systemen agrombacterium tumefaciens

Question 1

overzicht systemen

Answer 1

• homologe recombinatie
  > Ti disarmed plasmide
  > co-integratie Ti plasmide + insertie-activatie oncogene genen T-DNA
• binair vector systeem
  > T-DNA binary vector enkel randen T-DNA ‘gwn’ vector
  > complementatie in trans met Vir & T-DNA op 2 vectoren

Question 2

co-integratie Ti-plasmide + tekening

Answer 2

• vooraf in E.coli, GOI in shuttle
• transformeren of opzuiveren & in vitro of E.coli in vivo bij A.
• P CaMV = cauliflower mosaic virus promotor = voor GOI
  p110-111

Question 3

T-DNA binary vector + tekening

Answer 3

• GOI in via border, PCaMV & terminator
• transfer naar A.
• functioneert naast Ti
  p111

Question 4

complementatiein trans +tekening

Answer 4

• 2 vectoren in A
  > T-DNA
  > 4 genen overbrengen T-regio als ssDNA
  p112

Question 5

integrative T-DNA vector tekening

Answer 5

p112

Question 6

methoden planten infecteren met A. tumefaciens

Answer 6

• floral dip
  > bloemen in A. suspensie collectie recombinant zaad = hemizygoten > zelfkruising > uitgroei volledig homozygote recombinante plant
• leaf discs
  > stukken bladeren geperforeerd + A. medium op selectiemedium > overleven = GOI opgenomen

Question 7

toepassingen transgene planten

Answer 7

• moleculaire genetica (gen-functie ond)
• resistentie tegen ins (inbouw toxines)
• resistentie herbiciden (breedspectrumsproeien, plant overleefd)
• extremiteiten tolerantie: temp, zout, droogte
• beïnvloeden fenotype:
  > nieuw texturen, smaak, kleur, bewaring
  > (antibody) bioreactor
  > nutritioneel voedzamer