DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS Flashcards
1
Q
¿Qué observamos?
A
Un absceso hepatico.
Tenemos que pincharlo, recoger una muestra y enviarla en forma de cultivo a laboratorio.
Estará creciendo una ESCHERICHIA COLI (probablemente)
2
Q
Observamos una mordedura de perro, ¿qué tipo de prueba hacemos?
A
Con un hisopo, frotamos.
Encontraremos bacterias de la flora propia del paciente y las que causan la infección.
Limpiamos herida y con un sacabocados sacamos una buena muestra.
LA CALIDAD DE LA MUESTRA REVELA LA CALIDAD DEL DIAGNÓSTICO.
3
Q
• La calidad de los resultados depende de….
A
la calidad de la muestra
• Ejemplo: Infección de piel y partes blandas (IPPB): La muestra recogida debe ser representativa del
foco de la infección y no se debe contaminar durante el proceso de recogida con otros microorganismos que colonizan la piel y las mucosas.
4
Q
En la muestra que cogemos, además del patogeno, tenemos que observar…
A
El tipo de células encontradas (leucocitos)
5
Q
Si estoy en quirófano y tengo un absceso, mando a laboratorio una muestra…
A
Cerrada. En una muestra de pus cerrada pueden crecer bacterias aerobias y anaerobias.
6
Q
¿Se pueden cultivar los virus IN VITRO?
A
No, necesitan células para sobrevivir.
7
Q
¿Cuándo es útil la serologia?
A
La serología es lenta, pero nos sirve para la SÍFILIS (por ejemplo). Ya que la bacteria de la SÍFILIS no se puede cultivar.
Tmb nos sirve para ver el sistema inmune del paciente.
Tmb para hacer estudios de seroepidemiología (para poner a gente en la vacuna, como sucedió con el COVID).
8
Q
Paciente con nódulo pulmonar cavitado, ¿qué sospechamos?
A
Infección fungica invasiva (como ASPERGILLUS) o tuberculosis.
Existen biomarcadores fungicos como el BETA-D-GLUCANO (polisacarido de pared celular de Candida y ASPERGILLUS principalmente) y el Galactomanano que nos sirven para el diagnóstico.
Utilizamos esta prueba (aunque tenga muchos falsos positivos y falsos negativos).
9
Q
Cuando mandamos una prueba al laboratorio, se hace:
A
- Tincion
- Cultivo
10
Q
Una tincion fluorescente, ¿es eficaz?
A
Si, es rápida y nos da seguridad del diagnóstico.
Hemos puesto anticuerpos monoclonales que han dado positivo, dado que es Legionella lo que encontramos y no reside en nuestro cuerpo, sabemos que es patogena.
11
Q
¿Qué bacterias causan uretritis más frecuentemente?
A
- Gonorrea
- Clamidia
12
Q
Momento más rentable para sacar un hemocultivo
A
Cuando la temperatura del paciente empieza a subir, antes de que tenga un pico de fiebre
13
Q
Hay pacientes con bacteriemia que presentan hemocultivos negativos, ¿por qué?
A
Porque son bacterias que no crecen en medios de cultivo.
14
Q
Frente a los hemocultivos lentos, ¿qué otras pruebas podemos hacer?
A
Pruebas serológicas, como con la Brucella
15
Q
El diagnóstico de las enfermedades infecciosas se sustenta en…
A
el diagnóstico clínico (historia, examen físico), analíticas que ayudan, pruebas de imagen (abscesos, etc) y en el diagnóstico microbiológico. El diagnóstico microbiológico es una pieza más, pero esencial en determinar el patógeno causal.
16
Q
ESQUEMA GENERAL DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
A
17
Q
Técnicas de diagnóstico microbiológico directo
A
● Microscopía (microscopios de fluorescencia) y tinciones
● Cultivos (habitualmente para buscar bacterias. En un medio
artificial, placas de cultivo, inoculo la bacteria para que crezca
su colonia)
● Técnicas moleculares (PCR), para detectar componentes
18
Q
Técnicas de diagnóstico indirecto
A
● Pruebas serológicas, en las que buscamos anticuerpos.
