blotting

Question 1

waarom

Answer 1

• beter hanteerbaar & verschillende detectiemethoden mogelijk
• membraan laat meer manipulaties toe & toegankelijker voor AL & enzymen
• partiële blotting: meerdere kopien
• mogelijk comp verwijderen
  > meerdere testen zelfde materiaal
  > reprobing

Question 2

soorten membranen

Answer 2

nitrocellulosemembraan
- EW
- broos & lage affiniteit nucleïne zuren
nylonmembraan
- positieve lading
- blotten nucleïnezuren, hoge bindingcapaciteit (kleine fragmenten & oligonucleotiden)

Question 3

blottingsmethoden

Answer 3

capillaire blotting
elektroblotting
semi-dry
vaccuum
positieve druk
dot-blotting

Question 4

capillaire blotting

Answer 4

gewicht
papier
filtreerpapier
membraan
gel
filtreerpapier (contact buffertank)
tank
> capillariteit & vloeistofstroom
> fixatie!
> transfer in alkalisch
> zure hydrolyse voor grote fragmenten

Question 5

elektroblotting/semi-dry

Answer 5

kathode
blottingpapier
gel
membraan
blottingpapier
anode
> transfer licht alkalisch
> methanol voor eiwitbinding & zwelling tegen
> zelden DNA

Question 6

dot-blotting

Answer 6

DNA als oplossing op membraan
> 96-well microtiterplaat (verdunning)
> onderzoek: labeling, T(hybr), %formamide adhv methode
> fixatie (80°C, UV)
> colony/plaque lift -> insitu bacteriën lyseren, denatureren, neutraliseren, resten verwijderen, fixeren