Bactéries → milieu de culture sélectif Flashcards
Staphylococcus aureus
Gélose Chapman
- La forte concentration en chlorure de sodium (75 g.L-1) inhibe la plupart des bactéries à Gram négatif et à Gram positif: le milieu de Chapman est un milieu sélectif des bactéries du genre Staphylococcus ☞ bactérie halophile
- Ce milieu permet la mise en évidence de l’utilisation du mannitol grâce à la présence de rouge de phénol.
Après 24 à 48 heures à 37°C en aérobiose : une culture permet d’orienter l’identification vers le genre Staphylococcus.
→ Colonies jaunes: acidification par fermentation du mannitol: bactéries mannitol +.
→ Colonies rouges: absence d’acidification du milieu, donc absence de fermentation du mannitol: bactéries mannitol -.
Orientation :
• Staphylococcus aureus : petites colonies mannitol +
• Autres espèces de Staphylococcus : colonies en général plus petites, mannitol + ou -
Streptococcus spp
Gélose au Sang frais + ANC
- Milieu riche qui permet la culture et l’isolement des bactéries exigeantes.
- L’acide nalidixique et la colistine sont des antibiotiques qui inhibent les bactéries à Gram négatif.
- La lecture de l’hémolyse est un critère d’orientation pour les streptocoques.
Après 24 à 48 heures d’incubation à 37°C en aérobiose (éventuellement atmosphère enrichie en CO2) :
→ Examen macroscopique des colonies
→ Lecture de l’hémolyse
Clostridium difficile
Milieu sélectif CCFA (gélose coeur-cervelle + 5% de sang de cheval + cycloserine + céfoxitine)
Lecture en 48h, après culture en anaérobies stricte à 37°C
→ colonies grisâtres, à bords irréguliers, non hémolytiques, odeur de crottin de cheval (par libération de crésol) et fluorescence vertes-jaunes sous UV à 360 nm
Listeria monocytogenes
Gélose Oxford Curtis
- Ce milieu est rendu sélectif des Listeria par la présence:
→ Du supplément (acriflavine, colistine, céfotétan, cycloheximide, fosfomycine en
solution éthanolique)
→ Des ions lithium. - Ce milieu permet la lecture du caractère esculine grâce à la présence d’esculine et de citrate de fer : l’hydrolyse de l’esculine libère de l’esculétine (et du glucose) qui réagit avec le citrate de fer pour donner une coloration noire.
Après 24 à 48 heures d’incubation en aérobiose à 37°C :
• Halo noir autour des colonies : production d’esculétine qui a réagi avec le citrate de fer :
→ colonies esculine + (caractère du genre Listeria)
• Absence de halo noir autour des colonies : absence de production d’esculétine :
→ colonies esculine - (a priori, pas le genre Listeria)
Entérobactéries
1) Gélose Drigalski
Milieu lactosé : cristal violet et desoxychlorate : inhibition des Gram +
-différenciation des bactéries fermentant le lactose ou non
- colonies jaunes : acidification par fermentation de lactose : lactose +
- colonies bleu-vert : pas d’acidification donc pas de fermentation du milieu : bactérie lactose -
2) Gélose Mac Conkey
- La gélose Mac Conkey est un milieu sélectif pour l’isolement des entérobactéries. En effet, elle contient des agents sélectifs qui freinent le développement des bactéries à Gram positif: cristal violet et sels biliaires.
- L’orientation de l’identification est basée sur l’utilisation du lactose, repérable grâce à 1 indicateur de pH (rouge neutre).
- Isolement et dénombrement des entérobactéries dans les eaux, le lait, les urines.
- Recherche de Salmonella, Shigella et ECEP (Escherichia coli entéropathogènes) dans les selles.
Après 24 heures à 37°C en aérobiose, en général :
→ Colonies rouges (roses): acidification du milieu, souche lactose +.
NB: un halo opaque autour des colonies est dû à la précipitation des sels biliaires.
→ Colonies incolores: absence d’acidification du milieu, souche lactose -.
Salmonella spp.
