Proteintechniken 1 Flashcards
Warum arbeitet man bei Western Blot Experimenten für gewöhnlich mit einem primären und einem sekundären AK’s? man könnte doch direkt den primären AK mit z.B. einer Peroxidase koppeln?
Primäre AK dienen der Erkennung eines bestimmten Antigens, sekundäre dienen der Erkennung der primären Antikörper und können mit mehr als einem interagieren (spart vor allem Kosten und Zeit, sonst müsste der prim- Antikörper einzeln an alle Enzyme koppeln).
Peroxidasen sind selber Proteine und würden zu verfälschten Ergebnissen führen.
Woraus besteht der Laemmli-Puffer und was bezwecken
die einzelnen Komponenten?
Der Laemmli-Puffer besteht aus Tris-Cl zum Puffern. 2% SDS, welches Proteine oder Ribozyme denaturiert. 10% Glycerol erhöht die Dichte der Probe, damit die Proben in die Taschen des Gels sinken können. 5% -Mercaptoethanol, welches die Disulfidbrücken von Proteinen löst und so die Denaturierung unterstützt. 0.01% Bromphenolblau wird als Farbstoff verwendet um die Lauffront der Probe zu markieren.
