Celbiologie 1

Question 1

Wat is recombinant DNA?

Answer 1

stukken DNA die je niet zomaar in de natuur tegenkomt, samengestelde/aangepaste stukken DNA (DNA technologie).

Question 2

Welke “tools” hebben we in de DNA toolbox? (5)

Answer 2

1. Restrictie enzymen, DNA in stukken knippen. Dit knippen is sequentie specifiek (en dus afhankelijk van enzym).
2. Ligatie, stukken DNA (“sticky” ends) aan elkaar plakken met behulp van DNA ligase.
3. Hybridisatie, samenvoegen van twee complementaire DNA-strengen tot een dubbele helix.
4. Replicatie, proces waarbij het DNA verdubbeld wordt aan de hand van enkelstrengs DNA en er een complementaire streng gevormd wordt.
5. Synthese, vorming van DNA. Onderdeel van replicatie, kan op natuurlijke wijze maar ook biochemisch (inefficiënt = stapsgewijs).

Question 3

Wat is een plasmide?

Answer 3

cirkelvormige DNA streng die zich buiten het chromosomaal DNA bevindt van sommige eencellige organismen. Hiermee kan genetische informatie tussen bacteriën worden uitgewisseld.

Question 4

Wat is de functie van een plasmide?

Answer 4

plasmides leveren vaak een voordeel op voor de bacteriële cel, bijvoorbeeld resistentie.

Question 5

Hoe worden plasmides uitgewisseld?

Answer 5

door middel van een “tijdelijk communicatie bruggetje” met een andere bacterie (een competentie bacterie) die plasmides wil gaan opnemen kunnen plasmides worden doorgegeven. Hier komt geen deling aan te pas!

Question 6

Waar kunnen plasmides voor gebruikt worden?

Answer 6

om een gen van een ander organisme in te brengen in bacteriën waardoor bacteriën nieuwe eigenschappen krijgen. Daarnaast kunnen in het lab plasmiden worden gebruikt om stukken DNA te klonen (heel vaak te vermenigvuldigen) doordat de bacterie het kopieert iedere keer dat hij deelt.

stukje interessant DNA uit menselijk DNA knippen, plakken en in plasmide plaatsen (recombinant plasmide). Hier vervolgens kopiëren of klonen of productie van een stof door genexpressie.

Question 7

Wat kun je zeggen over het aantal baseparen van een plasmide t.o.v bacteriegenoom/humaangenoom?

Answer 7

Plasmide dus erg krachtig maar er is wel een beperking door de lengte (veel korter) om hoeveelheid/stukken DNA te manipuleren.

Plasmide echt een stuk gereedschap.

Question 8

Hoe is DNA te analyseren?

Answer 8

door middel van DNA gel elektroforese, hier wordt DNA gescheiden op basis van grootte en/of lading.

Question 9

Hoe werkt DNA gel electroforese?

Answer 9

Scheidingstechniek die moleculen onder invloed van een elektrisch veld laat bewegen in een gel. Negatief geladen moleculen bewegen zich naar beneden, waar de positieve pool (anode) zich bevindt. Hoe groter de moleculen, hoe trager ze bewegen (migreren); hoe kleiner, hoe sneller.

Question 10

Wat zit er nog meer in gel elektroforese?

Answer 10

laat eigenlijk altijd een marker meelopen, een mengsel van DNA fragmenten met bekende lengtes. Dit geeft de maat/lengte van de DNA fragmenten aan. Aan dit soort mengsels doe je vaak ook een kleuring toe wat oplicht onder UV licht.

Question 11

Wat is een reportergen?

Answer 11

makkelijke manier om aan te tonen of een bepaalde gensequentie wel of niet aanstaat. Een reportergen is een gen dat vastgemaakt wordt aan een regulatorgen om de mate van genexpressie weer te geven.

Er zijn verschillende reportergenen beschikbaar, bijvoorbeeld GFP (groen fluorescerend proteïne). Het reportergen bevindt zich achter een promotor in het plasmide of een andere DNA structuur zodat het gen wordt afgeschreven wanneer de promotor aan staat voor gen afschrijving. Het product is dan het proteïne wat geanalyseerd kan worden middels fluorescentie.