Ve hibridación de acidos nucleicos

Question 1

simple y poderosa forma de detectar secuencias específicas de nucleotidos empleando sondas (material genético) marcadas

Answer 1

hibridacion de acidos nucleicos

Question 2

los acidos nucleicos involucrados proceden de fuentes dif. previamente no formaban:

Answer 2

una doble cadena

Question 3

las sondas son de cadena sencilla y su reconocimiento es altamente especifico
v o f

Answer 3

verdadero

ej sonda de 30nt. la secuencia espcifica estaria presente al azar en un genoma, una vez cada 4^30 (1.15x10^18) nt. cada genoma humano 3x10^9. poco probable q esté simplemente al azar

Question 4

tipos de hibridación

Answer 4

-hibridación in situ (FISH)
-southern Blot (DNA)
-northern blot (RNA)
-dot blot
-hibridación de coonias o placas

Question 5

tecnica de marcaje de cromosoma q permite mapear la ubicación relativa de secuencias dif a lo largo de secuencias unicas de adn mediante la hibridación de sondas q emiten fluorescencia

Answer 5

fluorescent in situ hybridization (FISH)

Question 6

desarrollada inicialmente en 1969 con marca radiactiva

Answer 6

FISH

Question 7

se realiza cuando se sospecha de una anormalidad cromosómica en algún síndrome concreto habiendo excluido otras posibilidades no genéticas

Answer 7

FISH

*tmbn permite localizar la expresión génica en un tejido

Question 8

proceso para el FISH

Answer 8

Cromosoma mitotico, dna bicatenario en portaobjetos
-portaobjetos tratado con solución salina caliente para desnaturalizar el DNA
DNA monocatenario
-incubación con sonda de DNA biotinilado y lavado para eliminar el DNA no hibrido. en este ej se utiliza dna satelite
hibrido de dna bicantenario
-incubación con avidina marcada con fluorescencia para revelar la localización de la sonda d DNA marcada. la contratinción de los cromosomas hace q aprezcan en color rojo
localización de DNA satelite en los centromeros
———contratincion por ej con IOUDRO DE PROPIDIO

Question 9

Algunos tipos de sondas

Answer 9

1- especifica de locus
2- fusión dual
3- doble color para ruptura
4- centromericas
5- teloméricas

Question 10

sonda especifica de locus*
anomalias cromosomicas numericas (aneuploidías)

Answer 10

-monosomias
-trisomias

-especificas para una región cormosomica unica
-en la imagen se deben ver 2 señales por núcleo

Question 11

sonda especifica de locus*
anomalias cromosomicas estructurales

Answer 11

-delecion: se pierde o se elimina parte del cromosoma
-duplicación: se duplica parte del cromosoma

una delecion o duplicación de la región cromosómica dará origen a una señal o más de dos señales, respectivamente

Question 12

tipo de sonda q se unen a regiones contiguas al punto de translocación

Answer 12

fusión dual

Question 13

translocacion

Answer 13

anomalia cromosomica estructural
se transfiere una parte de un cromosoma a otro

Question 13

como seran observadas las translocaciones en la fusion dual?

Answer 13

sera observada como una señal conjunta

Question 13

sondas q revelan eventos de translocacion

Answer 13

doble color para ruptura

Question 14

se unen al cromosoma intacto flanqueando el punto de ruptura

Answer 14

doble color para ruptura

*cuando las translocación ocurre, la sonda se separa

Question 15

sondas q hibridan en las regiones repetidas q rodean los centrómeros

Answer 15

centromericas (satelites)

*pueden tmbn detectar aneuploidia de cualquier cromosoma

Question 16

para q son utiles las sondas teloméricas?

Answer 16

utiles para revelar pequeñas deleciones o translocaciones q no son fáciles de visualizar en el cariotipo estándar

Question 17

cual es el objetivo de northern blot, southern blot

Answer 17

identificar secuencias de interés en el ácido nucleioco inmovilizado en una matriz de papel, nylon o nitrocelulosa

*la transeferencia puede ser pasiva o electrotransferencia

Question 18

ej. dna genómico digerido previamente con enzimas de restricción

Answer 18

southern blot

Question 19

ej. analisis de expresión. niveles de RNAm

Answer 19

northern blot

Question 20

sonda marcada o acoplada a una etiqueta
ejemplos

Answer 20

-fosforo radioactivo (^32P)

-digoxigenina (DIG)
*anticuerpos especificos aDIG
*anticuerpo acoplado a fosfatasa alcalina
*sustrato quimioluminiscente. CSPD (disodium 3-(4-methoxyspiro (1,2-dioxetane-3,2´-(5´-chloro) tricyclo (3.3.1.1 decan)-4-yl) phenyl phosphato)

Question 21

en southern blot se debe de considerar la muestra q se está analizando y lo que…

Answer 21

representa el q haya o no reconocimiento específico de la sonda empleada

Question 22

nivel de expresión de un gen relacionado con el cuadro clínico

Answer 22

northern blot

Question 22

analisis de expresión de genes
ej

Answer 22

-niveles de la proteína (proteoma)
-niveles de mRNA
*RT-qPCR
*northern blot
*microarreglos

Question 23

util en muestras de adn como de rna
en vez de hacer la separación electroforetica en gel de cada una de las muestras, estas se aplican con un capilar en la membrana directamente

Answer 23

dot blot

Question 24

permite analizar de forma rápida la presencia de una secuencia específica en una muestra determinada

Answer 24

dot blot

Question 25

hibridacion de colonias o placas*
la membrana se pone en contacto con:

Answer 25

las colonias

Question 25

hibridacion de colonias o placas*
la membrana se trata de forma q se promueve q el DNA o RNA quede:

Answer 25

expuesto y pueda hibridar con la sonda marcada

*la colonia identificada de esta forma puede ser resembrada y expandida