Identificación Bacteriana Flashcards
Diagnóstico de las enfermedades infecciosas
Diagnosticos clinico
- Anamnesis
- Signos
- Sintomas
- Exploración
Diagnóstico de las enfermedades infecciosas
Diagnosticos de laboratorio:
Los Diagnosticos de laboratorio pueden ser:
- Inespecifico Bioquímico
- Específico o microbiologico (Directo e Indirecto)
Diagnóstico de las enfermedades infecciosas
Diagnosticos de laboratorio: Bioquímico
Los Diagnosticos de laboratorio: Bioquímico pueden ser
- Hemograma
- Coagulación
- Velocidad de sedimentación globular
- Bioquiímica elemental
- Proteína C reactiva
Diagnóstico de las enfermedades infecciosas
Diagnosticos de laboratorio: Especifico
Diagnosticos de laboratorio:
Especifico pueden ser directos y indirectos
Directo
- Frotis: en fresco
- Tinciones
- Cultivo
- Busqueda del antígeno
- Detección de productos del metabolismo
- Detección de ácidos nucleicos
- PCR
Indirectos (recuerde los indirectos)
Diagnóstico de las enfermedades infecciosas
Diagnosticos de laboratorio: Especifico Indirecto
Diagnosticos de laboratorio: Especifico pueden ser Directos e Indirecto:
Los Indirectos son:
- Serlogía
- Pruebas cutáneas
Los Directos (recuerde!)
Diagnóstico de la enfermedad infecciosa.
Flugrama de tipos de diagnostico
Coloración de gram
- Gram directo de la muestra que permite informar presuntivamente agentes etiológicos con alto impacto clínico
- Es el caso de los gram directos de esputo, de flujo vaginal, de LCR, de cualquier material de cavidad estéril Deben ser examinados por personal altamente entrenado
- Permiten evaluar concordancia entre lo observado en la muestra original y lo rescatado en el cultivo de la misma
- Gram de las colonias aisladas de los medios de cultivo sólidos como punto inicial de la identificación bacteriana
- Gram de hemocultivos proporciona información presuntiva del agente involucrado en la bacteriemia
- Permite conocer las bacterias en el desarrollo de los medios líquidos para seleccionar los medios sólidos para el reaislamiento de las bacterias
Identificación microbiana
Métodos fenotípicos tradicionales
a) Características microscópicas
b) Morfología colonial (forma, tamaño, hemólisis, pigmentación, textura)
c) Medios selectivos y /o cromogénicos (nutrientes, ATB, sustratos)
c) Pruebas bioquímicas ( Características metabólicas )
d) Sensibilidad o resistencia a algún antimicrobiano
Identificación microbiana
Sistemas fenotípicos semiautomatizados
- ▪ Permiten probar gran cantidad de sustratos (10-50) simultáneamente
- ▪ Permite en general interpretar con sistema de códigos numéricos
- ▪ Algunos pueden ser de lectura rápida (4 horas)
Identificación microbiana
Sistemas fenotípicos totalmente automatizados
- Utilizan también sustratos liofilizados en diferentes soportes
- En general realizan también la prueba de sensibilidad a los ATB
- La resolución del código es automática e informatizada
Identificación microbiana
Métodos genotípicos
- El mas difundido es la secuenciación de ARNr 16S (Housekeeping)
- En la actualidad la base de secuencias alcanza 10000 bacterias
- Permite además establecer relaciones filogenéticas entre las bacterias
- Se han utilizado también las secuencias de ARNr 23S
- Otra secuencia utilizada es la de la subunidad β del gen ropB
Identificación microbiana
Sistemas proteómicos
- Permiten identificar bacterias basado en el perfil proteico determinado por espectroscopia de masa
- Los sistemas existentes en la actualidad se basan en la detección de proteínas ribosómicas
- A medida que se incrementa su utilización mundial también lo hace la base de datos
Diagnóstico molecular
RT PCR (GeneXpert)
RT PCR (GeneXpert)
Detecta un microorganismo por vez directamente de la muestra biológica
Paneles para SAMR, micobacterias, Clostridium difficile, Chlamydia, Enterovirus, Flu virus
Diagnóstico molecular
MULTIPLEX ( Film.Array)
MULTIPLEX ( Film.Array)
- Detecta simultáneamente varios gérmenes en el mismo ensayo
- Hay paneles para : infecciones respiratorias, gastrointestinales y sepsis.
