mirkobiologija 1. kolokvij Flashcards
o’piši 5 korakov razkuževanja rok
- dlan ob dlan s prekrižanimi prsti 5x
- očistimo po hrbtišču rok s prekrižanimi prsti 5x
- členke drgnemo ob dlan
- očistimo palec
- damo prste skupaj in konice rok drgnemo ob dlan
ali razkuževanje ubije vse mikrobe?
ne. vedno jih nekaj ostane.
kaj je v mikrobiološkem laboratoriju prepovedano in kaj moramo ?
- moramo vzdrževati red in čistočo
- moramo preprečevati okužbo ljudi in kontaminacijo
- preiskovanega materiala,
- opreme
- okolja
- pustimo v omaricah vrhnej obleke in oblečemo belo haljo, ki je zaprta
- iammo spete lase
- okna in vrata so odprta
NE SMEMO
- kaditi
- piti, jesit
- žvečiti čigumi
- telefonirati
- hitro se premikati
- glasno govoriti
- vstavlajti kontaktnih leč
- se ličiti
- z rokami se ne dotikamo obraza, predvsem ne okrog nosu, ust, oči
zaščitni ukrepi pri delu s patogenimi mikrobi
- laboratorij s podtlakom
- komora
- zaščitna obleka
- roakvice
- zaprta okna
- maska
če kontaminiramo pult kaj nareidmo?
položimo čez papirnato brisačko, damo čez razkužilo in počakamo najmanj 1h da se posuši.
predno zapustimo laboratorij anredimo kaj?
- ugasnemo gorilnik
- preverimo da so zaprte pipe za vodo in ventil za dovod plina
- počistimo in pospravimo delovno površino
- očistimo mikroskop in ga pospravimo v omaro
- haljo pospravimo an ustrezno mesto
kaj je bakteriološka zanka?
zanka za prenašanje bakterij iz enega na drugo gojišče
kaj je elenmajerica?
stožčasta steklenica za gojišča
kaj je petrijevka?
ploščata posoda s pokrovom, v kateri gojimo bakterije
kako imenujemo laboratorijski plinski gorilnik?
bunsenov gorilnik
kaj je termostat oz. inkubator?
aparat s kontrolirano temperaturo za gojenje mikrobov
kaj ej mikrobiološki laboratorij?
- prostor kjer opravljamo mirkobiološke preiskave
razdelitev laboratorijev glede na vrsto mirkobov - po stopnji nevarnosti
STOPNJA 1
- nepatogeni mikrobi,
-halja
STOPNJA 2
- mikrobi z zmenro patogenostjo in majhno smrtnostjo
-uspešna zdravila za bolezen
- halja, rokavice, če potrebno maska
STOPNJA 3
- mikrobi z veliko patogenostjo in/ali smrtnostjo
- zdravljenje z zdravili težko in dolgotrajno
- zaščitna komora, podtlak v laboratoriju, kombenzion, zaščitna maska
STOPNJA 4
- najbolj patognei mikrobi, velika smrtnost
- ni zdravila
- podtlak, skafander, zaščitna komora
kdaj opravljamo dleo v zaščitni komori in kakšne tipe zaščitne komore poznaš?
- če pri dleu obstaja nevarnost nastanka aerosola
- ščiti delavca
- ščiti vzorec in delavca
- ščiti delavca, vzorce in okolje
kaj naredimo če kontaminiramo sebe z mikrobi?
- obvestimo vodjo
- se razkužimo
če obstaja nevarnsot kužnega aerosola, nareidmo kaj?
- opozorimo ostale: pozor kužni aerosol
- zadržimo dih in s čim manj gibi zapustimo laboratorij
- ko se aerosol poleše (cca 1h) začnemo dekontaminacijo
kaj je avtoklav?
- laboratorijska oprema, ki nam sterelizira kužni amterial
centrifuga, centrifugiranje? kako izražamo hitrost
- hitrost izražamo z obrati an minuto
- hitros izražamo s pospeški prostega pada
- centrifugiramo v kiveti. pazi na uravnoteženost
kaj je maldi-top?
- laboratorijska oprema
- naprava za identifikacijo bakterij
Katere kriterije upoštevamo pri opisu kolonij?=
- velikost
- barva
*sive
*nepigmentirane.