Pruebas en las que no busco el patógeno sino la reacción.
19
Q
Fines principales de la microscopía
A
- DETECCIÓN inicial de microorganismos
- IDENTIFICACIÓN definitiva
20
Q
La detección microscópica de microorganismos teñidos con …. con colorantes fluorescentes u otros marcadores ha sido muy útil para la identificación específica de muchos microorganismos.
A
anticuerpos marcados
EJEMPLO: legionella
21
Q
TINCIONES SIMPLES-MICROSCOPÍA
Se utiliza para mirar muestras sin teñir, como en
muestras de heces. La preparación no teñida se estudia mediante microscopía de campo claro, de campo oscuro o de contraste de fases.
Por ejemplo, sirve para tratar de ver parásitos, que se pueden observar sin necesidad de teñir.
A
PREPARACIONES EN FRESCO
22
Q
Tincion simple de microscopía en la que se utiliza KOH para disolver el material proteináceo y facilitar la detección de elementos fúngicos que no se ven afectados por la solución alcalina.
A
KOH al 10%
23
Q
Tincion simple de microscopía
Se añade … como material de contraste. El colorante se utiliza principalmente para detectar el género Cryptococcus en el líquido cefalorraquídeo y en otros líquidos corporales.
La cápsula polisacárida del Cryptococcus excluye la tinta, lo que crea un halo alrededor de la
célula de la levadura. Si vemos estructuras redondas blancas, no teñidas = orientativo de criptococo. Se ve muy bien la cápsula, que no se impregna.
A
tinta china
TINTA CHINA
24
Q
Con que técnica detectamos principalmente el CRYPTOCOCCUS?
A
Tinta china
25
Tincion simple-microscopía
Se añade … a preparaciones en fresco de muestras de parasitología para mejorar el contraste
de las estructuras internas; esto facilita la diferenciación entre las amebas y los leucocitos del
huésped
Yodo de lugol
26
CASO CLÍNICO
• Bruna Husky es una mujer de 25 años que consulta por prurito vaginal y leucorrea blanquecina secundaria a tratamiento con Augmentine por una amigdalitis.
• Se recoge un exudado vaginal y se hace una extensión directa para examen en fresco
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿Cuál es el tratamiento de esta infección?
La paciente presenta una vulvovaginitis causada por la levadura Candida Albicans.
Su origen sería endógeno seguramente, dada la modificación del ecosistema vaginal por el tratamiento con Augmentine.
Ante un primer episodio de candidiasis vaginal, el tratamiento puede ser por vía oral (monodosis, o pautas cortas) o local (cremas y óvulos vaginales, en monodosis o 5-7 días de tratamiento) con derivados imidazólicos
27
CASO CLÍNICO
• Harry Haler es un paciente varón de 40 años de edad sometido a TMO por leucemia linfática aguda.
Consulta por historia de tres días de evolución caracterizada por globo ocular izquierdo protruido, edema y
eritema palpebral y facial.
• El TAC mostró una celulitis orbitaria derecha asociada a una sinusitis etmoidomaxilar del mismo lado.
• Se realizó biopsia de mucosa nasal y observación directa con KOH al 10%
¿Cuál es tu diagnóstico?
El examen en fresco con KOH nos permite identificar la presencia de RHIZOPUS spp. (HONGO)
Es un Zygomiceto, comúnmente encontrado en el polvo de las casas, suelo, frutas, nueces y semillas, también se presenta en alimentos en proceso de descomposición. La exposición prolongada a las esporas, ha provocado reportes de problemas respiratorios (principalmente en personas inmunocomprometidas).
