Avaliação da Resposta Imune na Prática Clínica Flashcards
O que é um imunoensaio?
Ensaio que deteta ou quantifica uma substância específica numa amostra biológica, usando o princípio da reação antigénio-anticorpo.
Qual é o objetivo do imunoensaio?
Estudar o sistema imune:
º Células do sistema imune;
º Proteínas do complemento;
º Avaliar resposta imune.
Como se avalia a resposta imune?
Através da presença de Acs:
º Acs contra Ags;
º IgEs (alergia);
º AutoAcs (doença autoimune).
O que são anticorpos policlonais?
Formação de clones de Acs para diferentes Ags.
Acs reconhecem diferentes epitopos no antigénio exposto.
São pouco úteis, por serem pouco específicos.
O que são anticorpos monoclonais?
Apenas 1 Ac para cada Ag.
Como se obtêm anticorpos monoclonais?
1º. Inoculação de um murganho com um determinado Ag.
2º. Retiram-se plasmócitos e faz-se a fusão destes com células do mieloma (confere IMORTALIDADE).
Qual a característica que permite que os imunocomplexos precipitem?
Elevado peso molecular.
Quais as técnicas baseadas em reacções de precipitação?
Dupla Difusão; Imunodifusão radial (IDR); Imunoeletroforese contracorrente; Imunoeletroforese; Imunoeletroforese rocket; Imunofixação.
Em que consiste a imunodifusão radial (IDR)?
Técnica manual, que faz avaliação QUANTITATIVA dos anticorpos.
Avalia a presença de antigénios e a sua concentração.
1.- O antigénio é depositado nos poços de um gel que contém o anticorpo, e vai difundir em todas as direções.
2.- Na zona de equivalência Atg-Atc, o complexo imune precipita num anel concêntrico.
3.- Comparando com amostras de concentração conhecida é possível fazer uma avaliação quantitativa da concentração de Ag na amostra.
º Através da curva padrão, relaciona-se o tamanho dos halos de precipitação com a concentração de Ag.
Quais são as aplicações da IDR?
Quantificação de Igs, incluindo as subclasses de IgG.
Quantificação das proteínas do complemento e de outras proteínas séricas.
Quais as desvantagens da IDR?
Demora muito tempo, tem custos elevados.
Por causa disto, só é usada em ensaios onde não haja opção automática.
É usada em laboratório para quantificar proteínas que raramente são pedidas (C5-C9).
Como funcionam as reações de aglutinação?
São testes QUALITATIVOS.
Pressupõem a existência de Ags na superfície de eritrócitos e bactérias, que, se se ligarem a Acs, floculam ou aglutinam.
A aglutinação é visível a olho nu.
São testes rápidos, úteis em situações urgentes.
Quais são as moléculas envolvidas no processo de aglutinação?
Aglutininas - são anticorpos.
º IgM (pentamérica) - é aglutinina por excelência, por ter maior tamanho e maior capacidade de fixação do Ag.
º IgG - aglutinina pobre, exige condições ótimas de pH e temperatura para a reação.
Quais são as aplicações das reações de aglutinação?
Tipagem sanguínea (sistema AB0, sistema Rh).
Deteção de anticorpos antieritrocitários.
Identificação de agentes microbianos.
Deteção e titulação de anticorpos antiagente microbiano.
Métodos que avaliam a dispersão da luz
Automatizados.
- Avaliam interação entre imunocomplexo e radiação que o atravessa.
º Tamanho do imunocomplexo é ponto chave;
º Dispersão da luz será avaliada direta ou indiretamente.
Dois tipos:
a) Nefelometria - mede a intensidade da luz REFRATADA.
b) Turbidimetria - mede a intensidade da luz TRANSMITIDA.
Quais são as aplicações da nefelometria e da turbidimetria?
- Doseamento de imunoglobulinas, respetivas cadeias leves e subclasses.
- Doseamento de fatores do complemento (AH50, CH100).
- Doseamento de proteínas de fase aguda:
º PCR;
º alfa-1-antitripsina;
º ceruloplasmina;
º haptoglobina;
º fatores reumatoides;
º TASO
Qual o objetivo dos métodos que utilizam marcadores/sondas?
Perceber se um determinado Ag/Ac está presente na amostra, utilizando depois um Ac com fluorocromo ou enzima que, ao ligar-se, causa mudança no meio.
Todos os ensaios de marcadores/sondas servem para RASTREIO.
Quais os diferentes métodos que utilizam marcadores/sondas?
- Direto;
- Indireto (+ utilizado);
- Inibição ou Competitivo Indireto;
- Competitivo (mede avidez da ligação);
- Sandwich Simples;
- Sandwich Dupla.
Em que consiste o EIA?
(Enzyme Immuno Assay)
- Usa as propriedades catalíticas das enzimas.
- Anticorpo com enzima = Ac-E
1. - Ac-E liga-se a Ag.
2. - Adiciona-se substrato da enzima.
3. - Avalia-se:- 1.- Diminuição do substrato;
- 2.- Aumento do produto de degradação.
Quais as enzimas utilizadas no EIA?
Fosfatase alcalina;
Peroxidase de rábano (HRP);
G6P desidrogenase;
Beta-galactosidase.
Qual a variante do EIA mais usada?
ELISA - Enzyme Lynked Immunosorbent Assay.
Quais as aplicações do EIA?
Doseamento de Igs, cadeias leves e subclasses;
Doseamento de avaliação funcional de fatores do complemento;
Monitorização de serologias infecciosas;
Monitorização de imunização;
Doseamento de marcadores tumorais;
Doseamento de hormonas.
Qual o teste usado para ensaios de avaliação de produção de citocinas e perforinas?
ELISpot.
Em que consiste o FEIA?
(Fluorescente Enzyme ImmunoAssay)
- Semelhante ao ELISA, mas com emissão de fluorescência.