Interacciones proteína-proteína y modificaciones postraduccionales

Question 1

V/F

¿El conocimiento de la secuencia nucleotídica y transcriptómica de una proteína es suficiente para conocer su función?

Answer 1

Falso
(Se requiere saber cómo interactúa con otras proteínas)

Question 2

Clasificación de la interacción de las proteínas

Answer 2

• Dominios de la misma cadena polipeptídica
• Dominios de diferentes cadenas polipeptídicas
• Complejos entre proteínas independientes

Question 3

・

Metodologías para evaluar las interacciones proteína-proteína (7)

Answer 3

• Rayo X
• ELISA
• Doble híbrido Y2H
• Microarreglo de proteínas
• Microscopía electrónica
• Inmunofluorescencia
• FRET

Question 4

Doble híbrido Y2H

¿Qué detecta?

Answer 4

Interacción entre 2 proteínas por medio de 2 dominios

Question 5

Doble híbrido Y2H

Factor de transcripción es separado en 2 partes (dominios):

Answer 5

1. Dominio de unión a ADN
2. Dominio de activación (AD)

Ambos tienen que estar para que se inicie la transcripción

Question 6

Doble híbrido Y2H

¿Qué proteínas se les unen a los dominios de unión a ADN y a los dominios de activación (AD)?

Answer 6

Proteínas cuya interacción se quiere analizar

Question 7

Doble híbrido Y2H

Explicación de la fc 6

Answer 7

• 1 proteina para el dominio de unión a ADN
• 1 proteína para el dominio de activación (AD)

Si las 2 protes interactúan = activan al FT → transcripción del gen reportero

Question 8

FRET (fluorescence resonance energy transfer)

¿Cómo se van a marcar las proteínas?

Answer 8

Con fluoróforo aceptores (prote 2) y donadores (prote 1)

Question 9

FRET (fluorescence resonance energy transfer)

Relación de la interacción de las proteínas y la luz emitida (YFP)

Yellow fluorescence protein

Answer 9

Interacción de 2 proteínas → YFP se excita a 480 → emite luz 💛 en 530

Solo se da cuando hay interacción

Question 9

FRET (fluorescence resonance energy transfer)

Relación de la interacción de las proteínas y la luz emitida (CFP)

Cian fluorescence protein

Answer 9

Interacción de 2 proteínas → CFP se excita a 436 → emite luz 🩵 en 480

Solo se da cuando hay interacción

Question 10

¿Qué pueden incluir las modificaciones postraduccionales?

Answer 10

• Adición de grupos químicos
• Cortes de cadena polipeptídica
• Plegamiento

Question 11

Las modificaciones postraduccionales determinan…

Answer 11

• Actividad
• Localización
• Interacciones con otras proteínas

Ej. cascada de cinasas se regula mediante fosforilaciones

Question 12

Técnicas para identificar modificaciones postraduccionales

Answer 12

Western blot

Question 13

Características (3)

Western blot

Answer 13

• Separa protes por gel de electroforesis
• Ac de por medio
• Unión Ac-prote se detecta usando marcador radioactivo

Ac se une al a.a P → Anti Ac se une al Ac (radioactividad ✨)