28
CASO CLÍNICO
Dorian Gray es un varón de 46 años. VIH + (140 CD4/mm3, Carga viral: 5 logs). Acude por cefalea intensa,
fiebre y rigidez de nuca. Vive en la calle y refiere contacto habitual con palomas.
Se realiza punción lumbar, Tinción de Gram, Tinción de tinta china y cultivo.
¿Qué esperas encontrar en los cultivos del LCR?
¿Cuáles son los valores normales de células, glucosa, proteínas de un LCR?
En los cultivos esperamos encontrar signos de una MENINGITIS CRIPTOCÓFICA.
29
CASO CLÍNICO
Amaia Salazar es una mujer de 28 años que regresa de viaje de novios a México con fiebre, diarrea sanguinolenta y dolor tipo espasmos abdominales. Refiere haber comido productos no higienizados en mercadillos locales.
Se realiza una extensión de heces y se tiñe con iodo lugol.
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿Cual es la complicación más frecuente de esta enfermedad?
La paciente presenta una infección intestinal causada por el parásito microscópico ENTAMOEBA HISTOLYTICA.
La E histiolytica puede vivir en el intestino grueso (colon) sin causarle daño. En algunos casos, invade la pared del colon y causa colitis, disentería aguda o diarrea prolongada (crónica). La infección puede también diseminarse a través del torrente sanguíneo al hígado, causando la complicación más frecuente: ABSCESO HEPÁTICO.
Esta afección se presenta en todo el mundo. Es más común en áreas tropicales donde hay condiciones de hacinamiento y salubridad deficiente. África, México, partes de Suramérica e India tienen problemas de salud significativos debido a esta afección.
El parásito se puede propagar:
A través del agua o los alimentos contaminados con materia fecal
A través de la fertilización del suelo con desechos humanos
De persona a persona, particularmente por el contacto con la boca o la zona rectal de una persona infectada
30
Tincion adecuada para la NOCARDIA
Dado que la tincion de Gram no es suficiente, se tiene que hacer una tincion ácido-alcohol resistente.
31
En un paciente sin apetito y con fiebre, donde se observa destrucción de los pulmones, sospechamos de…
Hacemos Broncoscopia y Tincion Gram pero no observamos nada, ¿qué debemos hacer?
NEOPLASIA O TUBERCULOSIS
Especializar la tincion según el microorganismo del paciente.
32
MICROSCOPÍA-TINCIONES DIFERENCIALES
La tinción más utilizada en el laboratorio de microbiología constituye la base para separar
los principales grupos de bacterias (grampositivas y gramnegativas).
Tincion de Gram
azul→ Gram + , retienen el violeta de cristal
rosa→ Gram - que retienen el colorante safranina.
33
MICROSCOPÍA-TINCIONES DIFERENCIALES
… se utiliza para la detección de hongos, tiñendo
de negro los elementos fúngicos.
TINCION DE METENAMINA DE PLATA
34
MICROSCOPÍA-TINCIONES DIFERENCIALES
… se utiliza para ver parásitos sanguíneos. Usada sobre todo en el trópico, habitualmente para detectar malaria (Plasmodium en sangre). También detecta cuerpos de inclusión víricos y Clamidias.
TINCION DE WRIGHT-GIEMSA
35
CASO CLÍNICO
Jim Hawkins es un varón de 45 años que acude a urgencias por malestar general, tos productiva purulenta, fiebre de 39 ºC, disnea y dolor pleurítico. Se realiza Rx de tórax y se recoge un esputo.
En la tinción de Gram se observa los siguiente:
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿Cómo se clasifica una neumonía en función de su gravedad?
En la Rx de tórax, se ve una neumonía redondeada. Realizamos una tinción de Gram y vemos que se tiñen de azul unas bacterias que tiene forma de dos bolitas pegadas. Se trata de diplococos Gram positivos. El único microorganismo gram + que puede causar neumonía es el neumococo, por lo que podríamos confirmar la diagnosis. Esperaremos a los resultados de los cultivos para estar seguros y determinar el tto definitivo.
