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Immunologie > Techniques d’immunoprécipitation > Flashcards

Techniques d’immunoprécipitation Flashcards

1
Q

Les techniques immunologiques sont basées sur la ______________________.

A

réaction de l’antigène avec son anticorps spécifique

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Q

Le but des techniques immunologiques est principalement ______, _______ ou _________ des __________ ou des ____________.

A

Détection, identification (analyse qualitative) ou dosage (analyse quantitative) des anticorps ou des antigènes.

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3
Q

Caractéristiques de la liaison paratope/épitope: __________, __________, __________, _______________.

A
  • Bonne complémentarité;
  • Stéréospécificité;
  • Non-covalence;
  • Faiblesse.
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4
Q

La réaction Ag-Ac dépend du point de vue thermodynamique de _______________.

A

Affinité

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5
Q

La réaction Ag-Ac est ______, _________et _________ libérant de la chaleur (__ à __ kCal par mole).

A

spécifique;
réversible;
exothermique;
2 à 40.

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6
Q

L’affinité décrit l’___________ des forces de la liaison du complexe Ag-Ac. C’est donc la sommes des _________ et __________.

A

intensité;
forces attractives + répulsives

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7
Q

Une meilleure complémentarité entre l’épitope et le paratope conduit à une plus grande affinité. (V/F)

A

V

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8
Q

La _________________ est une mesure de l’affinité entre un anticorps (Ac) et un antigène (Ag).

A

constante de dissociation (Kd)

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9
Q

Plus la Kd est faible, plus l’affinité est _____.

A

forte

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10
Q

Kd = ___________________________.

A

Kd= [Ac][Ag] / [Ac−Ag]

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11
Q

La constante d’association (Ka) est égale à ______________.

A

Ka= [Ag-Ac] / [Ac] [Ag]

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12
Q

Kd=1/Ka. (V/F)

A

V

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13
Q

L’avidité est un terme utilisé pour décrire la force globale de liaison entre un ___________________ et un _________________________.

A

anticorps multivalent (au moins bivalent);
antigène multivalent.

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14
Q

On peut dire que l’avidité est la somme des _________________.

A

affinités intrinsèques

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15
Q

L’interaction au niveau d’un seul site Ac réduit la probabilité de rencontre au niveau du 2ème site. (V/F)

A

F: augmente

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16
Q

La somme théorique entre les affinités intrinsèques de chaque site est _______ à l’affinité réelle.

A

très inférieure

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17
Q

L’avidité dépend de plusieurs facteurs: ____________, _____________, _____________, _________________.

A
  • Constante d’association;
  • Valence de l’anticorps;
  • Epitopes de l’antigène;
  • Conditions du milieu réactionnel (pH, température, force ionique).
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18
Q

Au cours d’une réaction immunitaire, l’affinité augmente mais l’avidité reste la même. (V/F)

A

F: Elles augmentent toutes les deux

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19
Q

Effets du pH sur la liaison Ac-Ag: ____________________, __________________.

A
  • Modification de l’ionisation et donc des interactions;
  • Dénaturation des protéines aux pH extrêmes.
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20
Q

Au laboratoire, pour les techniques immunologiques, on travaille à pH ___ ou on a recours à des________.

A

07;
solutions tampons.

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21
Q

Une température ________ dénature les protéines.

A

dénature

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22
Q

La température intervient dans ___________ de la liaison Ac-Ag.

A

Agitation moléculaire

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23
Q

Au laboratoire, pour les techniques immunologiques, on travaille à __°C ou à température ambiante.

A

37°C

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24
Q

L’augmentation de la force ionique diminue la liaison Ag-Ac. (V/F)

A

V

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25
Q

Les __________, au-delà de certaines températures, modifient la forme des protéines et peuvent même les dénaturer.

A

solvants organiques

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26
Q

Il est déconseille d’utiliser les ____________ dans les techniques immunologiques.

A

solvants organiques

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27
Q

La force ionique peut être ajustée en modifiant la concentration de ____ dans les tampons.

A

sels

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28
Q

La ____________ de la réaction Ag-Ac permet d’identifier un des éléments de la réaction lorsque l’autre est connu.

A

spécificité

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29
Q

Des réactions croisées peuvent avoir lieu si ________________ ou ________________.

