existantes ?
- IgG
- IgM
- IgA
- IgE
- IgD
Quel gène code pour les IgG ?
Gamma
Quel gène code pour les IgA ?
Alpha
Quel gène code pour les IgM ?
Mu (µ)
Quel gène code pour les IgE ?
Epsilon
Quel gène code pour les IgD ?
Delta
Quel sont les AC ayant des sous classes ?
- IgG
- IgA
Quelles sont les sous classe d’IgG ?
→ 4
* IgG1 → Chaine lourde γ1
* IgG2 → γ2
* IgG3 → γ3
* IgG4 → γ4
Quelle sont les sous classes d’IgA ?
- IgA1→ chaines lourdes α1
- IgA2→ α2
Caractéristiques des IgG ?
- Classe principale d’AC
- 1/2 vie plasmatique = 21 J → 3 semaines
- Concentration : 6 à 16 mg/mL
Qu’est-ce qui différencie les sous classe d’IgG ?
Les charnières → nb de ponts disulfures
Caractéristiques des IgA ?
- 2ème classe d’AC sérique
- Concentration = 1 à 4 mg/mL
- Demie-vie : 3 à 4 J
Sous quelles formes retrouve-t-on les IgA ?
- Monomère
- Dimère
Structure des IgA dimérique ?
2 parties liée par chaine J (et parfois pièce sécrétoire)
Pourquoi la forme dimérisée des IgA existe ?
Pour protéger les IgA des enzymes protéolytiques)
Localisation de la forme monomérique des IgA ?
Sérum
Localisation de la forme dimérique des IgA ?
- Sérum
- Sécrétion ++++
Caractéristique de la chaine J ?
- Peptide riche en cystéines
- 137 AA
- PM = 15 kDa
- Origine plasmocytaire
Différence entre les dimère d’IgA dans le sérum et dans les sécrétion ?
Dans les sécrétion chaine J + pièce sécrétoire !
Caractéristique de la pièce sécrétoire ?
- Glycoprotéine
- 70 kDa
Rôle de la pièce sécrétoire ?
Protection de IgA contre les enzyme protéolitiques
Quand se fait l’ajout de la pièce sécrétoire sur les IgA ?
Durant son transfert à travers la cellule épithéliale
Comment les IgA sont captés par les cellules épithéliale ?
Par un récepteur poly → plgR
Quelles sont les formes existante d’IgM ?
- Monomérique
- Pentamérique
Localisation de la forme monomérique des IgM ?
Surface de la membrane des LB
Localisation de la forme pentamérique des IgM ?
Dans le sérum → Forme sécrété par les plasmocytes
Comment se fait la forme pentamérique de l’IgM ?
- 5 mono reliés par ponts disulfures
- Chaine J à l’extrémité de 2 monomères
Caractéristiques des IgM ?
- Concentration : 0,5 à 3,5 mg/mL
- Demie vie : 3 à 4 J
Par des IgD parmi les immunoglobulines sériques ?
- de 1%
Caractéristiques de IgD ?
- Coexprimés à la surface des LB
- Concentration : 20 à 50 µg/mL
- demie-vie : 3/4 J
Rôle des IgD ?
HYPOTHESE :
Charnière hyperflexible permet la recherche des AG très espacés ou très rapprochés
Caractéristiques des IgE ?
- Défense parasitaire
- Concentration : 10 à 100 ng/mL
Rôle (actuellement en France) es IgE ?
Allergie (→ Ils s’ennuient car plus de parasites)
Variation des ponts disulfures des au niveau des charnières des IgG ?
2 à 11 ponts disulfures
Part des différents IgA ?
- IgA1 → 90%
- IgA2 → 10%
Différence entre IgA1 et IgA2 ?
Absence de pont disulfure entre chaine lourde et légère pour l’IGA2
Comment IgA s’adapte pour réduire se vulnérabilité au protéase microbienne ?
- IgA1 → Charnière fortement glycosysée
- IgA2 → région charnière tronquée
Rôle des IgG ?
- Défense de l’organisme contre les maladies infectieuses
Pourquoi la part des IgG est si importante dans le cadre de la grossesse ?
La mère est capable de transmettre les IgG&, 3 et 4 pour protéger l’enfant après sa naissance jusqu’à 4 mois
Rôles des IgG1, 3 et 4 ?
Défense du fœtus et nourrisson contre l’infection
Propriété biologique des IgA ?
- Classe principale des AC dans les sécrétion
- Première ligne de défense locale contre les agents infectieux
Quelles sont les sécrétions où sont présentes les IgA ?
- Salive
- Larmes
- Lait
- Sécrétions muqueuse
Propriété biologique des IgM ?
- 1er AC synthétisés
- AC faible affinité
- AC naturelles
- Présence transitoire
- Diagnostic des primo-infection
Propriété biologique des IgD ?
