Techniques d’immunoprécipitation Flashcards
Les techniques immunologiques sont basées sur la ______________________.
réaction de l’antigène avec son anticorps spécifique
Le but des techniques immunologiques est principalement ______, _______ ou _________ des __________ ou des ____________.
Détection, identification (analyse qualitative) ou dosage (analyse quantitative) des anticorps ou des antigènes.
Caractéristiques de la liaison paratope/épitope: __________, __________, __________, _______________.
- Bonne complémentarité;
- Stéréospécificité;
- Non-covalence;
- Faiblesse.
La réaction Ag-Ac dépend du point de vue thermodynamique de _______________.
Affinité
La réaction Ag-Ac est ______, _________et _________ libérant de la chaleur (__ à __ kCal par mole).
spécifique;
réversible;
exothermique;
2 à 40.
L’affinité décrit l’___________ des forces de la liaison du complexe Ag-Ac. C’est donc la sommes des _________ et __________.
intensité;
forces attractives + répulsives
Une meilleure complémentarité entre l’épitope et le paratope conduit à une plus grande affinité. (V/F)
V
La _________________ est une mesure de l’affinité entre un anticorps (Ac) et un antigène (Ag).
constante de dissociation (Kd)
Plus la Kd est faible, plus l’affinité est _____.
forte
Kd = ___________________________.
Kd= [Ac][Ag] / [Ac−Ag]
La constante d’association (Ka) est égale à ______________.
Ka= [Ag-Ac] / [Ac] [Ag]
Kd=1/Ka. (V/F)
V
L’avidité est un terme utilisé pour décrire la force globale de liaison entre un ___________________ et un _________________________.
anticorps multivalent (au moins bivalent);
antigène multivalent.
On peut dire que l’avidité est la somme des _________________.
affinités intrinsèques
L’interaction au niveau d’un seul site Ac réduit la probabilité de rencontre au niveau du 2ème site. (V/F)
F: augmente
La somme théorique entre les affinités intrinsèques de chaque site est _______ à l’affinité réelle.
très inférieure
L’avidité dépend de plusieurs facteurs: ____________, _____________, _____________, _________________.
- Constante d’association;
- Valence de l’anticorps;
- Epitopes de l’antigène;
- Conditions du milieu réactionnel (pH, température, force ionique).
Au cours d’une réaction immunitaire, l’affinité augmente mais l’avidité reste la même. (V/F)
F: Elles augmentent toutes les deux
Effets du pH sur la liaison Ac-Ag: ____________________, __________________.
- Modification de l’ionisation et donc des interactions;
- Dénaturation des protéines aux pH extrêmes.
Au laboratoire, pour les techniques immunologiques, on travaille à pH ___ ou on a recours à des________.
07;
solutions tampons.
Une température ________ dénature les protéines.
dénature
La température intervient dans ___________ de la liaison Ac-Ag.
Agitation moléculaire
Au laboratoire, pour les techniques immunologiques, on travaille à __°C ou à température ambiante.
37°C
L’augmentation de la force ionique diminue la liaison Ag-Ac. (V/F)
V
Les __________, au-delà de certaines températures, modifient la forme des protéines et peuvent même les dénaturer.
solvants organiques
Il est déconseille d’utiliser les ____________ dans les techniques immunologiques.
solvants organiques
La force ionique peut être ajustée en modifiant la concentration de ____ dans les tampons.
sels
La ____________ de la réaction Ag-Ac permet d’identifier un des éléments de la réaction lorsque l’autre est connu.
spécificité
Des réactions croisées peuvent avoir lieu si ________________ ou ________________.
- Deux antigènes différents avec des épitopes en commun;
- Epitope avec structure chimique similaire et proche de l’original.
Caractéristiques des anticorps monoclonaux:
Affinité: _________;
Avidité: __________;
Réseau de complexe immuns: ____________;
Temps de production: ____________;
Quantité produite: _____________;
Homogénéité des lots: ___________;
Spécificité épitopique: ____________;
Réactions croisées: ________________;
Détection de molécules faiblement exprimées: ________________.
