Hoorcollege 15: Flowcytometrie bij afweerstoornissen

Question 1

Diagnostisch proces PID

Answer 1

Klinische presentatie -> flowcytometrische analyse -> genetische analyse

Question 2

Rol flowcytometrie in PID diagnostiek

Answer 2

• Analyse van lymfocyten subsets
• Analyse van eiwitexpressie
• Analyse van eiwitactiviteit
• Analyse B-celpatronen in CVID en andere aandoeningen

Question 3

Onderscheid CD soorten

Answer 3

• B-cellen: CD19+
• T-cellen: CD3+
• NK-cellen: CD3-, CD16+ en CD

Question 4

SCID

Answer 4

• Meest erge vorm
• Mis met T-cellen; zijn er niet/werken niet
• Geen B en geen T -> RAG2 mutatie:RAG is belangrijk voor de VDJ segmentatie. RAG knipt tussen V en D of D en J -> er kan een grote verscheidenheid aan T-cel receptoren worden gemaakt
• TREK = T-cel receptor excisie cirkel. Als er treks zijn, dan worden er in de thymus T-cellen gevormd. Met PCR kun je zo’n trek meten en dat wordt gedaan in de hielprik. Geen TREK = SCID -> stamceltransplantatie
• Wel B, maar geen T en NK -> IL2RG receptor -> X-gebonden ziekte
• Wel B en NK, maar geen T -> IL7A receptor

Question 5

ZAP70 deficiëntie

Answer 5

• Rol in signaaltransductiecascade in de T-cel receptor ontwikkeling
• Normale of verhoogde aantallen lymfocyten in bloed
• Selectieve afwezigheid CD8+ T-lymfocyten
• Verstoorde functionaliteit CD4+ T-lymfocyten

Question 6

Th1 vs. Th2

Answer 6

Th1: hulp aan macrofagen

Th2: afweer tegen schimmels

Question 7

STAT signaling

Answer 7

• Signal transducer and activator of transcription
• Binding cytokine -> fosforyltie JAK aan receptor -> fosfoyrlatie -> STAT wordt gefosforyleerd -> binden aan DNA -> productie genen aanzetten
• STAT1 werkt niet -> hele specifieke problemen: reageren niet op Interferon gamma -> gevoelig voor mycobacterie infecties

Question 8

Soorten cellen

Answer 8

CD24+/CD28: transitionele cellen
CD27+/IgD: memorycellen

Question 9

5 celpatronen in CVID

Answer 9

1. B-cel productie en germinal center defect: vroeg blokkades, cellen uit beenmerg maar stopt daarna, op alle niveaus, geheugen en plasmacellen niet goed gevormd, vroeg probleem
2. Vroege B-cel maturatie en survival defect: dat ging nog wel goed, maar iets later met name activeren B-cellen leek probleem
3. B-cel activatie en proliferatie defect: subtieler, activatie wel goed gedaan, maar vooral proliferatie/deling die niet goed liep, aangegeven met onderbroken pijltje
4. Germinal center defect (hulp T-cellen misschien het probleem): meer selectief kiemcentrum reactie, dus route buiten kiemcentrum normaal en dus ook plasmacellen gevormd, maar met name bijdrage uit kiemcentrum gestopt
5. Post-germinal center defect: alles ging goed, geheugencellen gevormd probleem is plasmacellen waar weinig van was en niet goede functie

Question 10

Take home

Answer 10

• Flowcytometrie speelt belangrijke rol in PID diagnostiek
• Leeftijdsgebonden normaal waarden belangrijk voor correcte interpretatie
• B-cel patronen gebaseerd op immunofenotype en immunogenetische kenmerken geven nieuwe inzichten in pathofysiologie van PID: Nieuwe immunologische concepten
• Toekomst van flowcytometrie: pattern recognition: Gestandaardiseerde protocollen en nieuwe software tools