- Surface des cellules des cellules B (avec IgM)
- Faible concentration dans le sérum
Propriété biologiques des IgE ?
- Etat de trace dans le sérum
- Rôle bénéfique dans l’immunité antiparasitaire
- Néfaste dans les allergie de type I
Quelles sont les isotypie (Ig) ?
Classes + sous classes d’Ig qui possède des caractères propres dans une espèce donnée → ce sont les isotypes
Où se trouve les isotope des Ig ?
Sur la partie constante des chaines lourde et légère (IgA, IgG, IgM…)
Qu’arrive-t-il s’il on injecte des isotope d’une espèce à une autre espèce ?
Entraine la synthèse d’AC anti-isotypes
Qu’est-ce que l’allotypie (Ig) ?
Variation génétique entre les individus au sien d’une même espèce (2 IgG mais pas même génétique)
Localisation des allotypie chez l’Ho ?
Domaines constant des chaines lourds et légers
Qu’est-ce que l’idiotypie ?
Variabilité associée au site d’AG
Localisation de l’idiotypie ?
Partie variable des chaine lourdes et légères
Où se fait la synthèse des chaines lourdes et légères ?
Les 2 sont synthétiser dans le RE
Où sont associées les chaines lourdes et légères ?
Dans le RE
Où se fait la glycosylation des AG ?
Vésicules golgiennes
Que se passe-t-il après la glycolisation des Ig ?
Ils sont soit dirigés vers :
* La sécrétion
* La membrane
Rôle de la partie variable de l’AC ?
Reconnaissance de l’AG
Rôle de la partie variable de la partie constante de l’AC ?
Fonction effectrice
Où sont situées les plus grandes variation génétiques des Ig ?
Au niveau des CDRs (1, 2 et 3) de la région variable de la chaine lourde
Comment se fait l’interaction AG-AC ?
Par une réaction réversible et une réaction spécifique
Pourquoi la réaction AG-Ac est réversible ?
Car le complexe formé tient par des liaisons de faible énergie → Rompue par des variantions des paramètres physisco-chimiques
Quels sont les paramètres capable de brisée les liaisons faibles ?
- pH
- T°
- Force ionique
Que forme l’interaction AG-AC ?
Un complexe AG-AC
Pourquoi la réaction AG-AC est spécifique ?
1 paratope pour 1 épitope
Quels sont les buts d’utilisation des propriétés des complexes immun en laboratoire ?
- Méthode qualitative : détection AG-AC
- Méthode quantitative : Dosage AG-AC
Quelles sont les méthodes qualitative ou quantitative réalisable sur les AG et AC ?
Détection d’un signal visible
* Directement → précipitation
* Indirectement
Quelles sont les méthode indirecte de détection d’un signal visible pour doser/qualifier les AG et AC ?
- Marqueur radio-isotypique
- Marqueur enzymatique
- Marqueur fluorescent
Quelles sont les grandes fonctions biologiques des AC ?
1) Neutralisation de l’AG
2) Opsonisation
3) Activation du complément
→ élimination du pathogèneC
Comment l’AC participe à l’opsonisation ?
Fixe l’AG et facilite sa tâche pour être phagocyté
Quelles sont les molécules qui ont permis d’élucider la relation entre la structure et la fonction de l’AC ?
Enzymes protéolytiques
* Papaïne
* Pepsine
* Béta mercapto éthanol
Qu’arrive-t-il quand on met des AC en présence de leur AG spécifique ?
Immunoprécipitation
Que se passe-t-il lorsque que l’on traite les AG avec le β-mercapto éthanol ?
Cassage des pont disulfure
Qu’obtient on après avoir traité les AC avec du β-mercatpo éthanol ?
2 pic chromatographique :
→ 1 = chaines lourdes : 50 kDa
→ 1 = Chaines légères : 25 kDa
Que sa passe-t-il lorsque l’on place les AC traités au β-mercapto éthanol avec leur AG spécifique ?
Il n’y a pas de fixation, il n’y a pas d’immunoprécipitation
Sur quelle partie de la structure des AC la papaïne agit ?
Les charnières → Coupe au dessus des ponts disulfures qui relient les 2 chaine H
Qu’obtient on lorque l’on traite des AC avec de la papaïne ?
→ 3 fractions :
* 2 segments Fab
* 1 segment Fc
Que veut dire Fan ?
Fraction antigène binding
Que veut dire Fc ?
Fraction cristalisable
Que sont les fragment Fab ?
1 chaine légère + 1 fragment de la chaine lourde → se fixent à l’AG
Qu’est-ce que le fragment Fc ?
Moitié C-ter de la chaine lourde → fonctions liées à la classe ou la sous classe
Que se passet-t-il lorsque l’on met des AC traité à la papaïne en présence de leur AG spécifique ?