A
  • Deux antigènes différents avec des épitopes en commun;
  • Epitope avec structure chimique similaire et proche de l’original.
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30
Q

Caractéristiques des anticorps monoclonaux:
Affinité: _________;
Avidité: __________;
Réseau de complexe immuns: ____________;
Temps de production: ____________;
Quantité produite: _____________;
Homogénéité des lots: ___________;
Spécificité épitopique: ____________;
Réactions croisées: ________________;
Détection de molécules faiblement exprimées: ________________.

A

Affinité: ++
Avidité: +
Réseau de complexe immuns: +/-
Temps de production: Court
Quantité produite: illimitée mais dépend du volume de chaque lot
Homogénéité des lots: +++
Spécificité épitopique: +++
Réactions croisées: Limitées
Détection de molécules faiblement exprimées: Limitée (monospécificité épitopique)

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31
Q

Caractéristiques des anticorps polyclonaux:
Affinité: _________;
Avidité: __________;
Réseau de complexe immuns: ____________;
Temps de production: ____________;
Quantité produite: _____________;
Homogénéité des lots: ___________;
Spécificité épitopique: ____________;
Réactions croisées: ________________;
Détection de molécules faiblement exprimées: ________________.

A

Affinité: +
Avidité: ++
Réseau de complexe immuns: ++
Temps de production: Long
Quantité produite: Limitée
Homogénéité des lots: +
Spécificité épitopique: +
Réactions croisées: Possibles
Détection de molécules faiblement exprimées: Améliorée (variété des spécificités)

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32
Q

Selon la présence de _________ ou de _________, on distingue deux types de méthodes immunologiques.

A

traceur ou marquage

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33
Q

Les méthodes immunologiques sans traceur concernent surtout les anticorps (monoclonaux/polyclonaux/les deux).

A

polyclonaux

34
Q

Les méthodes immunologiques avec traceur concernent surtout les anticorps (monoclonaux/polyclonaux/les deux).

A

les deux

35
Q

Dans les méthodes avec traceur, le signal Ag/Ac est directement visible. (V/F)

A

V

36
Q

On cite parmi les méthodes immunologiques sans traceur: _________ et _________.

A

Immunoprécipitation;
Agglutination.

37
Q

On cite parmi les méthodes immunologiques avec traceur: _________, _________, ___________ et _________.

A
  • Méthode Radio isotopique;
  • Méthode enzymatique;
  • Méthode de fluorescence;
  • Chimiluminescence.
38
Q

Le phénomène d’immunoprécipitation apparait suite à la réaction entre un ______________ et un _______________________.

A

antigène soluble;
anticorps précipitant (IgG, IgM).

39
Q

Immunoprécipitation
Le précipité est dû à la formation d’un ________________entre des antigènes au moins __________ et des ________________________.

A

réseau macromoléculaire tridimensionnel;
bivalents;
anticorps spécifiques multivalents.

40
Q

Les haptènes donnent des précipités stables en immunoprécipitation. (V/F)

A

F: Les haptènes ne donnent pas de précipités

41
Q

L’immunoprécipitation est une méthode peu sensible. (V/F)

A

V

42
Q

L’immunoprécipitation se fait en milieu ____ ou ____ avec des antigènes ________.

A

liquide ou gélifié;
solubles.

43
Q

__________ est une méthode de précipitation qualitative en milieu liquide.

A

Précipitation en anneau (Ring test)

44
Q

Principe du ring test
Dans le fond d’un tube de ___________ on introduit l’anticorps, puis on dépose délicatement l’antigène.

A

faible section

45
Q

Un ring test est positif si il y a ____________________________.

A

Apparition en moins de 05 minutes d’un anneau à l’interface.

46
Q

L’application principal du ring test est ___________________________.

A

Suivi de l’évolution d’animaux producteurs d’immun sérums en cours d’immunisation.

47
Q

Les méthodes d’immunoprécipitation quantitatives en milieu liquide sont __________ et ___________.

A

Turbidimétrie;
Néphélémétrie.

48
Q

La Turbidimétrie et la Néphélémétrie reposent sur la mesure de ________________et_______________ respectivement.

A

Lumière transmise et dispersée

49
Q

Le signal de la turbidimétrie est ___________ à la concentration de l’antigène.

A

inversement proportionnel

50
Q

La turbidimétrie fait souvent recours à des _____________.

A

automates

51
Q

Le signal de la néphélémétrie est ___________ à la concentration de l’antigène.

A

proportionnel

52
Q

Pour la turbidimétrie et la néphélémétrie, on utilise une source de lumière __________________.

A

monochromatique

53
Q

Les applications de la turbidimétrie et de la néphélémétrie: ________________, _______________, _______________.

