Vf metodos de transferencia de material genético

Question 1

transferencia de material genetico en bacterias

Answer 1

-conjugacion
-transducción
-transformación

Question 2

año conjugacion por lederberg y tatum

Answer 2

1946

*al sembrar juntas dos cepas auxótrofas K12 de E. coli se aislaban colonias protótrofas

Question 3

es el proceso de transferencia horizontal de material genético entre una célula bacteriana donadora y una receptora mediante el CONTACTO DIRECTO o una conexión q los una

Answer 3

conjugación

*-plasmidos. DNA extracromosómico

Question 4

proceso mediante el cual el ADN es transferido de una bacteria a otra mediante un bacteriófago (particula fágica transductora, pseudovirion)

Answer 4

transducción

Question 5

transduccion*
transferencia de cualquier región del genoma humano

Answer 5

generalizada

Question 6

transduccion*
transferencia de loci adyacente al sitio de integración del profago

Answer 6

especializada

Question 7

transduccion*
inicialmente un bacteriofago infecta a una bacteria y puede integrarse en el genoma bcteriano (profago) manteniendo el:

Answer 7

ciclo lisogenico antes de activar el ciclo litico (vegetativo)

Question 8

transduccion*
tambien se utiliza para designar el proceso mediante el cual ADN exógeno es introducido en:

Answer 8

una célula mediante un vector viral

Question 9

transduccion*
el ADN puede integrarse al genoma de la bacteria por:

Answer 9

recombinación sitio específica (homología de secuencia)

*de esta forma permanece en la bacteria de forma estable la nueva info genetica

Question 10

transformante

Answer 10

celula q ha sido transformada

Question 11

es variable en cada especie capaz de experimentar transformación

Answer 11

competencia

Question 11

principio de transformacion

Answer 11

de Griffith 1928

*una bacteria muerta se degrada y libera fragmentos de adn al entorno. otra bacteria puede captar ese adn

Question 11

codificada en el genoma o lograda de forma artificial

Answer 11

competencia

Question 12

variación hereditaria de una celula bacteriana susceptible, originada por la captación de DNA desnudo libre en el medio, con la posterior integración del DNA exógeno en el genoma celular

Answer 12

transformación

Question 13

ESTADO FISIOLOGICO CARACTERISTICO LIMITADO EN EL TIEMPO QUE PERMITE CAPTAR ADN DEL MEDIO EXTERIOR, influido por factores ambientales como la densidad celular del cultivo, temperatura, ph, nutrientes

Answer 13

competencia

Question 14

en algunas especies de bacterias, q cuentan con la maquinaria especifica para llevar el ADN a traves de la membrana.

Answer 14

transformación natural

*codificada en los genes celulares

Question 15

no esta codificada en los genes celulares, sino que es inducida por procedimientos en donde las celulas son convertidas en <permeables> (competentes) a traves de condiciones q normalmente no ocurren en la naturaleza</permeables>

Answer 15

transformación artificial

Question 16

transformacion artificial*
muchas bacterias (celulas en general) carecen de :

Answer 16

sistemas naturales de transformacion

*se ha conseguido inducir el estado de competencia en celulas q no lo presentan de forma natural -ej e coli

Question 17

ejemplos transformacion artificial

Answer 17

-quimica
-microinyeccion
-lipofeccion
-electroporacion
-vectores virales
-biobalística

Question 18

quimica*
las celulas se incuban en hielo con el DNA exogeno en presencia de cationes divalente como:

Answer 18

Ca+2 (CaCl2) lo cual prepara las membranas celulares para ser permeables al DNA exogeno

Question 19

transformacion artificial*
estas tecnicas se basan en tratamientos químicos o fisicos q producen microporos en la celula, lo q permite la introducción del:

Answer 19

DNA exogeno de modo bastante eficiente

Question 20

quimica*
en seguida las celulas son incubadas a

Answer 20

42°C por 30 segundos (shock térmico) lo que causa q el adn entre en la celula

Question 21

bajo el microsopio empleando microagujas y micromanipuladores

Answer 21

microinyeccion

Question 22

el DNA se encapsula en liposomas (vasiculas esfericas compuestas de una doble capa de fosfolipidos), las cuales se fusionan enseguida con la membrana celular

Answer 22

lipofeccion

Question 23

aumento de la permeabilidad de la membrana celular mediante aplicación de una campo electrico (10-20kV/cm)

Answer 23

electroporacion *una exposicion excesiva a campos electricos puede causar la muerte celular

Question 24

se aprovecha la capacidad naturl que tienen los virus de ingresar su info genetica a la celula blanco

Answer 24

vectores virales

Question 24

se forman poros a traves de los cuales puede entrar el DNA exógeno

Answer 24

electroporación

Question 25

se selecciona un virus adecuado con base a su estructura y se fabrican (pseudovirus) conteniendo la info genetica de interes

Answer 25

vectores virales *pueden obstaculizar la replicación de un virus

Question 26

pequeñas particulas de oro o tungsteno cubiertas de ADN se disparan a las celulas

Answer 26

biobalistica *algo de material genetico se quedara en las celulas, transformandolas

Question 27

la eficiencia de transformacion es baja, pero la mayoria de las plantas pueden ser transformadas con este medio

