mirkobiologija 1. kolokvij Flashcards
1
Q
o’piši 5 korakov razkuževanja rok
A
- dlan ob dlan s prekrižanimi prsti 5x
- očistimo po hrbtišču rok s prekrižanimi prsti 5x
- členke drgnemo ob dlan
- očistimo palec
- damo prste skupaj in konice rok drgnemo ob dlan
2
Q
ali razkuževanje ubije vse mikrobe?
A
ne. vedno jih nekaj ostane.
3
Q
kaj je v mikrobiološkem laboratoriju prepovedano in kaj moramo ?
A
- moramo vzdrževati red in čistočo
- moramo preprečevati okužbo ljudi in kontaminacijo
- preiskovanega materiala,
- opreme
- okolja
- pustimo v omaricah vrhnej obleke in oblečemo belo haljo, ki je zaprta
- iammo spete lase
- okna in vrata so odprta
NE SMEMO
- kaditi
- piti, jesit
- žvečiti čigumi
- telefonirati
- hitro se premikati
- glasno govoriti
- vstavlajti kontaktnih leč
- se ličiti
- z rokami se ne dotikamo obraza, predvsem ne okrog nosu, ust, oči
4
Q
zaščitni ukrepi pri delu s patogenimi mikrobi
A
- laboratorij s podtlakom
- komora
- zaščitna obleka
- roakvice
- zaprta okna
- maska
5
Q
če kontaminiramo pult kaj nareidmo?
A
položimo čez papirnato brisačko, damo čez razkužilo in počakamo najmanj 1h da se posuši.
6
Q
predno zapustimo laboratorij anredimo kaj?
A
- ugasnemo gorilnik
- preverimo da so zaprte pipe za vodo in ventil za dovod plina
- počistimo in pospravimo delovno površino
- očistimo mikroskop in ga pospravimo v omaro
- haljo pospravimo an ustrezno mesto
7
Q
kaj je bakteriološka zanka?
A
zanka za prenašanje bakterij iz enega na drugo gojišče
8
Q
kaj je elenmajerica?
A
stožčasta steklenica za gojišča
9
Q
kaj je petrijevka?
A
ploščata posoda s pokrovom, v kateri gojimo bakterije
10
Q
kako imenujemo laboratorijski plinski gorilnik?
A
bunsenov gorilnik
11
Q
kaj je termostat oz. inkubator?
A
aparat s kontrolirano temperaturo za gojenje mikrobov
12
Q
kaj ej mikrobiološki laboratorij?
A
- prostor kjer opravljamo mirkobiološke preiskave
13
Q
razdelitev laboratorijev glede na vrsto mirkobov - po stopnji nevarnosti
A
STOPNJA 1
- nepatogeni mikrobi,
-halja
STOPNJA 2
- mikrobi z zmenro patogenostjo in majhno smrtnostjo
-uspešna zdravila za bolezen
- halja, rokavice, če potrebno maska
STOPNJA 3
- mikrobi z veliko patogenostjo in/ali smrtnostjo
- zdravljenje z zdravili težko in dolgotrajno
- zaščitna komora, podtlak v laboratoriju, kombenzion, zaščitna maska
STOPNJA 4
- najbolj patognei mikrobi, velika smrtnost
- ni zdravila
- podtlak, skafander, zaščitna komora
14
Q
kdaj opravljamo dleo v zaščitni komori in kakšne tipe zaščitne komore poznaš?
A
- če pri dleu obstaja nevarnost nastanka aerosola
- ščiti delavca
- ščiti vzorec in delavca
- ščiti delavca, vzorce in okolje
15
Q
kaj naredimo če kontaminiramo sebe z mikrobi?
A
- obvestimo vodjo
- se razkužimo
16
Q
če obstaja nevarnsot kužnega aerosola, nareidmo kaj?
A
- opozorimo ostale: pozor kužni aerosol
- zadržimo dih in s čim manj gibi zapustimo laboratorij
- ko se aerosol poleše (cca 1h) začnemo dekontaminacijo
17
Q
kaj je avtoklav?
A
- laboratorijska oprema, ki nam sterelizira kužni amterial
18
Q
centrifuga, centrifugiranje? kako izražamo hitrost
A
- hitrost izražamo z obrati an minuto
- hitros izražamo s pospeški prostega pada
- centrifugiramo v kiveti. pazi na uravnoteženost
19
Q
kaj je maldi-top?
A
- laboratorijska oprema
- naprava za identifikacijo bakterij
20
Q
Katere kriterije upoštevamo pri opisu kolonij?=
A
- velikost
- barva
*sive
*nepigmentirane.