A

Dosage des protéines sériques (albumine, haptoglobine, immunoglobulines…);
Dosage des protéines rachidiennes;
Dosage des protéines urinaires.

54
Q

Les avantages des milieux gélifiés sont ________________ et _______________.

A

Contrôle de diffusion;
Contrôle de gradient de concentration des complexes Ag-Ac.

55
Q

Les méthodes de précipitation en milieu gélifié qualitatives sont: ___________, __________, ___________, ___________, ____________.

A

a. Méthode d’Oudin;
b. Méthode d’Ouchterlony = Immunodiffusion double;
c. Électrosynérèse;
d. Immunoélectrophorèse (IEP);
e. Immunofixation.

56
Q

Les méthodes de précipitation en milieu gélifié quantitatives sont: ___________, __________.

A

a. Immunodiffusion radiale= Mancini;
b. Immuno-électroquantification= Laurell.

57
Q

Principe de la technique d’Oudin: ___________________, __________________, ____________________, _____________________.

A

Un gel d’agar ou d’agarose est préparé et placé dans un tube vertical;
Une solution d’anticorps est mélangée uniformément avec le gel;
Une solution contenant les antigènes est déposée en haut du gel;
La formation du complexe Ag-Ac conduit à la précipitation de ce dernier et la formation de bandes ou de lignes précipitées visibles dans le gel.

58
Q

La technique d’Oudin est utilisée pour ______________ et ______________.

A

Détection d’antigènes;
Séparation de plusieurs systèmes précipitants.

59
Q

La présence de plusieurs systèmes précipitants est révélée par la formation de ___________ ou _____________ dans la technique d’Oudin.

A

plusieurs bandes ou arcs de précipitation

60
Q

L’immunodiffusion double selon Ouchterlony est une technique classique utilisée pour étudier les interactions entre antigènes et anticorps dans un gel d’_________.

A

agarose

61
Q

Principe de la méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double): ___________________, ___________________, _________________, ___________________.

A
  • Un gel d’agarose est préparé et versé dans une plaque de Petri;
  • Des puits sont creusés dans le gel pour y déposer les solutions d’antigènes et d’anticorps;
  • Les puits sont disposés de manière régulière et symétrique. Généralement, un puits central pour les anticorps est entouré de plusieurs puits pour les antigènes;
  • Lorsque les antigènes rencontrent leurs anticorps spécifiques à des concentrations optimales, des complexes immuns insolubles se forment et précipitent, créant des lignes de précipitation visibles dans le gel.
62
Q

Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si les lignes de précipitation fusionnent, cela indique: ___________________.

A

Les antigènes ont les mêmes épitopes (identité).

63
Q

Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si les lignes se croisent sans fusionner, cela indique: __________________________.

A

Les antigènes sont distincts (absence de réactivité croisée ou non identité).

64
Q

Méthode Ouchterlony (Immunodiffusion double)
Si une ligne de précipitation forme une éperon (spur), cela indique: ________________________________.

A

Les antigènes partagent certains épitopes mais en diffèrent d’autres (identité partielle).

65
Q

Les applications de la méthode Ouchterlony: ________________ et _________________.

A

Déterminer la pureté d’une solution antigénique;
Préciser la spécificité d’un sérum immun.

66
Q

Un exemple concret d’application de la méthode Ouchterlony est ______________________.

A

La recherche de la protéinurie de Bence Jonse.

67
Q

Les protéinuries de Bence Jones correspondent aux _____________ synthétisées en excès.

A

chaînes légères libres (κ ou λ)

68
Q

L’Electrosynérèse utilise le principe d’une double diffusion en gélose, accélérée par une ___________________.

A

migration électrophorétique

69
Q

Principe de l’Electrosynérèse: __________________, _________________, ________________, ________________, _____________________.

A
  • Installation du gel dans la cuve;
  • Faire en sorte que les puits antigènes chargés négativement sont à la cathode et les anticorps à l’anode;
  • Application d’un courant pour accélérer la diffusion naturelle;
  • Migration rapide des antigènes vers l’anode et les anticorps vers la cathode;
  • Formation d’un trait de précipitation (Ag-Ac) à l’équivalence.
70
Q

Les applications de l’Electrosynérèse: ________________________ et __________________.

A
  • Détection simultanée Ag/AC (Ag Hbs/ anti-Hbs);
  • Recherche d’auto-Ac anti-Ag nucléaires solubles.
71
Q

L’Electrosynérèse est une technique accélérée de la méthode _________________.

