Proteintechniken 2 Flashcards
Welche Maßnahmen ergreifen Sie um bei einem
Zellaufschluss Proteinabbau zu verhindern?
Die Probe wird auf eine geringe Temperatur gehalten (4°C), es werden denaturierende Detergenzien zur Probe hinzugegeben und es werden Proteinase- sowie Phoshataseinhibitoren zum Aufschluss gegeben. Um der Veränderung des pH-Wertes vorzubeugen wird ein Puffer zugesetzt.
Was ist eine Diskontinuierliche SDS-PAGE, was
kennzeichnet sie, und wie führt man sie durch?
Auftrennung in Sammelgel (pH= 6.8, geringere Acrylamidkonz., sorgt dafür das die Proben alle ca. gleichschnell am Laufgel ankommen) und dem eigentlichen Laufgel (pH= 8.8, höhere Acrylamidkonz.).
Zunächst wird das Laufgel, dann das Sammelgel gegossen, die Proben werden auf das Sammelgel gegeben und eine Spannung wird angelegt.