Answer 27

biobalistica

Question 28

el termino de ________ describe una variedad de procesos q pueden usarse para producir copias geneticamente indenticas de un ente biologico

Answer 28

clonacion

Question 29

clonación de DNA

Answer 29

-in vitro (PCR) -in vivo amplificacion de moleculas de acido nucleico mediante su introduccion, asistida por vectores, en celulas en cultivo

Question 30

clonacion de proteinas

Answer 30

-sistemas de traduccion in vitro -in vivo produccion de proteinas mediante la introduccion asistida por vectores, celulas en cultivo, de la info genetica requeria para la sintesis de dicha proteina

Question 31

la clonacion celular se requiere el empleo de

Answer 31

vectores

Question 32

es un portador, una molecula de DNA cuya mision es unirse con el fragmento de DNA llamado INSERTO para facilitar su entrada a la celula anfitriona

Answer 32

vector *son elementos geneticos con capacidad autoreplicante

Question 33

el inserto puede ser:

Answer 33

ADN genomico, cADN, producto de retrotranscripcion de arn, un producto de pcr, etc

Question 34

aspectos importantes a considerar al seleccionar un vector

Answer 34

-tamaño max del inserto q admiten -tipo de celula anfitriona en la q pueden incorporar el DNA recombinante -plasmidos, muy empleados en la produccion de compuestos terapeuticos. virus, muy empleados para celulas eucariotas

Question 35

clasificacion vectores* capacidad de expresar el DNA recombinante su objetivo es producir un transcrito (RNA) o a la proteina producto de ese transcrito

Answer 35

vector de expresion

Question 36

clasificacion vectores* su finalidad es almacenar secuencias y permitir la obtencion de grandes cantidades de inserto

Answer 36

vector de clonacion

Question 37

caracteristica vector clonacion* secuencias q le permiten mantener su:

Answer 37

replicación y la del adn q transportan, independientemente del adn genomico -origen de replicacion y secuencias reguladoras en su caso

Question 38

caracteristica vector clonacion* secuencias codificadoras para un gen de seleccion. el producto del gen no debe estar presente en el tejido u organismo. para metodos geneticos o..

Answer 38

de seleccion fenotipica -genes de resistencia (ampicilina, etc) -genes reporteros (LacZ (B-galactosidasa), GFP (proteina verde fluorescente), luciferasa, etc) -genes q complemetan defectos nutricionales en cepas mutantes (e coli TRP1, para crecer en un medio carente de Trp)

Question 39

caracteristica vector clonacion* sitios multiples de

Answer 39

clonacion permite la seleccion de sistios de restriccion para la clonacion

Question 40

vector de expresión* presenta akgunas caracteristicas adicionales a las del vector de clonación:

Answer 40

-secuencias reguladoras -promotor. fuerte/debil. inducible/no inducible -operador -sitio de unión a ribosoma (SUR) secuencia Shine-Dalgarno (procariotas) secuencia Kozak (eucariotas) -secuencia de termino de transcripción (TT). estabiliza RNAm -secuencia de poliadenilación (eucariota) -codon de inicio y codon de paro de la traduccion

Question 41

region potenciadora/ promotora de CMV, q permite una fuerte expresion constitutiva en muchos tipos de celulas

Answer 41

Vector pCMVTnT

Question 42

sitio multiple de clonacion

Answer 42

vector pCMVTnT

Question 42

Sitio de poliadenilación de SV40 (virus vacoulado del simio)

Answer 42

Vector pCMVTnT

Question 43

Procedimiento general vectores

Answer 43

1. preparacion inserto 2.preparacion vector 3. preparacion de la construccion o constructo final (vector cargado con el inserto) 4. transformación 5. seleccion de transformantes 6. propagación de trasformantes 7. purificación de vectores o proteinas recombinantes. (respecto a los vectores, principalmente se refiere a los de clonación aunque en algun caso tmbn es de interes la clonacion de los vectores de expresion)

Question 44

1. preparacion del inserto

Answer 44

el DNA se acorta con la o las enzimas de restricción adecuadas

Question 45

2. preparación del vector

Answer 45

el policonector o sitio múltiple de clonacion (MCS) permite emplear cualquier combinación de enzimas de restricción

Question 46

3. preparación de la construcción

Answer 46

union covalente in vitro del inserto de DNA al vector cortado, empleando una ligasa *la especificidad depende del tipo de extremos

Question 47

4to paso de vectores¿*

Answer 47

transformacion

Question 48

5. seleccion de transformantes

Answer 48

una vez q la celula bacteriana ha sido transformada, esta crece en medios de cultivo selectivos solidos metodos geneticos o de seleccion fenotipica levantamiento de colonias o placas (colony or plaque lifts): -hibridación, con sondas. deteccion de acidos nucleicos -inmunohistoquímicos. con anticuerpos. deteccion de proteinas

Question 49

6. propagación de transformantes

Answer 49

se selceccionan las colonias de interes y se crecen en medios liquidos

Question 50

la división de las celulas producira, junto con la replicacion de su genoma, la formación de copias del:

Answer 50

rDNA q se haya incorporado y por lo tanto se lleva a cabo la CLONACIÓN

Question 51

Los vectores de expresion originarán la produccion del:

Answer 51

transcrito/proteina de interes en la célula bacteriana transformada (transfectada-eucariota)