… - oblika
- profil
- rob
- površina
*izbočene
*vdrti centri
*nagubane
… - konsistenca
- hemoliza (samo an krvnem agarju)
*popolna
*nepopolna
21
Q
potek barvanja po Lofflerju
A
- na predmetnici suspendiramo kulturo v kapljici fiziološke raztopine
- posušimo razmaz na zraku
- fiksiramo - preparat potegnemo 3x skozi plamen
- barvamo 2 minuti z metilenskim modrilom
- speremo z vodovodno vodo
- posušimo preparat
- pogledamo pod imerzijskim objektivom z imerzijskim oljem
22
Q
kaj opazujemo ko mikroskopiramo obarvane preparate?
A
- velikost celic
- mejhne
- velike
- oblika
- koki
- paličke (tanke,kratke,dolge)
- razporejanje
- posamično
- v parih
- v skupkih
- v grozdih
- v tetradah
- v verižicah
- barva
- modro
- vijolično
- rdeče
23
Q
kaj je kultura?
A
gojišče + kolonija
24
Q
kako se pripravi razmaz?
A
- tekoča kultura
- kanemo kapljico na predmetnico
- suspenzijo bakterij razmažemo, 2 mm stran od roba - kultura na trdnem gojišču
- v kapljico fiziološke raztopine na predmetnici suspendiramo delček kolinje, ki smo ga z bakteriološko zanko posneli iz gojišča
- razmažemo
25
kako fiksiramo razmaze?
- 3x potegnemo skozi plamen
- kemijska fiksacija
* s alkoholom, formalinom, acetonom
26
kako ločimo barvanja?
ENOSTAVNA
- le eno barvilo
- po lofflerju
* metilensko modrilo
* vidimo temne celice na svetlem ozadju (pozitivno barvanje)
* negativno barvanje: črnilo obda celice, vidiš svetlo celico na temnem ozadju
- po pfeifferju
* karboni fuksin
SESTAVLJENA
- več barvil
- simultana
* več barvil hkrati
* po Giemsi (krvni razmaz)
- sukcesivna
* barvila ena za drugo po vrsti
* po Gramu (za ugotavljanje tipa bakterijske stene)
27
priprava nativnega preparata
- tekoče gojišče
* kanem an predmetno steklce
- kultura na trdnem gojišču
* fizo. raztopina na predmetnico (kapljica)
* z ezo posnameo delček kolonije
* suspendiranje v fiziološki
- kapljico pokrijemo s pokrovnim steklcem (ne sme biti mehurčkov)
28
kakšne so gram negativne in kakšne gram pozitivne bakterije? (zgradba bakterijske stene)
GRAMNEGATIVNE
- iamjo lipidni sloj
- imajo peptidoglikan (murein)
* tanek
- imajo citoplazemsko membrnao
GRAMPOZITIVNE
- iamjo etidoglikan (murein)
* debel
- imajo citoplazemsko membrnao
29
opiši postopek barvanja po gramu
- priprava razmaza
- fiksiranje nad plamenom
- barvanje z gencianskim vijoličnim
- fiksaciaj barvila z lugolom
- razbarvanje z etanolom
- Kontrastno barvanje s karbolnim fuksinom
(safraninom)
- spiranje z vodo
- sušenje
30
kako se obarvajo gram + in kako gram -
GRAM+: modrovijolično
*debela celična stena
GRAM-: rdeče
*tanka celična stena
31
mikroskopiranje obarvanih predmetov
- nastavimo imerzijski objektiv
- dvignjen kondenzator
- zaslonka povsem odprta
- kanemo imerzijsko olje na preparat
- preparat vstavimo an mizico
- GLEDAMO OD
STRANI! Z makrometrskim
vijakom potopimo lečo objektiva
v imerzijsko olje do predmetnice
- zelo počasi z mirkometrskim vijakom spuščamo mizico, dokler ne vidimo slike
32
mikroskopiranje nativnih preparatov
- kondenzor nekoliko spuščen
- zaslonka delno zastrta
- imerzijsko olje na preparat kanemo
- vstavimo preparat na mizico
33
kakšne so lahko napake pri barvanju?
- Predebel in pregost razmaz
* ne moramo opazovati oblike
- barvanje prestarih kultur
* stene so okvarjane
* gram+ se razbarvajo z etanolom
- premalo razbarvamo
* gram - vidne kot gram +
34
kaj je kolonija?
mikrobi na gojišču
35
kaj ej priamrna kultura
| kaj je sekundarna kultura?
primarna:
- gledaš' če je na njej kaj zrastlo
sekundarna kultura:
- čista kultura
- ko presadiš kulturo, da kolonije razrečiš - da jih lažje opazuješ
36
kaj gledaš pri primarni kulturi?