En función de la mortalidad asociada a dicha neumonía, las clases I y II deben considerarse para tratamiento ambulatorio, la clase III para hospitalización corta, y las clases IV y V para ingreso hospitalario .
36
CASO CLÍNICO
Jo Nesbo es un paciente VIH+ recién diagnosticado (56 CD4/mm3, Carga viral de 6 logs). Acude por un cuadro de insuficiencia respiratoria severa. Se realiza TAC, y broncoscopia con BAL.
En la tinción de Gram no se observan microorganismos (solo lpmn), en la tinción de plata (Grocott) se observa lo siguiente.
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿De qué otros métodos diagnósticos disponemos para diagnosticar esta enfermedad?
¿Cuáles son los principales factores de riesgo para sufrir esta enfermedad?
La Neumonía por Pneumocystis jirovecii es una infección micótica de los pulmones. La enfermedad se solía llamar Pneumocystis carinii o neumonía por PC.
Este tipo de neumonía es causado por el hongo Pneumocystis jirovecii. Este hongo es común en el medio ambiente y pocas veces causa enfermedad en personas sanas.
Sin embargo, puede causar una infección pulmonar en personas con un sistema inmunitario debilitado.
Disponemos otros métodos diagnósticos para detectar dicha enfermedad:
Radiografía de tórax
Oximetría de pulso
Confirmación histopatológica
37
CASO CLÍNICO
Emily Bronte es una mujer de 21 años estudiante de Medicina que acude a Urgencias con un cuadro de fiebre y confusión que ha comenzado dos días después de volver de un proyecto de colaboración con una ONG en Guinea.
Se realiza un frotis de sangre que se tiñe con Giemsa.
¿Cuál es tu diagnóstico?
Un paciente que viene de Guinea Ecuatorial, con fiebre, tiene malaria hasta que se demuestre lo contrario! Vemos un leucocito rodeado de glóbulos rojos. Los eritrocitos están infiltrados con algo. Solo hay 2 cosas que podemos ver dentro de un glóbulo rojo, o Plasmodium (que se tiñen con Giemsa) que causa malaria, u otro parásito llamado Babesia. Con un Giemsa no vamos a ver bacterias generalmente, sólo PARÁSITOS
38
MICROSCOPÍA-TINCIONES FLUORESCENTES
…. Se utiliza para detectar bacterias y hongos en muestras clínicas. El colorante se intercala en los ácidos nucleicos. A pH neutro, las bacterias, los hongos y el material celular se tiñen de color naranja.
TINCION DE NARANJA DE ACRIDINA
39
MICROSCOPÍA-TINCIONES FLUORESCENTES
… = igual que las tinciones acidorresistentes
TINCION DE AURAMINA-RODAMINA
40
MICROSCOPÍA-TINCIONES FLUORESCENTES
… se utiliza para detectar elementos fúngicos y Pneumocystis. El colorante se une a la
celulosa y la quitina de las paredes celulares
TINCION DE BLANCO CALCOFLUOR
41
MICROSCOPÍA-TINCIONES FLUORESCENTES
Los … forman complejos con moléculas fluorescentes. La unión específica a un microorganismo se detecta por la presencia de fluorescencia del microorganismo. La técnica ha sido útil para detectar muchos microorganismos (como Streptococcus pyogenes, Bordetella, Francisella, Legionella,
Chlamydia, Pneumocystis, Cryptosporidium, Giardia , virus de la gripe, virus del herpes simple). La sensibilidad y la especificidad de la prueba dependen del número de microorganismos presentes en la muestra que se va a estudiar y la calidad de los anticuerpos utilizados en los reactivos
anticuerpos (monoclonales o policlonales)
42
CASO CLÍNICO
Jane Eyre es una mujer de 65 años diagnosticada de una LMA en tratamiento. En este momento está
neutropénica y te consultan por fiebre e imagen nodular cavitada en el TAC de tórax. Se realiza una
broncoscopia con BAL y se solicitan tinciones urgentes.
