Nukleinsäuretechniken 2

Question 1

Wodurch ist eine Multiple Cloning Site eines Plasmids

gekennzeichnet?

Answer 1

Multiple cloning site: Bereich auf einem Vektor der bis zu 50 Sequenzen groß ist. Jede dieser Sequenzen wird von je einer Restriktionsendunuklease erkannt. Sie wird z.B. in Plasmiden verwendet um mithilfe der Restriktionsenzyme Fremd-DNA in diese einzubauen.

Question 2

Nennen Sie die drei typischen Schnittmuster von Typ2-Restriktionsenzymen.

Answer 2

• Palindromsequenzen
• Bevorzugt Sticky-ends mit Überhang
• blunt ends

Question 3

Welche chemische Reaktion katalysiert die T4 DNA Ligase?

Answer 3

Sie erschafft eine neue 3’-5’ Phosphodiesterbindung unter Verbrauch von ATP, dabei greift die 3’OH-Gruppe das 5’-Phosphat Nukleophil an.
Sie ist in der Lage blunt und sticky-ends zu ligieren und kann unter anderem Doppelstrangbrüche reparieren.

Question 4

Welches sind für DNA Ligationen kompatible DNA-Enden, welche nicht?

Answer 4

Kompatibel:

• 3’ und 5’ Sticky-ends, müssen Komplementär sein, dann einfache Ligation
• blunt ends, immer kompatibel, aber aufwendigere Reaktion
• z.B. Schnittstellen von Restriktionsenzymen

Inkompatibel:

• Phosphorylierte Enden
• unpassende sticky ends