1. Raste ali ne
2. Gostota
3. Koliko je različnih vrst
4. Če so zelo tipične za povzročitelja določene bolezni
37
kaj opazujemo pri nativnem preparatu?
- oblika
- velikost
- gibljivost
* pazi an brownovo gibanje = gibanje zaradi tekočega gibanja, ni dejansko gibanje kolonij
38
priprava obarvanih preparatov
- držimo se navodil proizvajalca
- Po zadnjem spiranju posušimo
- Na predmetnico napišeš za kateri vzorec gre in da veš na kateri strani je vzorec
39
kaj je dobro da napišeš na dopis, ko pošiljaš nek vzorec v laboratorij?
- lastnik
- označevalec
- opis živali
* ime
* št. čipa
* pasma
* starost
* teža
* velikost
- anamneza
- prejšnja zdravljenja
- kdo bo kril stroške
40
kaj je pomembno na področju virologije?
preventiva
41
kako se lahko prenaša virus slinavke in parkljevke?
50km z aerosolom in vetrom
42
kaj naredimo ko zapustimo virološki laboratorij?
- zamenjamo obleko,
- se stuširamo,
- se dezinficiramo,
- nekaj časa en smemo imeti stik z živalmi,
- tekoči odpadki morajo iti skozi sterilizacijo
- V laboratoriju je hepa sistem filtrov --> zadržuje virusne delce
43
viruloška preiskava. kaj je name
- neamen: ugutovit povzročitelja okužbe
- postaviti je treba etiološko diagnozo - ime in priimek virusa
- osnovna klasična preiskava: IZOLACIJA
* osnovno gojišče: celične kulture
44
na kateri 2 stvari razdelimo virološko preiskavo?
- dokaz protiteles
| - dokaz prisotnosti virusa
45
kater preiskave delamo ko dokazujemo prisotnost virusa?
- izoloacija
- imunohistologija
- elektronski mikroskop
- molekolarne metode
46
s čim lahko determiniramo izolate?
- z izolacijo
| - z molekularnimi metodami
47
ko gledmao virus pod el mikroskopom do kam lahko determiniramo virus in na kaj moramo paziti?
- V vzorcu rabimo veliko količino virusnih partiklov
| - Determiniramo do nivoja družine
48
veliksot virusa
- najmanjši 20nm
| - največji- 400-450nm
49
s čim lahko določimo le vrsto virusa?
- imunohistologija
| - molekularne metode
50
kakšna je osnovna zgradba virusa?
- nuklokapsida
* notri so nuklinske kisline
- plašč
* lipoproteinski
51
katere vzorce odvzamemo živimi živalim?
- kri
* nativna --> koagulira, dobimo serum
* kri z antikoagulantom , dobimo vse krvne celice
* v laboratorij ne sme pridt hemolitična kri, eritrociti ne smejo popokat
- brisi
* nosni
* vaginalni
* kožni
* žrelni
- vzorec mleka
* ni tako pogost, ker ne povzroča veliko verusov mastitisov
- punktat, biopsat
- laringotrahealni vzorec
* probang metoda
* respiratorna obolenja
- blato
* če sumimo da gre za enterocitna obolenja
52
kako zgledajo brisi za odvzem vzorca
- eprueta s transportnim gojiščem
| * stabilizira virus, in zavira razmnoževanje bakterij saj vsebuje antibiotike
53
kdaj delamo probang?
- z njim odvzamemo vzorec za viruloško preiskava
- če sumimo da gre za slinavko ali parkljevko
- S čašo postrgamo po sluznici orofarixa,
* odstranjevanje tujkov
- nato prepipetiraš v epruveto
54
kakšen je vzorec polne krvi?
to je kri z vsemi sestavinami
- krvna plazma
- krvne celice
- brez koagulansa
55
kako pridobimo serum
- v čisto in sterilno eprueto odvzamemo kri
- pustimo jo stati na sobni T --> kri koagulira
- s centrifugiranjem ločimo kaogulum in serum
- serum uporabimo za serološke preiskave,za določanje protiteles
56
odvzem vzorcev pri poginjenih živalih. na kaj moramo paziti?
- odvzem ob sekciji
*koščki parenhimiskih organov - velikost oreha
jetra
vranica
pljuča
ledvica
bezgavke
*blato, koščki kože, možgani
- ustrezen transport (1-8 C)
- transportni medij
*dodan je antibiotik
- vzorce odvzamemo s sterilnim priborom
- vsebino enega vzorca ne smemo kontaminirati z vsebino drugega
57
iz kje s elahko kri odvzema ? koliko?