Affinité: ++
Avidité: +
Réseau de complexe immuns: +/-
Temps de production: Court
Quantité produite: illimitée mais dépend du volume de chaque lot
Homogénéité des lots: +++
Spécificité épitopique: +++
Réactions croisées: Limitées
Détection de molécules faiblement exprimées: Limitée (monospécificité épitopique)
Caractéristiques des anticorps polyclonaux:
Affinité: _________;
Avidité: __________;
Réseau de complexe immuns: ____________;
Temps de production: ____________;
Quantité produite: _____________;
Homogénéité des lots: ___________;
Spécificité épitopique: ____________;
Réactions croisées: ________________;
Détection de molécules faiblement exprimées: ________________.
Affinité: +
Avidité: ++
Réseau de complexe immuns: ++
Temps de production: Long
Quantité produite: Limitée
Homogénéité des lots: +
Spécificité épitopique: +
Réactions croisées: Possibles
Détection de molécules faiblement exprimées: Améliorée (variété des spécificités)
Selon la présence de _________ ou de _________, on distingue deux types de méthodes immunologiques.
traceur ou marquage
Les méthodes immunologiques sans traceur concernent surtout les anticorps (monoclonaux/polyclonaux/les deux).
polyclonaux
Les méthodes immunologiques avec traceur concernent surtout les anticorps (monoclonaux/polyclonaux/les deux).
les deux
Dans les méthodes avec traceur, le signal Ag/Ac est directement visible. (V/F)
V
On cite parmi les méthodes immunologiques sans traceur: _________ et _________.
Immunoprécipitation;
Agglutination.
On cite parmi les méthodes immunologiques avec traceur: _________, _________, ___________ et _________.
- Méthode Radio isotopique;
- Méthode enzymatique;
- Méthode de fluorescence;
- Chimiluminescence.
Le phénomène d’immunoprécipitation apparait suite à la réaction entre un ______________ et un _______________________.
antigène soluble;
anticorps précipitant (IgG, IgM).
Immunoprécipitation
Le précipité est dû à la formation d’un ________________entre des antigènes au moins __________ et des ________________________.
réseau macromoléculaire tridimensionnel;
bivalents;
anticorps spécifiques multivalents.
Les haptènes donnent des précipités stables en immunoprécipitation. (V/F)
F: Les haptènes ne donnent pas de précipités
L’immunoprécipitation est une méthode peu sensible. (V/F)
V
L’immunoprécipitation se fait en milieu ____ ou ____ avec des antigènes ________.
liquide ou gélifié;
solubles.
__________ est une méthode de précipitation qualitative en milieu liquide.
Précipitation en anneau (Ring test)
Principe du ring test
Dans le fond d’un tube de ___________ on introduit l’anticorps, puis on dépose délicatement l’antigène.
faible section
Un ring test est positif si il y a ____________________________.
Apparition en moins de 05 minutes d’un anneau à l’interface.
L’application principal du ring test est ___________________________.
Suivi de l’évolution d’animaux producteurs d’immun sérums en cours d’immunisation.
Les méthodes d’immunoprécipitation quantitatives en milieu liquide sont __________ et ___________.
Turbidimétrie;
Néphélémétrie.
La Turbidimétrie et la Néphélémétrie reposent sur la mesure de ________________et_______________ respectivement.
Lumière transmise et dispersée
Le signal de la turbidimétrie est ___________ à la concentration de l’antigène.
inversement proportionnel
La turbidimétrie fait souvent recours à des _____________.
automates
Le signal de la néphélémétrie est ___________ à la concentration de l’antigène.
proportionnel
Pour la turbidimétrie et la néphélémétrie, on utilise une source de lumière __________________.
monochromatique
Les applications de la turbidimétrie et de la néphélémétrie: ________________, _______________, _______________.
Dosage des protéines sériques (albumine, haptoglobine, immunoglobulines…);
Dosage des protéines rachidiennes;
Dosage des protéines urinaires.
Les avantages des milieux gélifiés sont ________________ et _______________.