- Investiga bacterias y virus en el mismo ensayo
Diagnóstico molecular
LUMINEX x TAG
- Detecta varios gérmenes en el mismo ensayo
- Hay paneles para infecciones respiratorias y gastrointestinales
- Investiga bacterias y/o virus en cada panel
GeneXpert
Principales características
- Fácil realización
- Rápido: 2 hs
- Utiliza un cartucho cerrado
- Utilizado más ampliamente para diagnóstico de micobacterias
- Permite detectar resistencia a rifampicina
- Interesante para la detección de Clostridium difficile Detección de colonizados con EVR y SAMR
- Costo elevado
Pruebas bioquímicas, diferenciando…
- 1) Pruebas que se utilizan en la identificación preliminar y con lectura inmediata como la catalasa y oxidasa;
- 2) otras pruebas rápidas, con lectura en menos de 6 h tal y como la hidrólisis del hipurato, la -galactosidasa (ONPG), las aminopeptidasas, la uresa y el indol;
- 3) pruebas lentas, con lectura de 18 a 48 h que incluirían la óxido-fermentación, reducción de nitratos, rojo de metilo, Voges-Proskauer, Agar hierro de Kligler, fermentación de azúcares, hidrólisis de la esculina, coagulasa, fenilalanina-desaminasa, DNasa, hidrólisis de la gelatina, decarboxilasas, lipasa, lecitinasa, utilización de citratos, utilización de malonato, y prueba de CAMP entre las más frecuentes,
- 4) pruebas basadas en caracteres de resistencia a ciertas sustancias tal y como optoquina, bacitracina, solubilidad en bilis, y crecimiento en caldo hipersalino
Sistemas comerciales manuales o galerías multipruebas
Se trata de celdillas aisladas con sustrato liofilizado que se inoculan individualmente y que permiten realizar simultáneamente entre 10 y 50 pruebas bioquímicas
Los resultados de las pruebas se expresan de forma numérica
16S-23S ARNr
Espacio intergénico del 16S-23S ARNr (ITS)4 . Estas ITS se presentan en un número variable en función del número de operones ARNr o alelos rrs. Este elevado grado de diversidad observado en las ITS en diferentes géneros, diferentes especies, diferentes cepas, y en una misma cepa producido por variaciones en el número, tamano˜ y composición de las ITS del 16S-23S ARNr, constituye la base para su utilización en identificación, filogenia y/o tipificación.
ARNr 23S
Puede ser una buena alternativa en los casos en los que la fracción 16 s no proporciona resultados concluyentes. Un aumento en el coste y alguna dificultad técnica en la amplificación de fragmentos más grandes pueden limitar su uso, aunque ser utilizado en la actualidad como un método auxiliar útil con fines taxonómicos y filogenéticos
El ARNr 16S (rrs)
- Es un polirribonucleótido codificado por el gen rrs o ADN ribosomal ARNr 16S (ADN 16S) incluido en la subunidad 30S del ribosoma bacteriano.
- De distribución universal, componente crítico en la función celular, el ARNr 16S actúa como un cronómetro molecular al presentar un alto grado de conservación
- ARNr 16S constituye la diana de acción para algunos antimicrobianos, produciéndose mutaciones que conducen a la resistencia fenotípica, no se invalida la utilización del ARNr 16S para la identificación bacteriana o la asignación de género y especie.
- La secuencia del gen ARNr 16S presenta de forma aproximada 1.500 pb. Este tamano pro- ˜ porciona suficiente polimorfismo interespecífico para diferenciar y establecer medidas estadísticas válidas
Proteómica por espectrometría de masas (MALDI-TOF)
El espectrómetro de masas produce, separa y detecta iones en fase gaseosa.