En el Gram no se ve nada, pero en la tinción de blanco de calcofluor se observan las siguientes estructuras:
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿De qué otros métodos diagnósticos disponemos para diagnosticar esta enfermedad?
¿Cuáles son los principales factores de riesgo para sufrir esta enfermedad?
Observamos una posible micosis a nivel pulmonar, sospechándose de una Aspergillosis.
La aspergilosis invasora es una infección causada por hongos del género Aspergillus que afecta fundamentalmente a pacientes con leucemia aguda mieloide y a pacientes tratados con trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos (TPH-Alo), pero que también se presenta en otras neoplasias hematológicas.
Para detectar esta enfermedad tmb se pueden utilizar diagnósticos radiológicos o ciertos biomarcadores como el galactomanano (GM) y el β(1,3)-D-glucano (BDG) .
43
CULTIVOS IN VITRO
• La bacteria … es un patógeno respiratorio importante; sin embargo, nunca se consiguió cultivar hasta que
se reconoció que su recuperación dependía de disponer de un medio enriquecido con hierro y cisteína (BCYE).
Legionella
Legionella pneumophila es una bacteria Gram negativa perteneciente a la familia Legionellaceae
La transmisión de la bacteria se realiza por bioaerosoles contaminados o por aspiración de gotas de agua que contengan la bacteria.
Los principales focos de contaminación a partir de los que se disemina la bacteria e infecta al hombre son los tanques de almacenamiento de agua, los sistemas de calefacción y de agua caliente, las torres de refrigeración, los condensadores evaporativos y, en definitiva, aquellos sistemas que mantienen el agua a una temperatura óptima para el crecimiento de la bacteria. Sin embargo, cualquier elemento que pueda producir aerosoles, incluidos grifos, cabezales de duchas, surtidores de fuentes, sistemas de riego por aspersión o equipos médicos de aerosolterapia, puede ser un foco de contaminación.
No hay evidencias de transmisión por bebida de agua contaminada o por contacto de persona a persona, ni de reservorio animal.
44
CULTIVO IN VITRO- TEMPERATURA
•…, un importante patógeno entérico, no se consiguió recuperar de las muestras de heces hasta que se incubó en medios altamente selectivos a 42 °C en una atmósfera microaerófila.
Campylobacter
45
CULTIVO IN VITRO-CULTIVOS CELULARES
• …, una importante bacteria responsable de enfermedades de transmisión sexual, es un patógeno intracelular obligado que debe cultivarse en células vivas.
Chlamydia
46
¿Cómo se puede diagnosticar una uretritis por Chlamydia?
Para C. trachomatis, pruebas basadas en ácidos nucleicos
Para C. pneumoniae, cultivo o pruebas basadas en ácidos nucleicos
Para C. psittaci, pruebas serológicas o reacción en cadena de la polimerasa (PCR; cuando esté disponible)
47
ITS PRINCIPALES
- Clamidia
- Herpes genital
- Gonorrea
- VIH
- VPH
- Sífilis
- Tricomoniasis
48
CASO CLÍNICO
Peter Parker es un varón de 26 años que acude a urgencias con un cuadro de 3 días de evolución de disuria,
y secreción uretral serosa. Refiere tener múltiples parejas sexuales y utilizar siempre medidas de protección.
¿Cuál es tu diagnóstico?
¿Qué pruebas le pedirías?
El paciente presenta una uretritis.
Le solicitaría una PCR para buscar genes de Clamidia en dicha secreción
49
…, patógeno causante de la sífilis, no se puede cultivar en ningún medio, ni celulares ni artificiales.