Contrôle de diffusion;
Contrôle de gradient de concentration des complexes Ag-Ac.
Les méthodes de précipitation en milieu gélifié qualitatives sont: ___________, __________, ___________, ___________, ____________.
a. Méthode d’Oudin;
b. Méthode d’Ouchterlony = Immunodiffusion double;
c. Électrosynérèse;
d. Immunoélectrophorèse (IEP);
e. Immunofixation.
Les méthodes de précipitation en milieu gélifié quantitatives sont: ___________, __________.
a. Immunodiffusion radiale= Mancini;
b. Immuno-électroquantification= Laurell.
Principe de la technique d’Oudin: ___________________, __________________, ____________________, _____________________.
Un gel d’agar ou d’agarose est préparé et placé dans un tube vertical;
Une solution d’anticorps est mélangée uniformément avec le gel;
Une solution contenant les antigènes est déposée en haut du gel;
La formation du complexe Ag-Ac conduit à la précipitation de ce dernier et la formation de bandes ou de lignes précipitées visibles dans le gel.
La technique d’Oudin est utilisée pour ______________ et ______________.
Détection d’antigènes;
Séparation de plusieurs systèmes précipitants.
La présence de plusieurs systèmes précipitants est révélée par la formation de ___________ ou _____________ dans la technique d’Oudin.
plusieurs bandes ou arcs de précipitation
L’immunodiffusion double selon Ouchterlony est une technique classique utilisée pour étudier les interactions entre antigènes et anticorps dans un gel d’_________.
agarose
Principe de la méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double): ___________________, ___________________, _________________, ___________________.
- Un gel d’agarose est préparé et versé dans une plaque de Petri;
- Des puits sont creusés dans le gel pour y déposer les solutions d’antigènes et d’anticorps;
- Les puits sont disposés de manière régulière et symétrique. Généralement, un puits central pour les anticorps est entouré de plusieurs puits pour les antigènes;
- Lorsque les antigènes rencontrent leurs anticorps spécifiques à des concentrations optimales, des complexes immuns insolubles se forment et précipitent, créant des lignes de précipitation visibles dans le gel.
Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si les lignes de précipitation fusionnent, cela indique: ___________________.
Les antigènes ont les mêmes épitopes (identité).
Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si les lignes se croisent sans fusionner, cela indique: __________________________.
Les antigènes sont distincts (absence de réactivité croisée ou non identité).
Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si une ligne de précipitation forme une éperon (spur), cela indique: ________________________________.
Les antigènes partagent certains épitopes mais en diffèrent d’autres (identité partielle).
Les applications de la méthode Ouchterlony: ________________ et _________________.
Déterminer la pureté d’une solution antigénique;
Préciser la spécificité d’un sérum immun.
Un exemple concret d’application de la méthode Ouchterlony est ______________________.
La recherche de la protéinurie de Bence Jonse.
Les protéinuries de Bence Jones correspondent aux _____________ synthétisées en excès.
chaînes légères libres (κ ou λ)
L’Electrosynérèse utilise le principe d’une double diffusion en gélose, accélérée par une ___________________.
migration électrophorétique
Principe de l’Electrosynérèse: __________________, _________________, ________________, ________________, _____________________.
- Installation du gel dans la cuve;
- Faire en sorte que les puits antigènes chargés négativement sont à la cathode et les anticorps à l’anode;
- Application d’un courant pour accélérer la diffusion naturelle;
- Migration rapide des antigènes vers l’anode et les anticorps vers la cathode;
- Formation d’un trait de précipitation (Ag-Ac) à l’équivalence.
Les applications de l’Electrosynérèse: ________________________ et __________________.
- Détection simultanée Ag/AC (Ag Hbs/ anti-Hbs);
- Recherche d’auto-Ac anti-Ag nucléaires solubles.
L’Electrosynérèse est une technique accélérée de la méthode _________________.
Ouchterlony
Principe de l’Immuno-électrophorèse (IEP): __________________, ________________, ________________, _______________, _________________.
