Aplicación de los microarreglos de DNA, RNA y proteínas

Question 1

Microarreglos

Answer 1

Metodología que permite la identificación de moleculas de DNA O RNA mediante hibridación de un estructura de vidrio o de silicona.

Question 2

Fundamentos

Answer 2

• Hibridación de ácidos nucléicos → Principio de complementariedad.
• Detección por flourescencia → BN marcadas
• Se obtiene señal donde haya hibridación.

Question 3

¿Qué permiten los microarrelos?

Answer 3

Lectura de miles de variantes en un solo ensayo.

Question 4

Tipos de microarreglos

Answer 4

ADN → Se detectan variantes genéticas específicas (SNPs).
ARN → Análisis de expresión génica, se analiza cDNA, RNA muy inestable.
Metilación → Análisis y comparación de sitios de metilación (islas CpG)
Proteínas → Análisis mediante Ac específicos

Question 5

Enzima que permite la obtención de cDNA

Answer 5

Transcriptasa reversa

Question 6

Oligo

Answer 6

Primers específicos
15-25 nucleótidos

Question 7

¿Cómo se llevan acabo los microarreglos?

Answer 7

• Se distribuyen ordenadamente los oligos en una estructura de silicona
• Se agregan fragmentos de DNA derivado de librerias.
• Análisis simultaneo de variantes.
• Resultado por flourescencia

Question 8

Librerias

Definición

Answer 8

Colecciones de clonas de DNA.

Question 9

¿Qué es necesario para generar los librerias?

Answer 9

• Extracción del DNA de células del organismo a estudiar
• Corte con enzimas de restricción Fragmentos de restricción de distinto tamaño que se traslapan
• Unión al vector
• Clona en bacterias

Question 10

Sitio de restricción

Answer 10

Dondé posiblemente puede cortar un enzima

Question 11

Factores que alteran el funcionamiento de las enzimas de restricción

Answer 11

• Temperatura
• Tiempo
• Concetración

Question 12

Función del sobrelapamiento

Answer 12

Control de calidad

Question 13

SNPs CHIP

Answer 13

• Diseñados para la identificación de un polimorfismo específico en cada celda.
• En cada celda hay un oligonucleotido específico para cada SNP.
• Oligo → Varianre con flouroforo (homosigoto o heterocitgoto)

Question 14

Aplicación de los microarreglos

Answer 14

• Forense → Identificación de individuos mediante amplificación de microarreglos.
• Ciencias de la salud → Polimorrfismos en enfermedades metabólicas.
• Identificación del gen mutado en células cancerígenas

Question 15

Principio de los microarreglos

Answer 15

• Extracción de ARN
• Amplificación de cDNA
• Adherencia al microarreglo del cDNA
• Principio de hiibridación → DNA (genotipos) y RNA (expresión diferencial)