Treponema pallidum
50
En ocasiones en que la enfermedad está causada por toxinas. Staphylococcus aureus, que es la causa del síndrome del shock tóxico estafilocócico, produce la enfermedad mediante la liberación de una toxina al sistema circulatorio. Hay métodos para detectar esa toxina, que permitirá diagnosticar la enfermedad. Como lo es el …
HEMOCULTIVO, que consiste en un cultivo de sangre. Dependiendo del color, son frascos donde crecen bacterias aerobias, anaerobias,... y algunos llevan un quelante de antibióticos (en caso de que se hayan dado) para anular su efecto y dejar que crezca la bacteria.
Algunas infecciones se caracterizan por la existencia de relativamente pocos microorganismos. Por ejemplo, la mayoría de los pacientes sépticos tienen menos de un microorganismo por mililitro de sangre. Por tanto, la recuperación de estos microorganismos y la rentabilidad del cultivo dependerá de la cantidad de sangre
que saquemos. que consiste en un cultivo de sangre. Dependiendo del color, son frascos donde crecen bacterias aerobias, anaerobias,... y algunos llevan un quelante de antibióticos (en caso de que se hayan dado) para anular su efecto y dejar que crezca la bacteria.
Su eficacia está limitada por 2 factores
- Si el paciente está tomando antibiótico, hay probabilidad de que salga negativo
- Depende del volumen de sangre que extraiga. Puede dar falsos negativos. Más rentabilidad cuantos más hemocultivos saquemos
51
Medios diseñados para permitir el crecimiento de la mayoría de los microorganismos que no necesitan
unas condiciones exigentes. Los siguientes medios son algunos de los más empleados:
Agar sangre. Agar chocolate. Agar Mueller-Hinton. Caldo tioglicolato. Agar dextrosa de Sabouraud (Hongos).
Medios de cultivo enriquecidos
Problema: que en muestras de esputo, heces,.. crecerá también la microbiota. No seremos capaces de diferenciar qué está causando enfermedad, ya que en muchas infecciones, el microorganismo responsable es parte de la microbiota. Para evitarlo, usamos medios de cultivo selectivos.
52
• En muchas infecciones (p. ej., gastroenteritis, uretritis, faringitis), el microorganismo responsable
de la infección se asocia a otros muchos microorganismos que son parte de la microbiota
normal de la región.
• Se han desarrollado muchos medios de cultivo que permiten suprimir estos microorganismos existentes
en condiciones normales y facilitan la detección de los que tienen importancia clínica.
Un ejemplo es:
• Agar de MacConkey: Agar selectivo para las bacterias gramnegativas (MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO)
53
Se trata de un agar selectivo para las bacterias gramnegativas y diferencial para distinguir las
bacterias que fermentan la lactosa y las que no la fermentan.
• Agar de MacConkey
Todas las enterobacterias (flora normal del tubo digestivo) fermentan la lactosa, mientras que Salmonella o Shigella no la digieren. Se verán en amarillo.
54
Se trata de un medio de cultivo selectivo diferencial (S aureus fermenta el manitol, los
estafilococos coagulasa negativa no lo fermentan) empleado para el aislamiento de estafilococos.
Agar sal manitol (medio de cultivo selectivo y diferencial)
55
Este medio, utilizado para aislar micobacterias, contiene glicerol, harina de patata, sales
y huevos coagulados (para solidificar el medio)= MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Medio de Lowenstein-Jensen.
56
Se trata de agares selectivos diferenciales utilizados para aislar e identificar especies distintas de bacterias y levaduras. Se trata de medios que llevan una serie de sustancias para cada especie, que utilizan de forma exclusiva. En función de las sustancias que utilice cada especie, su colonia saldrá de un color concreto.
Medios de cultivo cromogenicos
Un ejemplo es el que se desarrolló para el género Candida. Este medio contiene cloranfenicol para inhibir las bacterias y una mezcla de sustratos cromogénicos especiales. Las distintas especies de Candida cuentan con enzimas que permiten emplear uno o más de los sustratos, liberando el compuesto coloreado y generando colonias de colores.
