Nukleinsäuretechniken 1

Question 1

Wie bestimmt man photometrisch Konzentration und

Reinheit einer wässrigen Nukleinsäurelösung?

Answer 1

Nukleinsäuren absorbieren Licht bei einer Wellenlänge von 260 nm, Ribonukleinsäuren bei 280 nm.

Reine DNA hat eine Absorbtion Abs260/Abs280 von 1.8

Reine RNA hat eine Absorbtion Abs260/Abs280 von 2.0

Kleinere Werte deuten auf eine Verunreinigung mit Proteinen oder Ethanol hin, größere Werte auf vorhandene Phenolreste.

Question 2

Wie verändert sich UV-Absorbtion und Fluoreszenzemission der Verbindung Ethidiumbromid in Gegenwart von dsDNA und wofür verwendet man diese Verbindung?

Answer 2

Ethidiumbrimid interkaliert zwischen der DNA. Wenn es frei vorliegt liegen Exitations und Emissionsspektrum im UV-Bereich, ist es interkaliert liegen beide im Bereich zw. 200-300 nm.

Question 3

Was sind Plasmide, wofür verwendet man sie in der Molekularbiologie, welche Sequenzen sollten sie tragen?

Answer 3

Plasmid nennt man extrachromosomale, doppelsträngige und meist ringförmige DNA. Artifizielle Plasmide werden auch Vektoren genannt. In der Molekularbiologie werden sie für unterschiedliche Zwecke verwendet:

• Gentransfer/Klonierung
• Gen knockout/knockin
• Sequenzierung über BACs
• Vervielfältigung von Genen
• Proteosomanalyse
• Yeast-two Hybid essays

Sie benötigen folgende Sequenzen zum erfüllen ihrer Funktionen:

• einen eigenen Ori
• multiple cloning site
• Selektions Marker für den Wirt
• das zu inserierende Gen (sowie Terminator und Promotor)
• Restriktionsschnittstelle