… - oblika
- profil
- rob
- površina
*izbočene
*vdrti centri
*nagubane
… - konsistenca
- hemoliza (samo an krvnem agarju)
*popolna
*nepopolna
potek barvanja po Lofflerju
- na predmetnici suspendiramo kulturo v kapljici fiziološke raztopine
- posušimo razmaz na zraku
- fiksiramo - preparat potegnemo 3x skozi plamen
- barvamo 2 minuti z metilenskim modrilom
- speremo z vodovodno vodo
- posušimo preparat
- pogledamo pod imerzijskim objektivom z imerzijskim oljem
kaj opazujemo ko mikroskopiramo obarvane preparate?
- velikost celic
- mejhne
- velike
- oblika
- koki
- paličke (tanke,kratke,dolge)
- razporejanje
- posamično
- v parih
- v skupkih
- v grozdih
- v tetradah
- v verižicah
- barva
- modro
- vijolično
- rdeče
kaj je kultura?
gojišče + kolonija
kako se pripravi razmaz?
- tekoča kultura
- kanemo kapljico na predmetnico
- suspenzijo bakterij razmažemo, 2 mm stran od roba - kultura na trdnem gojišču
- v kapljico fiziološke raztopine na predmetnici suspendiramo delček kolinje, ki smo ga z bakteriološko zanko posneli iz gojišča
- razmažemo
kako fiksiramo razmaze?
- 3x potegnemo skozi plamen
- kemijska fiksacija
- s alkoholom, formalinom, acetonom
kako ločimo barvanja?
ENOSTAVNA
- le eno barvilo
- po lofflerju
- metilensko modrilo
- vidimo temne celice na svetlem ozadju (pozitivno barvanje)
- negativno barvanje: črnilo obda celice, vidiš svetlo celico na temnem ozadju
- po pfeifferju
- karboni fuksin
SESTAVLJENA
- več barvil
- simultana
- več barvil hkrati
- po Giemsi (krvni razmaz)
- sukcesivna
- barvila ena za drugo po vrsti
- po Gramu (za ugotavljanje tipa bakterijske stene)
priprava nativnega preparata
- tekoče gojišče
- kanem an predmetno steklce
- kultura na trdnem gojišču
- fizo. raztopina na predmetnico (kapljica)
- z ezo posnameo delček kolonije
- suspendiranje v fiziološki
- kapljico pokrijemo s pokrovnim steklcem (ne sme biti mehurčkov)
kakšne so gram negativne in kakšne gram pozitivne bakterije? (zgradba bakterijske stene)
GRAMNEGATIVNE
- iamjo lipidni sloj
- imajo peptidoglikan (murein)
- tanek
- imajo citoplazemsko membrnao
GRAMPOZITIVNE
- iamjo etidoglikan (murein)
- debel
- imajo citoplazemsko membrnao
opiši postopek barvanja po gramu
- priprava razmaza
- fiksiranje nad plamenom
- barvanje z gencianskim vijoličnim
- fiksaciaj barvila z lugolom
- razbarvanje z etanolom
- Kontrastno barvanje s karbolnim fuksinom
(safraninom) - spiranje z vodo
- sušenje
kako se obarvajo gram + in kako gram -
GRAM+: modrovijolično
*debela celična stena
GRAM-: rdeče
*tanka celična stena
mikroskopiranje obarvanih predmetov
- nastavimo imerzijski objektiv
- dvignjen kondenzator
- zaslonka povsem odprta
- kanemo imerzijsko olje na preparat
- preparat vstavimo an mizico
- GLEDAMO OD
STRANI! Z makrometrskim
vijakom potopimo lečo objektiva
v imerzijsko olje do predmetnice - zelo počasi z mirkometrskim vijakom spuščamo mizico, dokler ne vidimo slike
mikroskopiranje nativnih preparatov
- kondenzor nekoliko spuščen
- zaslonka delno zastrta
- imerzijsko olje na preparat kanemo
- vstavimo preparat na mizico
kakšne so lahko napake pri barvanju?
- Predebel in pregost razmaz
- ne moramo opazovati oblike
- barvanje prestarih kultur
- stene so okvarjane
- gram+ se razbarvajo z etanolom
- premalo razbarvamo
- gram - vidne kot gram +
kaj je kolonija?
mikrobi na gojišču
kaj ej priamrna kultura
kaj je sekundarna kultura?
primarna:
- gledaš’ če je na njej kaj zrastlo
sekundarna kultura:
- čista kultura
- ko presadiš kulturo, da kolonije razrečiš - da jih lažje opazuješ
kaj gledaš pri primarni kulturi?
- Raste ali ne
- Gostota
- Koliko je različnih vrst
- Če so zelo tipične za povzročitelja določene bolezni
kaj opazujemo pri nativnem preparatu?
