adeno-geassocieerde virale vectoren

Question 1

eigenschappen

Answer 1

• kleine virussen, ssDNA
• genetisch materiaal invoegen op specifieke plaats chromosoom 19, als rep & cap regio’s aanwezig
• delende & niet delende cellen

Question 2

voordelen & nadelen

Answer 2

v:
- niet-pathogene virussen
- geen immuunrespons
n:
- lage insertcap
- moeilijk te verpakken virale partikels

Question 3

inhoud

Answer 3

ITR - rep - cap - ITR

Question 4

rep

Answer 4

4 overlappende genen coderen voor EW levenscyclus
episomaal DNA (niet in genoom)

Question 5

cap

Answer 5

bevat overlappende genen coderend voor 3 capside EW
episomaal DNA (niet in genoom)

Question 6

ITR

Answer 6

symmetrisch -> functionele ITR -> haarspeld -> self primer primase-onafhankelijke synthese 2e DNA streng

Question 7

AAV infectie

Answer 7

1) aanhechtig membraan
2) endocytose: vorming endosoom in cel
3) aanzuring
4) DNA migratie nucleus
5) ssDNA -> dsDNA via gastheer polymerase
6) expressie rep genen
7) replicatie virus
8) expressie cap
9) eiwitmantel voor assemblage virionen
10) virionen ontsnappen uit cel (persistent, cel blijft leven)

Question 8

2e gen AAV vectoren inhoud

Answer 8

• rep & cap vervangen door CMV promoter, GOI, poly A
• ori + ampR
• GFP (controle expressie)

Question 9

nadelen recombinant AAV

Answer 9

= inefficient
-> efficienter door co-inf adenovirus
-> verloopt splicing AAV cap open leesraam anders
-> impact # geproduceerde AAV-vectoren om doelwit te transduceren

Question 10

variant

Answer 10

self-complementairy adeno-associated virale vectoren
-> volledig zelfcomp -> haarspeld
-> V: geen nood synthese 1e streng -> snellere expressie
-> N: insertgrootte max 2,5 kb + seterkere immuunrespons