Estos medios cromogénicos son incluso capaces de detectar si una bacteria es resistente al antibiótico. Si la bacteria hidroliza el antibiótico y lo destruye, el colorante se libera al medio y nos indica que es resistente. “Chromagar”.
57
Se trata de agares selectivos diferenciales utilizados para aislar e identificar especies distintas de bacterias y levaduras. Se trata de medios que llevan una serie de sustancias para cada especie, que utilizan de forma exclusiva. En función de las sustancias que utilice cada especie, su colonia saldrá de un color concreto.
Medios de cultivo cromogenicos
Un ejemplo es el que se desarrolló para el género Candida. Este medio contiene cloranfenicol para inhibir las bacterias y una mezcla de sustratos cromogénicos especiales. Las distintas especies de Candida cuentan con enzimas que permiten emplear uno o más de los sustratos, liberando el compuesto coloreado y generando colonias de colores.
Estos medios cromogénicos son incluso capaces de detectar si una bacteria es resistente al antibiótico. Si la bacteria hidroliza el antibiótico y lo destruye, el colorante se libera al medio y nos indica que es resistente. “Chromagar”.
58
Aparato que permite la deserción/ionización con láser asistida por matriz, acoplada a un analizador de tiempo de vuelo.
Esta tecnología se utiliza ahora ampliamente para la identificación de bacterias, micobacterias, levaduras y hongos filamentosos, y ha sustituido a las pruebas bioquímicas y morfológicas que fueron la piedra angular de la microbiología diagnóstica durante más de 100 años.
MALDI-TOF
59
¿En qué consiste MALDI-TOF?
- Tras cultivar la colonia, tomamos una muestra y colocamos la bacteria en un pocillo, que luego ponemos en un congelador gigante.
- Un aparato lanza un láser sobre la bacteria, la pulveriza y lo dispara hacia arriba, proyectándose sobre un detector.
- Se genera un espectrofotómetro de todos los componentes del patógeno. Los productos resultantes de la volatilización se van proyectando en el detector, y nos informa si se trata de un patógeno u otro.
El tiempo que tarda esto en darnos la información, es de 1 minuto. Prácticamente inmediato. Lo que pasa es que hay que crecer la bacteria, no podemos ahorrarnos el proceso de 24h de cultivar el inóculo de la muestra.
El problema de meter muestra biológica directamente es que se proyectará hacia arriba la bacteria + todos los componentes del paciente. Se pulveriza todo y se proyecta, y esto dificulta mucho la lectura. Se genera un espectro “sucio” (se está trabajando en esto para que no haya que esperar 1 día a que crezca y luego aplicar el MALDI TOF, sino simplemente con una muestra de sangre, que nos diga ya que tenemos).
60
Aunque se logre hacer MALDI TOF directamente usando muestras biológicas, seguimos necesitando el cultivo para poder hacer …: detectar qué antibióticos funcionan y a qué dosis (CMI).
antibiogramas
61
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS
○ Exposición resistente
○ Exposición sensible. Dentro de los sensibles, se diferencia entre:
- Sensibles de exposición normal
- Sensibles de exposición incrementada (hay que dar más dosis de antibiótico,
dentro de lo posible, y así funcionará)
62
Métodos de laboratorio para diagnosticar infecciones víricas (los más modernos)
1. Detección de proteínas víricas (antígenos y enzimas) [Sars-Cov2]
2. Detección de material genético vírico (PCR) [Sars-Cov2]
3. Serología: no nos vale para infección aguda porque es tardía.
63
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES (1)
64
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES (2)
65
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES
•Las muestras se deben obtener en una etapa … de la infección, antes de que deje de
eliminarse el virus.
•Por ejemplo, los virus respiratorios solamente se pueden aislar durante un período comprendido entre 3 y 7 días, y su diseminación puede interrumpirse con anterioridad a la desaparición de los síntomas.
