Huellas peptidicas y motivos estructurales

Question 1

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Genoma humano

Answer 1

• Da información acerca de las variaciones
• Encode → Secuencias funcionales.
• 22,000 genes → 500,000 proteínas diferentes

Question 2

Efectoras del trabajo celular

Answer 2

Proteínas

Question 3

Principal objetivo de la proteómica

Answer 3

Entender la expresión, función y regulación del conjunto de proteínas codificadas por un organismo.

• Procesos biológicos
• Varición salud vs enfermedad

Question 4

Importancia de las modificaciones post-traduccionales

Answer 4

Regulan la actividad, estabilidad, localización e interacciones proteína-proteína.

Question 5

Proteómica

Answer 5

Ciencia que nos ayuda a realizar un análisis sistemático de proteínas.

Question 6

Técnicas para el análisis de proteínas

Answer 6

• Electroforesis mono y dimensional
• Espirometría de masas
• Técnicas in silico

Question 7

¿Qué se requiere para anlizar una proteína

Answer 7

• Fraccionar mezclas de proteínas y péptidos.
• Separación → reducción de complejidad y tiempo de análisis.

Question 8

Medio para el análisis de las interacciones proteína-proteína

Answer 8

• Purificación por afinidad-MS
• La proteína de estudio se aísla por la afinidad con un Ac.
• Las proteínas adheridas se analizan por MS.

Question 9

Estrategia para la purificación de proteínas

Answer 9

• Homogenización/extracción
• Desalinización/diálisis y concentración
• Intercambio iónico y cromatografía de filtración en gel
• SDS-PAGE
• Degradación proteolítica
• Purificación y secuenciación de péptidos

Eliminación por diferencias de tamaño, carga e hidrofobicidad

Question 10

Medio por el qué se monitoriza la purificación

Answer 10

SDS-Page

Question 11

Pasos electroforesis bidimensional

Answer 11

Técnica de separación de proteínas corriendo en geles de poliacrilamida de dos dimensiones:
* Isoelectroenfoque (IEE) → PI (carga)
* Masa molecular (entre más pequeña más baja)
* Tinción de plata
* Identificaciñón de manchas individuales por tinción
* Digestión con proteasas
* SM

O´Farrel 1995 → SDS-PAGE

Question 12

Pasos SM

Answer 12

• Muestras proteicas digeridas → Tripsina
• Determinada combinación de AA → determinada masa

Question 13

Huella dactilar en SM

Answer 13

Péptidos específicos de algunas proteínas

Question 14

Objetivo de SM

Answer 14

Secuenciación de proteínas

Question 15

¿Qué ocurre con los fragmentos de proteínas analizados en una SM?

Answer 15

Ensayo in silico
Comparación con las bases de datos genómicos → inferencia de proteínas por características únicas.

Question 16

¿Qué permite un ensayo in silico?

Answer 16

Análisis en computadora que permite encontrar la secuencia de referencia.

Question 17

Peptide mass finger

Answer 17

• Capacidad de identificar una proteína dada por los AA, cada uno tiene una característica específica.
• Usa SM → relación masa/carga para calcular los componentes de una proteína.