Identifica moléculas y sus fragmentos mediante la medición de su masa en relación a su carga (masa/carga)
Chocolate Agar Suplementado
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo color marrón.
ALMACENAMIENTO
A 2-8 oC.
Siembra
En superficie, estriar directamente el material en estudio.
INCUBACIÓN
El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37 o C durante 18 a 24 horas.
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5 % de CO2, a 35-37 oC durante 18-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar las características de las colonias.
Agar Chocolate Suplementado
MICROORGANISMOS
- Streptococcus pyogenes
- Streptococcus pneumoniae
- Haemophilus influenzae
- Neisseria gonorrhoeae
Agar Chocolate
Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigen-
tes en sus requerimientos nutricionales, por ejemplo especies de Streptococcus, Haemophilus y Neisserias patógenas.
Agar DNAsa
Medio de cultivo para la detección de enzimas desoxirribonucleasas.
Es especialmente útil para la diferenciación entre especies de estafilococos, así como para la diferenciación de Serratia spp. de especies de Klebsiella y Enterobacter.
Agar DNAsa
ALMACENAMIENTO
A 2-8 oC.
Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar un inóculo denso, ya sea en estría o por la técnica de spot
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar el crecimiento microbiano y cubrir la placa con de ácido clorhídrico 1N, y observar dentro de los primeros 5 minutos.
Positivo: halo claro, transparente alrededor del crecimiento bacteriano.
Negativo: el medio se observa opaco.
DNAsa Agar
- Staphylococcus aureus…………… DNasa +
- Staphylococcus epidermidis…….DNasa -
- Serratia marcescens………………….DNasa +
- Klebsiella pneumoniae………………DNasa -
- Sin inocular Ambar claro a medio, posiblemente con una leve opalescencia
GC Agar Base
Uso
Suplementado con hemoglobina: color marrón oscuro.
Se utiliza como base nutritiva para la preparación de los medios de cultivo: Thayer-Martin Medio (original y modificado) y Chocolate
Agar, permitiendo así la recuperación de microorganismos exigentes en sus requerimientos culturales, como por ejemplo Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis.
GC Agar Base
Almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 oC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 oC.
Procedimiento Siembra
Directa, estriando sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubación El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo que se quiera recuperar. En general se recomienda: Bacterias de fácil crecimiento: en aero biosis, a 35-37 o C durante 18 a 24 horas.
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5-10 % de CO2, a 35-37 oC durante 24-48 horas.
Interpretación de los resultados
Observar las características de las colonias.
Chocolate Agar Enriquecido: “GC Agar Base suplementado
con Hemoglobina 2% y Britalex”:
- Streptococcus pneumoniae
- Streptococcus pneumoniae
- Streptococcus pyogenes
- Neisseria gonorrhoeae
- Haemophilus influenzae
Thayer Martin Medio Modificado: “GC Agar Base suplementa-
do con Hemoglobina 2%, Britalex y VCNT”
De acuerdo al protocolo del producto el control de calidad del medio Thayer Martin para productores de medios de cultivo el ensayo que efectúa Laboratorios determinados labs}:
MICROORGANISMOS —————–CRECIMIENTO
Neisseria gonorrhoeae ——————Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ———-Inhibición total o parcial
Escherichia coli—————————–Inhibición total o parcial
Candida albicans————————–Inhibición total o parcial
Proteus mirabilis—————————Inhibición total o parcial
Levine E.M.B. Agar (con
Eosina y Azul de Metileno)
Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos, a partir de muestras clínicas, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Levine E.M.B. Agar (con
Eosina y Azul de Metileno)
Agar Mac Conkey
USO
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos.
Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Agar - Mac Conkey
CARACTERÍSTICAS
Medio de cultivo color rojizo púrpura.
ALMACENAMIENTO
A 2-8 oC.
PROCEDIMIENTO Siembra
En superficie, inocular directamente la muestra por estría.
Incubación En aerobiosis, a 35-37 oC durante 18-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas-rojizas. Puede observarse halo de precipitación biliar.