- oblika
- velikost
- gibljivost
- pazi an brownovo gibanje = gibanje zaradi tekočega gibanja, ni dejansko gibanje kolonij
priprava obarvanih preparatov
- držimo se navodil proizvajalca
- Po zadnjem spiranju posušimo
- Na predmetnico napišeš za kateri vzorec gre in da veš na kateri strani je vzorec
kaj je dobro da napišeš na dopis, ko pošiljaš nek vzorec v laboratorij?
- lastnik
- označevalec
- opis živali
- ime
- št. čipa
- pasma
- starost
- teža
- velikost
- anamneza
- prejšnja zdravljenja
- kdo bo kril stroške
kaj je pomembno na področju virologije?
preventiva
kako se lahko prenaša virus slinavke in parkljevke?
50km z aerosolom in vetrom
kaj naredimo ko zapustimo virološki laboratorij?
- zamenjamo obleko,
- se stuširamo,
- se dezinficiramo,
- nekaj časa en smemo imeti stik z živalmi,
- tekoči odpadki morajo iti skozi sterilizacijo
- V laboratoriju je hepa sistem filtrov –> zadržuje virusne delce
viruloška preiskava. kaj je name
- neamen: ugutovit povzročitelja okužbe
- postaviti je treba etiološko diagnozo - ime in priimek virusa
- osnovna klasična preiskava: IZOLACIJA
- osnovno gojišče: celične kulture
na kateri 2 stvari razdelimo virološko preiskavo?
- dokaz protiteles
- dokaz prisotnosti virusa
kater preiskave delamo ko dokazujemo prisotnost virusa?
- izoloacija
- imunohistologija
- elektronski mikroskop
- molekolarne metode
s čim lahko determiniramo izolate?
- z izolacijo
- z molekularnimi metodami
ko gledmao virus pod el mikroskopom do kam lahko determiniramo virus in na kaj moramo paziti?
- V vzorcu rabimo veliko količino virusnih partiklov
- Determiniramo do nivoja družine
veliksot virusa
- najmanjši 20nm
- največji- 400-450nm
s čim lahko določimo le vrsto virusa?
- imunohistologija
- molekularne metode
kakšna je osnovna zgradba virusa?
- nuklokapsida
- notri so nuklinske kisline
- plašč
- lipoproteinski
katere vzorce odvzamemo živimi živalim?
- kri
- nativna –> koagulira, dobimo serum
- kri z antikoagulantom , dobimo vse krvne celice
- v laboratorij ne sme pridt hemolitična kri, eritrociti ne smejo popokat
- brisi
- nosni
- vaginalni
- kožni
- žrelni
- vzorec mleka
- ni tako pogost, ker ne povzroča veliko verusov mastitisov
- punktat, biopsat
- laringotrahealni vzorec
- probang metoda
- respiratorna obolenja
- blato
- če sumimo da gre za enterocitna obolenja
kako zgledajo brisi za odvzem vzorca
- eprueta s transportnim gojiščem
* stabilizira virus, in zavira razmnoževanje bakterij saj vsebuje antibiotike
kdaj delamo probang?
- z njim odvzamemo vzorec za viruloško preiskava
- če sumimo da gre za slinavko ali parkljevko
- S čašo postrgamo po sluznici orofarixa,
- odstranjevanje tujkov
- nato prepipetiraš v epruveto
kakšen je vzorec polne krvi?
to je kri z vsemi sestavinami
- krvna plazma
- krvne celice
- brez koagulansa
kako pridobimo serum
- v čisto in sterilno eprueto odvzamemo kri
- pustimo jo stati na sobni T –> kri koagulira
- s centrifugiranjem ločimo kaogulum in serum
- serum uporabimo za serološke preiskave,za določanje protiteles
odvzem vzorcev pri poginjenih živalih. na kaj moramo paziti?
- odvzem ob sekciji
*koščki parenhimiskih organov - velikost oreha
jetra
vranica
pljuča
ledvica
bezgavke
*blato, koščki kože, možgani - ustrezen transport (1-8 C)
- transportni medij
*dodan je antibiotik - vzorce odvzamemo s sterilnim priborom
- vsebino enega vzorca ne smemo kontaminirati z vsebino drugega
iz kje s elahko kri odvzema ? koliko?
- količina: 5-10 ml
lab živali
- iz srca
- iz očesnega kota
vse živali
- ušesne vene
- mamarne vene
- repne vene
kakšen vzorec uporabimo če sumimo da gre za steklino?
