IVd secuenciación de proteínas y cristalografía

Question 1

flujo de trabajo

Answer 1

1 extracción de proteinas
2 separacion de las proteinas
3 procesamiento para secuenciación

Question 2

flujo de trabajo
procesamiento para secuenciación

Answer 2

-agentes reductores
-alquilación de cisteínas
-hidrolisis completa permite determinar cuáles aa están presentes y en que proporcion
-disgestiones individuales con dos diferentes agentes para obtener péptidos menores a 3kDa, purificacion de los fragmentos, secuenciación de cada fragmento, determinación de la secuencia global por traslape de los fragmentos individuales

Question 3

fragmentación de cadenas polipeptidicas
todos son proteasas excepto

Answer 3

bromuro de cianógeno

*es un químico

Question 4

reacciones para identificar el aminoacido N-t

Answer 4

sanger
edman

Question 5

secuenciacion de sanger
reactivo de sanger

Answer 5

2,4-dinitro-fluoro-fenilo

Question 6

degradacion de edman
reactivo de edman

Answer 6

fenilisotiocianato

se obtiene la feniltiohidantoína del aa N-terminal y queda el resto del peptido intacto

Question 7

espectro de masas

Answer 7

información bidimensional que representa la abundancia de los diferentes tipos de iones en funcion de la relacion masa/carga de cada uno de ellos

Question 8

el espectro de masas evidencia la relacion masa carga (m/z) de peptidos analizados y se convierte en

Answer 8

una huella digital de la proteina analizada (mass finger printing)

Question 9

componentes básicos para espectrometria de masas

Answer 9

-sistema de ionizacion
-analizador de masas
-detector de iones

Question 10

sistema de ionización
MALDI

Answer 10

muestras en fase sólida

Question 11

sistema de ionización
ESI

Answer 11

electrospray ionization

muestras en fase líquida

Question 12

analizadores de masa

Answer 12

-TOF (time of fligth)
-TOF-TOF
-trampa de iones tridimensional (ion trap)
-Q (quadrupolo)

Question 13

TOF

Answer 13

la muestra de iones se acelera antes de entrara al tubo de tiempo de vuelo (TOF)
para una energía determinada, los iones más pesados se desplazaran más lento, el tiempo que tardan en atravesar el tubo nos dice su masa

Question 14

TOF-TOF

Answer 14

se puede abrir y cerrar rápidamente la compuerta de paso entre el primer tubo (drift tube) y el TOF tube.
el aislamiento no funciona cuando es espectro está demasiado congestionado

Question 15

Trampa de iones

Answer 15

los iones son atrapados aplicando una radiofrecuencia en la dirección radial y un potencial continuo repulsivo en la lente de salida
despues de q se acumulan, los iones salen de la trampa mediante un voltaje auxiliar

Question 16

quadrupolo

Answer 16

cuatro barras metalicas de seccion circular o hiperbólica, rectas y paralelas
por pares alternos se aplica un potencial constante V que origina un movimiento lateral oscilante de iones
bajo ciertas condiciones de potencial, determinado ion puede moverse sin chocar con las barras e ingresar al detector
funciona como verdaero filtro de masas

Question 17

MS/MS

Answer 17

esencialmente dos espectrómetros en tandem

Question 18

metodo para determinar la estructura tridimensional de una macromolecula mediante el analisis del patrón de difraccion de los rayos x por un compuesto cristalino

Answer 18

cristalografia de rayos x

determina la separacion de los atomos en una red cristaliba midiendo las ubicaciones de manchas producidas en una pelicula fotografica por un haz de rayos x difractado

Question 19

resolucion

Answer 19

distancia mínima a la cual el equipo puede mostrar dos puntos como entidades separadas

depende de la LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ
a menor longitud de onda de lux, mayor resolución