expressie insecten

Question 1

voordelen

Answer 1

goedkoper dan zoogdier
splicing & PTM
opvouwmech EW = zoogdier

Question 2

nadelen

Answer 2

splicing =/= zoogdier
PTM =/= zoogdier
expressieniveau lager dan gist

Question 3

baculovirussysteem

Answer 3

insectpathogeen, supercoil
infmech dsDNA binnenbrengen
- occluded virus (OV)
> 20u na inf
> polyhedrine aanmaak (virus in poly. netwerk), sterke prom
> zeer late fase = occluded viral phase
> hoekige plaques
- non-occluded virus (NOV) = budding virus
> 12u na inf (geen polyhedrine)
> ronde kleine plaque

Question 4

methode 1 GOI inbrengen

Answer 4

• transfer vec
  > shuttle (P polyhedrine prom)
  > GOI sterk tot expressie
  > Z polyhedrine in verpakkingcel
• packaging cell
  > rec transfer vec + viraal genoom = rec baculovirussen

Question 5

methode 2 GOI inbrengen

Answer 5

• transfer vec
  > flankerende virale DNA voor homologe rec (rec baculo + polyhedrine prom)
  > co-transfectie GOI & virale fragmenten in insectenverpakking
• binnen lineair viraal DNA
  > truncated essentieel gen
  > niet functioneel
• homologe rec met aangeleverde transfer vec
  > verkort fragment <-> gwn gen cirkel viraal genoom
  (seq hersteld)
• in cellen -> detectie plaques (bleu/white)