Análisis genómicos y proteomicos Flashcards
Proyecto encargado de descubrir los elementos funcionales de la secuencia
ENCODE
El análisis bidimensional (SDS-PAGE) se analiza mediante:
- Punto isoeléctrico
- Masa molecular
El análisis monodimensional (SDS-PAGE) se analiza mediante:
Solo masa (tamaño)
Proceso que permite que 22,000 genes podrían originar en una sola célula 500,000 proteínas diferentes
Splicing alternativo
El principal objetivo de la proteómica es…
Entender:
* Expresión
* Función
* Regulación
Del conjunto completo de proteínas codificadas por un organismo
Las modificaciones post-traduccionales sirven para…
Regular:
* Actividad
* Estabilidad
* Localización subcelular
De una proteína, así como sus interacciones con otras proteínas
Las proteínas son efectoras del…
Trabajo celular
Técnicas para realizar estudios de las proteínas
- Electroforesis mono y bidimensional
- Espectrometria de masas (secuenciar protes)
- Tecnicas in silico (análisis de bases de datos)
Fun fact
La proteína de estudio se aísla por la afinidad que tiene con un anticuerpo y las proteínas que están pegadas a ellas se analizan por espectrometría de masas.
Las interacciones proteína-proteína se analizan mediante la purificación por…
Afinidad-MS
・
¿Qué buscan las estrategias de separacion de proteinas?
Reducir complejidad y tiempo de analisis
La purificación se monitoriza mediante
SDS-PAGE (gel bidimensional)
El proceso de purificación de una proteína supone una secuencia de etapas en las que las proteínas contaminantes se eliminan a partir de…
Diferencias de tamaño, carga e hidrofobicidad.
Proceso de espectrometría de masas
- Extracción
- Tripsina
- Espectrometría
- In silico
- Identificación
Una vez que la proteína llega a su carga neutra se realiza una separación mediante…
Iones
Espectrometría de masa
¿Qué peptidasa se utiliza?
Tripsina → a.a (específicos)
Espectrometría de masa
¿Qué se utiliza para determinar c/u de las masas de los a.a?
Espectofotrómetro
Espectrometría de masa
¿Qué hace?
Usa la relación masa/carga para calcular componentes de una proteína
Ensayo in silico → identificar prote
¿Qué es la huella peptídica?
- Capacidad de identificar una proteina
- Usa espectometria de masas (MS)
¿Qué es un MALDI-TOF?
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Desorción/ionización laser asistido por matriz a tiempo de vuelo
Está acoplado a la espectrometría de masas
PASO 1
MALDI-TOF (La matriz se ⎽⎽⎽⎽)
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Co-cristaliza
PASO 2
MALDI-TOF (Características del láser)
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Láser de 337nm → analito se vuelve en forma gaseosa
PASO 3
MALDI-TOF ¿Qué se transfieren las moléculas de la matriz?
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Protones ionizando la muestra
PASO 4
MALDI-TOF ¿Qué pasa con los residuos de la matriz?
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Se eliminan (desolvatación)
PASO 5
MALDI-TOF ¿Qué es el tiempo de vuelo?
Matrix Assited Laser Desorption Ionization Time Of Flight
Tiempo que pasan las moleculas dentro del analizador
Todas son aceleradas con un campo eléctrico
MALDI-TOF
¿Qué se va a evaluar en las moléculas finalmente?
Masa y carga
⏱️ que tarda en llegar desde donde se le aplicó la fuerza al detector
MALDI-TOF
¿Qué es desorción e ionización?
- Desorción: moléculas separadas cuando se transforman en estado gaseoso
- Ionización: eliminación de protones
Uso del MALDI-TOF
- Identificación de cepas bacterianas y fúngicas (masa y carga)
- Diagnóstico
- Valorar la carga de las pts y el tiempo de vuelo