Il y a fixation mais pas d’immunoprécipitation
Action de la pepsine sur les AC ?
Coupe l’AC en dessous du/des ponts disulfure qui relient les chaines H
Qu’obtient on après l’action de la pepsine sur les AC ?
- 1 gros fragment (Fab’)2 = 2 fragments Fab
- 2 produits de dégradation du fragment Fc
Que se passe-t-il lorsque l’on met des AC traité à la pepsine en présence de leurs AG spécifiques ?
Il y a fixation, il y a immunoprécipitation
Qu’est-il nécessaire pour obtenir une immunoprécipitation ?
Avoir les 2 fragments Fab → (Fab’)2
Que produit un organisme en présence de fragment Fc étrangers ?
Des AC anti-fragments Fc
Que produit un organisme en présence de fragment Fab étrangers ?
Des AC anti-fragment Fab
Contre quoi sont produits les AC utilisé dans le cadre de la dégénérescence de la macula liée à l’âge ?
Ce sont des AC anti-VEGF (seulement fragment Fab)
Qu’est-ce que la macula ?
Zone qui donne la viqion
Part de la population touchée par la dégénérescence de la macula liée à l’âge ?
1/3
Quel est la molécule responsable de la dégénérescence de la macula liée à l’âge ?
Une cytokine : VEGF → facteur de croissance de l’épithélium vasculaire
Fab est un inhibiteur ou activateur ?
Activateur
Fc est un inhibiteur ou un activateur ?
Inhibiteur
Que signifit Fc ?
Fonction cristalisable
Que comprenne les régions constantes des AC ?
La faction Fc et une partie de la fraction Fab
Que comprennent les régions variables d’un AC ?
Une PARTIE de la région Fab
D’où viennent les notion de valence, affinité et avidité ?
L’AC ne peut précipiter des AG ayant plusieurs sites de liaisons avec lui
Qu’est-ce que la valence d’un AC ?
Nombre de site de liaison par molécule d’AC sur un AG
Qu’est-ce l’affinité d’un AC ?
La force d’interaction d’un épitope avec un paratope
Qu’est-ce que l’avidité ?
La force globale de liaison d’une molécule d’AC avec un AG
Quel est le meilleur AC ?
Celui qui a une super affinité avec l’AG
Qu’est-ce l’affinité (en général) ?
Force des interaction non covalente entre un site de fixation d’AG sur un suel site de fication d’AC
Qu’est-ce qui détermine l’affinité d’un AC ?
Sa constante d’association Ka
Valeur du Ka d’un AC de faible affinité ?
10^4 à 10^5 L/mol
Valeur de Ka D’un AC de forte affinité ?
10^9 à 10^11 L/mol
Qu’est-ce que l’avidité d’un AC ?
La force d’interaction multiple d’un AC multivalent avec un AG
Qu’est-ce que l’affinité de l’AC
Force des interactions non covalentes entre un site de fixation d’AG sur un seul site de fixation d’AC
Nombre d’épitope sur un AG ?
1 à des milliers → mosaïque d’épitopes
Que sont les AC polyclonaux ?
Mélange d’AC reconnaissant un AG donnée
Origine des AC polyclonaux ?
Chaque AC est sécrété par un clone de plasmocyte différent
Que sont les AC monoclonaux ?
AC ne reconnaissant qu’un seul type d’épitope sur un AG donné
Origine des AC monoclonaux ?
Identique → issus d’un même clone de plasmocyte
Quelles sont les caractéristiques des AC polyclonaux ?
Entre eux :
* Affinité différente
* Immunogénicité différente
* Notion linéaire et conformationnelle
* Concentration différente
* Réaction croisée entre les AC
Quelle est la nature de la réponse immunitaire in vivo (polyclonale ou monoclonale) ?
Polyclonale SAUF vaccination
Que reconnaissent les AC polyclonaux ?
Les différent épitopes d’un même AG
Utilisation des AC monoclonaux en biologie et en médecine ?
Outils diagnostic et buts thérapeutique
Que signifie “mab” ?
Monoclonal antibody
DCI chimérique ?
- ximab
DCI humanisés ?
-zumab
DCI humain ?
-umab
Pourquoi les AC murins ne fonctionnent pas bien ?
Une fois injecté chez l’Ho ils sont détruit par les AC
Utilisation spécifique des AC monoclonaux ?
- Test de grosses
- Ttt des hémopathies malignes
- ttt pathologies auto-immune
- Recherche biologie (western blot, ELISA, cyrtométrie …)
Quel sont les molécules utilisées pour générer des AC monoclonaux ?
Hybridomes : LT + myélome
Taux de fusion des cellules de rate et myélome ?
1/10^5 cellules → Très faible → production d’AC monoclonaux difficile
Comment sont produits les AC monoclonaux aujourd’hui ?
Par génie génétique