Gélose Desoxychlorate Citrate Lactose
Milieu rendu sélectif par la présence de
- désoxychlorate : inhibe les bactéries Gram +
- forte concentration en citrate : inhibe aussi les Gram +
- lactose et du rouge neutre : mettent en évidence l’utilisation du lactose
- thiosulfate de sodium et du citrate ferrique : mise en évidence de la production d’H2S par réduction du thiosulfate
→ après 24h à 37°C en aérobiose
• utilisation du lactose
- colonies rouges : lactose +
- colonies incolores : lactose -
• production d’H2S
- colonies noire ou à centre noir : production de sulfure de fer due à la réduction de thiosulfate en H2S : bactéries H2S+
- colonies sans centre noir : absence de production de sulfure de fer : bactérie H2S -
→ Colonie incolore à centre noir : Salmonella
→ Colonie incolores sans centre noir : Shigella ou Salmonella
ou Gélose SS
ou Gélose Hektoen
Escherichia coli
CHROMagar™ O157,
les colonies d’E. coli O157:H7 vont présenter une coloration allant du rose au violet. Les colonies bactériennes autres que E. coli O157:H7 prennent une couleur bleue ou, si elles n’utilisent pas les substrats chromogèniques, leur couleur naturelle
Shigella spp
Gélose Desoxychlorate Citrate Lactose
Milieu rendu sélectif par la présence de
- désoxychlorate : inhibe les bactéries Gram +
- forte concentration en citrate : inhibe aussi les Gram +
- lactose et du rouge neutre : mettent en évidence l’utilisation du lactose
- thiosulfate de sodium et du citrate ferrique : mise en évidence de la production d’H2S par réduction du thiosulfate
→ après 24h à 37°C en aérobiose
• utilisation du lactose
- colonies rouges : lactose +
- colonies incolores : lactose -
• production d’H2S
- colonies noire ou à centre noir : production de sulfure de fer due à la réduction de thiosulfate en H2S : bactéries H2S+
- colonies sans centre noir : absence de production de sulfure de fer : bactérie H2S -
→ Colonie incolore à centre noir : Salmonella
→ Colonie incolores sans centre noir : Shigella ou Salmonella
ou Gélose SS
ou Gélose Hektoen
Campylobacter jejuni
Gélose au sang frais (de mouton) + mélange Campylosel (Mélange sélectif : céfopérazone, colistine, vancomycin, amphotéricine B)
Milieu riche qui permet la culture et l’isolement des bactéries exigeantes (sans besoin de facteurs particuliers).
-lecture de l’hémolyse
-sélection du genre Campylobacter
• céfopérazone : inhibe les Pseudomonas et entérobactéries
• colistine : inhibe nombreuses Gram -
• vancomycine : inhibe nombreuses Gram +
• amphotéricine B : inhibe levure
→ 48h à 72h après, à 37°C en micro-aérophilie
→ colonies petites, grisâtres, non hémolytiques
ou G. Columbia sang frais + antibiotiques
(Karmali), incubation en micro-aérophilie
Helicobacter pylori
Milieu enrichi sélectif
Haemophilus influenza
Gélose Chocolat polyvitaminée + Bacitracine (ou pénicilline)
- La gélose chocolat polyvitaminée est un milieu très riche : l’hémoglobine du milieu apporte le facteur X (=hématine) et le supplément vitaminé apporte le facteur V (=NAD+) qui permettent la culture de bactéries très exigeantes, en particulier en
facteurs X et V (Haemophilus et certaines espèces de Neisseria). - La bacitracine présente sélectionne les Haemophiluscar la CMI de la plupart des
autres bactéries pour la bacitracine est généralement inférieure à la concentration
utilisée dans le milieu.
Après 24 à 48 heures à 37°C en atmosphère enrichie en CO2 :
- Haemophilus influenzae donne des colonies lisses ou muqueuses (souches capsulées), de taille variable
- Haemophilus parainfluenzae donne des colonies rugueuses le plus souvent.
Treponema pallidum
Culture axénique impossible.
Examen direct au microscope à fond noir : bactéries à rechercher dans placenta, liquide amniotique, LCR, au niveau du chancre, des lésions de la syphilis secondaire.
Chlamydia trachomatis
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Legionella pneumophila
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Mycobacterium tuberculosis
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