- *Microorganismos no fermentadores de lactosa:** colonias del
- *color del medio, incoloras.**
Agar - Mac Conkey
MICROORGANISMOS/CRECIMIENTO/Color
Agar T.S.I.
(Triple Sugar Iron Agar)
USO
Medio universalmente empleado para la diferenciación de ente-
robacterias, en base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa,lactosa y sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Agar T.S.I.
(Triple Sugar Iron Agar)
- CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libredeslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojo.
- ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 oC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 oC.
- PROCEDIMIENTOSiembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con agujade inoculación inocular el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del mismo.
- Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 horas.
Agar T.S.I.
(Triple Sugar Iron Agar)
Manitol Salado Agar
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos a partir de diversas muestras.
CARACTERÍSTICAS
Medio de cultivo color rojo
ALMACENAMIENTO
A 2-8 oC.
PROCEDIMIENTO
Previo al uso, eliminar la humedad que pudiera existir en la
superficie del medio de cultivo, ya sea mediante secado a
35-37 oC o bajo flujo laminar durante 10 - 30 minutos.
Siembra: Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra por estría.
Incubación
- En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas. Si a las 24 horas
- las placas presentan resultado negativo, incubar otras 24 horas.
- La la incubación durante 3 días a 32 °C, en aerobiosis.
Manitol Salado Agar
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
- Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de un halo amarillo.
- Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias delcolor del medio, rojas rodeadas o no de halo rojizo-púrpura.
Manitol Salado Agar
Sangre Agar
Mueller Hinton
recomendado universalmente para la realización
de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos en las cepas de Streptococcus pneumoniae, Streptococcus grupo viridans y Streptococcus grupo Beta Hemolítico.
Salmonella Shigella Agar
cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento
de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo color naranja ligeramente opalescente.
ALMACENAMIENTO
A 2-8 oC.
PROCEDIMIENTO Siembra
Sembrar estriando directamente la superficie del medio de cultivo.
INCUBACIÓN En aerobiosis a 35-37 °C durante 18-24 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadaso rojizas.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del
color del medio, incoloras.
Microorganismos productores de SH2: colonias con centro negro.
Salmonella Shigella Agar
Sangre Agar Base
- utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos.
- Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis. Alfa Beta Gamma hemolosis.
Sangre Agar Base
Interpretación de los resultados
Observar las características de las colonias.
Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:
- *Hemólisis alfa:** lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debidoa la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuestode color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos.
- *Hemólisis beta:** lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudio.
Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio
Sangre Agar Base
Cordero
Tipos de medios de cultivo
1) medios no selectivos enriquecidos,
2) medios selectivos,
3) medios diferenciales
4) medios especializados
Tipos de medios de cultivo
No selectivos
Tipos de medios de cultivo
Selectivos, diferenciales
Tipos de medios de cultivo
Especializados
Medios de cultivo no selectivos enriquecidos
Estos medios están diseñados para permitir el crecimiento de la mayor parte de los gérmenes que no necesitan unas condiciones exigentes. Los siguientes medios son algunos de los más empleados:
- Agar sangre.
- Agar chocolate.
- Agar Mueller-Hinton
- Caldo tioglicolato
- Agar dextrosa de Sabouraud.
Agar sangre.
concepto
Los laboratorios clínicos utilizan muchos tipos de medios de cultivo agar sangre.
Los medios contienen dos componentes fundamentales: un medio basal (p. ej., soja tripticasa, infusión de cerebro-corazón, base de Brucella) y sangre (de oveja, caballo, conejo).
Se pueden añadir varios suplementos más para ampliar el número de gérmenes que se pueden cultivar en estos medios de cultivo.
Neisseria meningitidis → Gama Hemolisis
Staphylococcus aureus →, Beta Hemolisis
Beta Staphylococcus epidermidis → Gama Hemolisis
Streptococcus pneumoniae → , Alpha Hemolisis
Alfa Streptococcus pyogenes →, Beta Hemolisis.