A

Ouchterlony

72
Q

Principe de l’Immuno-électrophorèse (IEP): __________________, ________________, ________________, _______________, _________________.

A
  • Préparation du gel d’agarose ou d’agar;
  • Dépôt des échantillons d’antigènes dans les puits;
  • Application d’un champ électrique pour séparer les antigènes en bandes distinctes;
  • Ajout d’anticorps le long d’une tranchée parallèle aux bandes d’antigènes;
  • Diffusion des anticorps et formation d’arcs de précipitation.
73
Q

L’Immuno-électrophorèse (IEP) se passe en deux temps: _____________ et ___________.

A

Electrophorèse;
Immunoprécipitation.

74
Q

Applications de l’IEP: ______________________.

A

Recherche et identification d’immunoglobulines monoclonales.

75
Q

L’__________________________ est une technique analytique utilisée pour identifier et caractériser des protéines spécifiques dans un mélange complexe de protéines.

A

Immunofixation (ou électrophorèse d’immunofixation, IFE)

76
Q

Principe et étapes de l’IFE: ___________________, _________________, _________________, ___________________, __________________________.

A
  • Séparation des protéines de l’échantillon par électrophorèse sur un gel d’agarose;
  • Les bandes de gel sont recouvertes avec des antisérums spécifiques dirigés contre les différentes classes ou sous-classes d’immunoglobulines (IgG, IgA, IgM, chaînes légères kappa et lambda);
  • Les antisérums fixent les immunoglobulines présentes dans les bandes de gel, formant des complexes immuns insolubles;
  • Le gel est lavé pour enlever les protéines non fixées et les immunoglobulines non liées;
  • Les complexes immuns sont visualisés en colorant le gel avec un colorant protéique comme le bleu de Coomassie ou l’argent.
77
Q

IFE est utilisée dans _________________________________.

A

Diagnostic des Gammapathies Monoclonales

78
Q

Principe et étapes de l’Immunodiffusion Radiale de Mancini: ______________, ____________, ____________, ___________, _____________, ______________, _____________, ____________, ________________.

A
  • Un gel d’agarose est préparé et versé dans une plaque de Petri ou sur une lame de verre;
  • Des anticorps spécifiques dirigés contre l’antigène d’intérêt sont uniformément incorporés dans le gel avant sa solidification;
  • Des puits sont creusés dans le gel solidifié, généralement de petite taille et espacés uniformément;
  • Les échantillons contenant l’antigène à quantifier sont déposés dans ces puits;
  • L’antigène diffuse radialement à partir du puits dans le gel;
  • Lorsqu’il rencontre les anticorps dans le gel, des complexes immuns insolubles se forment, créant un anneau de précipitation autour du puits;
  • Après un temps d’incubation suffisant (généralement 24 à 48 heures), les anneaux de précipitation atteignent leur taille maximale;
  • Le diamètre des anneaux est mesuré à l’aide d’une règle ou d’un autre dispositif de mesure;
  • La concentration de l’antigène dans les échantillons est déterminée en comparant les diamètres des anneaux à une courbe standard établie avec des concentrations connues de l’antigène.
79
Q

Application de l’Immunodiffusion Radiale de Mancini: ______________________.

A

Dosage des protéines (complément C2, C1q.., AFP, IgD….)

80
Q

Principe et étapes de l’Immunoélectroquantification de Laurell: ___________, ______________, ______________, ______________, ______________, _______________, _______________, _______________.

A
  • Un gel d’agarose est préparé et incorporé avec des anticorps spécifiques dirigés contre l’antigène à quantifier;
  • Le gel est coulé sur une plaque de verre ou dans un support approprié;
  • Des puits sont creusés dans le gel. Les échantillons contenant l’antigène à quantifier sont déposés dans ces puits;
  • Une fois les échantillons déposés, une tension électrique est appliquée pour entraîner la migration des antigènes hors des puits;
  • Les antigènes migrent à travers le gel et forment des complexes immuns avec les anticorps incorporés dans le gel;
  • Les complexes immuns insolubles se forment en bandes de précipitation au fur et à mesure que les antigènes migrent à travers le gel;
  • Après la fin de l’électrophorèse, la distance migrée par les bandes de précipitation est mesurée;
  • La concentration de l’antigène dans les échantillons est déterminée en comparant la distance migrée avec une courbe standard obtenue à partir de concentrations connues de l’antigène.
81
Q
A

Immunologie (25 decks)

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