- Préparation du gel d’agarose ou d’agar;
- Dépôt des échantillons d’antigènes dans les puits;
- Application d’un champ électrique pour séparer les antigènes en bandes distinctes;
- Ajout d’anticorps le long d’une tranchée parallèle aux bandes d’antigènes;
- Diffusion des anticorps et formation d’arcs de précipitation.
L’Immuno-électrophorèse (IEP) se passe en deux temps: _____________ et ___________.
Electrophorèse;
Immunoprécipitation.
Applications de l’IEP: ______________________.
Recherche et identification d’immunoglobulines monoclonales.
L’__________________________ est une technique analytique utilisée pour identifier et caractériser des protéines spécifiques dans un mélange complexe de protéines.
Immunofixation (ou électrophorèse d’immunofixation, IFE)
Principe et étapes de l’IFE: ___________________, _________________, _________________, ___________________, __________________________.
- Séparation des protéines de l’échantillon par électrophorèse sur un gel d’agarose;
- Les bandes de gel sont recouvertes avec des antisérums spécifiques dirigés contre les différentes classes ou sous-classes d’immunoglobulines (IgG, IgA, IgM, chaînes légères kappa et lambda);
- Les antisérums fixent les immunoglobulines présentes dans les bandes de gel, formant des complexes immuns insolubles;
- Le gel est lavé pour enlever les protéines non fixées et les immunoglobulines non liées;
- Les complexes immuns sont visualisés en colorant le gel avec un colorant protéique comme le bleu de Coomassie ou l’argent.
IFE est utilisée dans _________________________________.
Diagnostic des Gammapathies Monoclonales
Principe et étapes de l’Immunodiffusion Radiale de Mancini: ______________, ____________, ____________, ___________, _____________, ______________, _____________, ____________, ________________.
- Un gel d’agarose est préparé et versé dans une plaque de Petri ou sur une lame de verre;
- Des anticorps spécifiques dirigés contre l’antigène d’intérêt sont uniformément incorporés dans le gel avant sa solidification;
- Des puits sont creusés dans le gel solidifié, généralement de petite taille et espacés uniformément;
- Les échantillons contenant l’antigène à quantifier sont déposés dans ces puits;
- L’antigène diffuse radialement à partir du puits dans le gel;
- Lorsqu’il rencontre les anticorps dans le gel, des complexes immuns insolubles se forment, créant un anneau de précipitation autour du puits;
- Après un temps d’incubation suffisant (généralement 24 à 48 heures), les anneaux de précipitation atteignent leur taille maximale;
- Le diamètre des anneaux est mesuré à l’aide d’une règle ou d’un autre dispositif de mesure;
- La concentration de l’antigène dans les échantillons est déterminée en comparant les diamètres des anneaux à une courbe standard établie avec des concentrations connues de l’antigène.
Application de l’Immunodiffusion Radiale de Mancini: ______________________.
Dosage des protéines (complément C2, C1q.., AFP, IgD….)
Principe et étapes de l’Immunoélectroquantification de Laurell: ___________, ______________, ______________, ______________, ______________, _______________, _______________, _______________.
- Un gel d’agarose est préparé et incorporé avec des anticorps spécifiques dirigés contre l’antigène à quantifier;
- Le gel est coulé sur une plaque de verre ou dans un support approprié;
- Des puits sont creusés dans le gel. Les échantillons contenant l’antigène à quantifier sont déposés dans ces puits;
- Une fois les échantillons déposés, une tension électrique est appliquée pour entraîner la migration des antigènes hors des puits;
- Les antigènes migrent à travers le gel et forment des complexes immuns avec les anticorps incorporés dans le gel;
- Les complexes immuns insolubles se forment en bandes de précipitation au fur et à mesure que les antigènes migrent à travers le gel;
- Après la fin de l’électrophorèse, la distance migrée par les bandes de précipitation est mesurée;
- La concentration de l’antigène dans les échantillons est déterminée en comparant la distance migrée avec une courbe standard obtenue à partir de concentrations connues de l’antigène.