- količina: 5-10 ml
lab živali
- iz srca
- iz očesnega kota
vse živali
- ušesne vene
- mamarne vene
- repne vene
58
kakšen vzorec uporabimo če sumimo da gre za steklino?
- vzorec možganov
| * amanov rog --> največja količina virusa
59
kaj je brezprašna komora?
- zagotovi visoko stopnjo čistosti in sterilnosti pri horizontalnem načinu gibanja zraka
- uporabimo ga za delo v sterilnih razmerah
60
kako obdelamo virusne vzorce?
- homogenizacija koščkov organov vzorca
* terilnica (dodamo pesek)
* z mehanskim dezintegratorjem
* mastikator
* sonifiaktor
- suspenzija homogenata (1:10)
- centrifugiranje
- filtracija vzorca
* odstranitev bakterij
61
s čim identificiramo virusne izolate?
- izolacija
* biološki poskus
* kokošji zarodek
* celične kulture
- elektronska mikroskopija
- nevtralizacija virusa
- IF ali IP test
- ELISA
- PCR
- referenčni laboratorij
62
naštejte načine gojenaj virusa oz. inokulacije
- biološki poskus: lab. živali
* intramuskularna alpikacija
* intravenozna aplikaciaj
* intracerebralna apliakcija
* intraperitonealna aplikacija
- kokošji zarodek (oplojeno jajce)
- celične kulture
63
opišite postopek priprave preparata za preiskavo z el. mikroskopom
- pripravimo 10% suspenzijo vzorca v PBS
* rabimo veliko število virusov
- kapljico nanesemo na elektronskomikroskopsko mrežo
* 3mm
* zlata
- dadoamo kapljico fiksativa (2,5% gluteraldehid)
- inkubiramo 5 min
- preparat kontrastiramo s 3% fosforvolframovo kislino ali svičevim acetatom (sol težkih kovin)
- preiščemo pod mikroskopom
* slika je elektronska gostota preparata
64
naštej nujne 'pogoje za transport vzorcev za viruloško preiskavo
- vzorci so zapakirani v nepredušnih posodah
- vzorci so označeni
- vzorce damo v torbo s ledenimi kockami (1-8 C)
- uporabimo transportno gojišče.
* antibiotik
* puferna raztopina za vzdrževanje pH
* albumini
65
kaj je centrifugirnajee-
opiši vste centrifuhe
vrste rotorjov pri centrifugi
- z njem dosežemo ločevanje posameznih delcev.
- osnovi del centrifuge je rotor
* rotorji s stalnim angibom (kotni rotorji)
* rotorji s sspremenljivim nagibom
- počasne, hitre in ultracentrifuge (polje vrtenja v vakumu)
- ene centrifuge imajo haldilne sisteme
66
kako določimo moč centrifugiranja?
RFC= (rpm)2 x r x g
```
rpm= rounds per minure
r= razdalja delca od osi
g= gravitacijski pospešek (0,98 m/s)
```
67
neposredne in psoredne virusne preiskave
NEPOSREDNE
- dokaz prisotnosti virusa
- prisotnost virusnega antigena
- prisotnost virusnega genoma
POSREDNE
- serološke
* dokazuje prisotnort specifičnih protiteles proti virusnemo genomu
68
od česa je odvisna uspešnost ločevanja centrifuge?
- radialni pospešek
| - gostota medija
69
vrste el. mikroskopov
- presevalni el mikroskop
(do 1nm razloči)
-svetlobni el. mikroskop
(nad 200nm loči)
70
kaj je kalibracija?
```
a je niz operacij za ugotavljanje
povezave med vrednostmi, ki jih kaže
instrument ali merilni sistem, in pripadajočimi
vrednostmi, realiziranimi z etaloni, pod
določenimi pogoji.
```
71
za kaj je primerno normalno in za kaj reverzno pipetiranje?
normalno:
tekočine/reagenti na vodni osnovi
reverzno
viskozne tekočine/reagenti
72
kaj je mikropipeta?
je pripomoček za
natančno odmerjanje
tekočin/reagentov majhnih
volumnov (0,1 – 1200 μL)
73
pipetiranje
- nastavni ustrezni volumen
-namestimo pipetni nastavek
*čvrsto pritrdimo
*mikropipeto držimo pokončno
- potisni bat do prve stopnje
- – pipetni nastavek
potopite v tekočino/reagent
- počasi spusti bat, da se vrne v prvotni položaj
- previdno
pritisnite bat do prve stopnje
in nato še do druge stopnje,
da iztisnete celotno vsebino
nastavka. Počakajte ca. 2
sekundi!
- bat še vedno držiš na drugi stopnji in dvigneš mikropipeto iz jamice kamor si pipetiral
- – nastavek
odstranite s pritiskom na
pipetni izmetalec