•El VHS y el virus de la varicela-zóster (VVZ), o el ADN del virus, no se pueden obtener de las lesiones si han
transcurrido más de 5 días desde la aparición de la sintomatología.
precoz de la fase aguda
66
•Solo es posible aislar un enterovirus del LCR … días después de la aparición de las manifestaciones del
sistema nervioso central. Además, el anticuerpo producido como respuesta a la infección puede impedir la
detección del virus.
2-3
67
•Solo es posible aislar un enterovirus del LCR … días después de la aparición de las manifestaciones del
sistema nervioso central. Además, el anticuerpo producido como respuesta a la infección puede impedir la
detección del virus.
2-3
68
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES-CULTIVO CELULAR
•Los paramixovirus, el VHS, el VVZ y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) estimulan la formación de
…. Los … son células gigantes multinucleadas formadas como consecuencia de la fusión vírica de células individuales.
•Los … constituyen cambios histológicos de las células provocados por componentes víricos o bien alteraciones de las estructuras celulares inducidas por los virus.
sincitios
cuerpos de inclusión
69
DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES-CULTIVO CELULAR
•Los paramixovirus, el VHS, el VVZ y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) estimulan la formación de
…. Los … son células gigantes multinucleadas formadas como consecuencia de la fusión vírica de células individuales.
•Los … constituyen cambios histológicos de las células provocados por componentes víricos o bien alteraciones de las estructuras celulares inducidas por los virus.
sincitios
cuerpos de inclusión
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DIAGNÓSTICO MOLECULAR
El DNA, RNA o proteínas de un agente infeccioso en una muestra clínica se pueden utilizar para ayudar a identificarlo. Estas pruebas son muy sensibles y específicas y pueden acelerar el diagnóstico. Las técnicas moleculares como la … están reemplazando rápidamente a los métodos tradicionales como las pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias y hongos.
secuenciación de ácidos nucleicos y el análisis de proteínas mediante espectrometría
71
¿Qué tiene de especial una plataforma sindrómica?
En una misma PCR puedo detectar distintos virus.
Pero tiene dos grandes desventajas:
- El precio.
- No me informa a q es resistente, no puedo hacer antibiogramas.
72
Es un diagnóstico lento, porque desde que el paciente empieza a tener síntomas, no somos capaces de detectar anticuerpos en sangre hasta la 2o semana de infección.
Estas pruebas se usan para diagnosticar infecciones por virus y otros agentes difíciles de aislar y cultivar
en el laboratorio o que causan enfermedades de evolución más lenta (p. ej., hepatitis B o mononucleosis infecciosa causada por el virus de Epstein-Barr) .
Tiene lugar cuando se producen anticuerpos como respuesta a una infección primaria.
DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO
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Enfermedades con las que haríamos un diagnóstico serológico
hepatitis B o mononucleosis infecciosa causada por el virus de Epstein-Barr
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DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO
Periodo desde que el paciente se infecta hasta que somos capaces de detectar anticuerpos en sangre.
PERIODO VENTANA
Desde que uno se infecta hasta que encontramos Ab en sangre pueden pasar ocho semanas. Si queremos hacer un diagnóstico más certero en ese periodo, realizaremos una PCR (más cara).
75
Estas pruebas se usan para diagnosticar infecciones por virus y otros agentes difíciles de aislar y cultivar en el laboratorio, o que causan enfermedades de evolución más lenta. No nos vale para diagnosticar infección de manera aguda.
También nos pueden servir para hacer un diagnóstico diferido, para saber quién ha pasado la infección. Como los anticuerpos IgG permanecen de por vida, podemos hacer serología y ver quién lo ha pasado.
DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO
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¿Para qué es útil el estudio serológico?
- Estudios epidemiológicos
- Para patógenos que no se pueden cultivar o enfermedades de evolución lenta
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Ejemplo que se detecte mediante serologia porque no se pueda cultivar.
Treponema pallidum, patógeno de la sífilis.
