Nukleinsäuretechniken 3 Flashcards
Welche enzymatischen Funktionen besitzt die Klenow Polymerase und wozu wird sie für Klonierungen benutzt?
Die Klenow-Polymerase macht aus zwei unterschiedlichen sticky-ends zwei blunt-ends welche dann von der T4 DNA-Ligase verbunden werden können.
Z.B. Klonierung
Beschreiben Sie, wie man mit einem geeigneten Plasmid durch Farbindikation Kolonien mit eigen-ligierten Plasmiden von Kolonien mit insert-tragenden Plasmiden unterscheiden kann.
Zunächst Selektiert man auf Plasmid-tragende Transformanten. Dann selektiert man über LacZ-Gene für Zellen bei denen ein Insert vorliegt. Das LacZ-Gen setzt bei Zugabe von beta-Galaktosidase, dieses in den blauen Farbstoff X-Gal um. Bei einem Insert werden die Lac-Z Gene zerstört, die Kolonien bleiben nach Zugabe von beta-Galaktosidase weiß.
Was bezeichnet man als ektopische Integration?
(Unspezifische) Integration der Gene an einem anderen (zufälligen) Genlokus als es bei der homologen Rekombination vorgesehen ist. Dies kann zur Deletion von wichtigen Genen oder zu Zusatzmutationen führen, das Zielgen wird jedoch nicht mutiert.