- vzorec možganov
* amanov rog –> največja količina virusa
kaj je brezprašna komora?
- zagotovi visoko stopnjo čistosti in sterilnosti pri horizontalnem načinu gibanja zraka
- uporabimo ga za delo v sterilnih razmerah
kako obdelamo virusne vzorce?
- homogenizacija koščkov organov vzorca
- terilnica (dodamo pesek)
- z mehanskim dezintegratorjem
- mastikator
- sonifiaktor
- suspenzija homogenata (1:10)
- centrifugiranje
- filtracija vzorca
- odstranitev bakterij
s čim identificiramo virusne izolate?
- izolacija
- biološki poskus
- kokošji zarodek
- celične kulture
- elektronska mikroskopija
- nevtralizacija virusa
- IF ali IP test
- ELISA
- PCR
- referenčni laboratorij
naštejte načine gojenaj virusa oz. inokulacije
- biološki poskus: lab. živali
- intramuskularna alpikacija
- intravenozna aplikaciaj
- intracerebralna apliakcija
- intraperitonealna aplikacija
- kokošji zarodek (oplojeno jajce)
- celične kulture
opišite postopek priprave preparata za preiskavo z el. mikroskopom
- pripravimo 10% suspenzijo vzorca v PBS
- rabimo veliko število virusov
- kapljico nanesemo na elektronskomikroskopsko mrežo
- 3mm
- zlata
- dadoamo kapljico fiksativa (2,5% gluteraldehid)
- inkubiramo 5 min
- preparat kontrastiramo s 3% fosforvolframovo kislino ali svičevim acetatom (sol težkih kovin)
- preiščemo pod mikroskopom
- slika je elektronska gostota preparata
naštej nujne ‘pogoje za transport vzorcev za viruloško preiskavo
- vzorci so zapakirani v nepredušnih posodah
- vzorci so označeni
- vzorce damo v torbo s ledenimi kockami (1-8 C)
- uporabimo transportno gojišče.
- antibiotik
- puferna raztopina za vzdrževanje pH
- albumini
kaj je centrifugirnajee-
opiši vste centrifuhe
vrste rotorjov pri centrifugi
- z njem dosežemo ločevanje posameznih delcev.
- osnovi del centrifuge je rotor
- rotorji s stalnim angibom (kotni rotorji)
- rotorji s sspremenljivim nagibom
- počasne, hitre in ultracentrifuge (polje vrtenja v vakumu)
- ene centrifuge imajo haldilne sisteme
kako določimo moč centrifugiranja?
RFC= (rpm)2 x r x g
rpm= rounds per minure r= razdalja delca od osi g= gravitacijski pospešek (0,98 m/s)
neposredne in psoredne virusne preiskave
NEPOSREDNE
- dokaz prisotnosti virusa
- prisotnost virusnega antigena
- prisotnost virusnega genoma
POSREDNE
- serološke
- dokazuje prisotnort specifičnih protiteles proti virusnemo genomu
od česa je odvisna uspešnost ločevanja centrifuge?
- radialni pospešek
- gostota medija
vrste el. mikroskopov
- presevalni el mikroskop
(do 1nm razloči)
-svetlobni el. mikroskop
(nad 200nm loči)
kaj je kalibracija?
a je niz operacij za ugotavljanje povezave med vrednostmi, ki jih kaže instrument ali merilni sistem, in pripadajočimi vrednostmi, realiziranimi z etaloni, pod določenimi pogoji.
za kaj je primerno normalno in za kaj reverzno pipetiranje?
normalno:
tekočine/reagenti na vodni osnovi
reverzno
viskozne tekočine/reagenti
kaj je mikropipeta?
je pripomoček za
natančno odmerjanje
tekočin/reagentov majhnih
volumnov (0,1 – 1200 μL)
pipetiranje
- nastavni ustrezni volumen
-namestimo pipetni nastavek
*čvrsto pritrdimo
*mikropipeto držimo pokončno - potisni bat do prve stopnje
- – pipetni nastavek
potopite v tekočino/reagent - počasi spusti bat, da se vrne v prvotni položaj
- previdno
pritisnite bat do prve stopnje
in nato še do druge stopnje,
da iztisnete celotno vsebino
nastavka. Počakajte ca. 2
sekundi! - bat še vedno držiš na drugi stopnji in dvigneš mikropipeto iz jamice kamor si pipetiral
- – nastavek
odstranite s pritiskom na
pipetni izmetalec
