Examen de laboratoire - Dermatologie / Vénérologie

Question 1

Etapes d’analyse prélèvements superficiels (4 dont plusieurs sous-étapes)

Answer 1

1. Recherche d’agents infectieux mycologiques
   (i) Recherche de filament mycélien : examen direct blankophor, culture
   (ii) Recherche de levures (intertrigos, candidoses mucocutanées, pustules…) : gram, culture
2. Recherche d’agents infectieux bactériens
   (i) Recherche de flore / pathogènes courants : gram, culture
   (ii) Recherche de gonocoques : gram, culture
   (iii) Identification du tréponème pâle : microscope fond noir, PCR
3. Recherche d’agents infectieux parasitaires
   (iv) Diagnostic de la gale : test à l’encre, squames
   (v) Divers :
   - Leishmaniose cutanée : empreinte + MGG
4. Recherche de virus : herpès, varicelle
   - Immunofluorescence directe
   - PCR

Question 2

Aspect gram gonocoque

Answer 2

Diplocoque G- (fuchsia) intracellulaire (PMN)

Question 3

Types de prélèvements superficiels (13)

Answer 3

Biopsie
Culture
Frottis 
Blankophor
PCR : 24-48h
IF directe (recherche virale) : 60 min, assez rapide, bonne spécificité mais sensibilité moins bonne
IF directe (recherche d’autoimmunité) 
Sérologie
Immuno-sérologie (recherche d’autoimmunité)
Microscopie électronique
Western Blots
ELISA
Dosage métaboliques ...

Question 4

Examens complémentaires suspicion HSV (2)

Answer 4

• IF direct

- PCR

Question 5

Examens complémentaires lésion syphilitique (2)

Answer 5

• Examen fond noir : via l’exsudat entre lame et lamelle –> mobilité du tréponème visible pour attester lésion syphilitique
• PCR Treponema pallidum : via génome, 24-48h —> notamment syphilis primaire encore non bruyante

Question 6

Clinique leishmaniose

Answer 6

• Piqure d’insecte (mouche) : parasite
• Atteinte : cutanée (muqueuses visage ++, extrémités) ou disséminée (viscérale)
• Incubation : quelques semaines
• Cutané : papules, rouge indolore, de lésions acnéiformes, psoriasiformes (sèches) ou ulcérées (humides), uniques ou multiples, avec ou sans lésions satellites et de tailles diverses
• Résistante aux antiseptiques locaux

Question 7

DD Leishmaniose (8)

Answer 7

• Ulcère tropical simple (infection bactérienne favorisée par le climat humide)
• Ulcère variqueux chronique
• Néoplasie cutanée
• Infections fongiques
• Mycobactérioses cutanées (tuberculose, mycobactérioses atypiques et lèpre)
• Dermatoses inflammatoires (par exemple, psoriasis, Pyoderma gangrenosum)
• Lymphomes et carcinomes de la sphère ORL
• Maladie de Wegener : granulomatose avec polyangéite = infla vsx sanguins

Question 8

Traitement Leishmaniose (3)

Answer 8

• Soins de plaie (débridement, désinfection) 
• Traitement local, simple ou combiné 
• Traitement systémique.

Question 9

Examens complémentaires Leishmaniose

Answer 9

• Frottis pour gram

- Coloration May Grundwald Giemsa –> microscope

Question 10

Examens complémentaires lésions mycotiques

Answer 10

• Blankophor : micelles visibles
• Na2S : dissocie les liaisons disulfutres kératines –> permet au blankophor d’accéder aux champignons
• Culture : 8-10j, sur milieu riche
• 2nd culture : identification morphologie sur PDA —> examen microscopique des spores (dermatophytes) !

Question 11

Clinique Malassezia (levure) et EC

Answer 11

• Macules confluant en placards jaunes-bruns : surtout zones corporelles graisseuses
• Examen direct de scotch / blankophor

Question 12

Clinique gale (sarcopte) et EC

Answer 12

• Lésions papuleuse
• Prurit généralisé principalement nocturne (épargne le visage)
• Encre de chine –> sillon scabieux
• Examen direct sur prélèvement de squames avec oeufs

Question 13

Clinique punaise de lit

Answer 13

• Pique surtout la nuit, avec +/- tâches de sang sur les draps
• Prurit érythémateux
• Lésions maculo-papuleuses avec point hémorragique

Question 14

Types de maladies bulleuses (4) et cible des Ac

Answer 14

• Pemphigus vulgaire : Ag attaqué = desmogléine 3 (entre les kératinocytes) –> clivage le plus superficiel
• Pemphigus foliacé : attaque de desmogléine 1 (aussi entre les kératinocytes)
• Pemphigoïde bulleuse : attaque de BP180 et 230 à perte de liaison de la lame basale
• Pemphigoïde cicatricielle : attaque de laminine 5 et collagène 7 –> perte de liaison de la lame basale

Question 15

Méthode immunofluorescence directe

Answer 15

Biopsie péri-lésionnelle
Coupes congelées, incubée avec un anticorps fluorescent puis examen microscope
Conservation :
- Milieu de Michel (recommandé) : milieu salin fixant protéines dans la peau
- Azote liquide
- NaCl 0.9% : doit arrivé dans les 24h sinon FN

Question 16

But IF directe

Answer 16

Mettre en évidence et caractériser les auto-anticorps déposés au niveau de la peau = Ac épidermique in vivo

Question 17

Exemple d’IF direct : spécificités :

• Pemphigus
• Dermatite herpétiforme
• Lupus
• Pemphigoïde

Answer 17

Pemphigus : dépôt des Ig en maille de fillet (IgG intercellulaire)
Dermatite herpétiforme : dépôt papillaire épidermique (IgA)
Lupus : dépôt JDE plus granulaire (IgM, IgG, +/- IgE et C3)
Pemphigoïde : dépôt JDE moins granulaire, linéaire (IgG)

Question 18

Méthode immunosérologie

Answer 18

• IF indirecte (via fluorochrome)

- Méthodes enzymatiques : ELISA, immunoblot

Question 19

But immunosérologie

Answer 19

Identification, classification, dosage des auto-anticorps circulants = sériques

Question 20

Méthode IF indirecte

Answer 20

Coupe de tissu puis lecture au microscope : consiste en la réalisation sur peau normale clivée = antigène (peau humaine témoin, oesophage de singe, vessie de rat) d’un examen du sérum du patient à la recherche d’autoanticorps circulants dirigés contre la membrane basale de l’épiderme

Question 21

Méthode ELISA

Answer 21

Utilise des antigènes / protéines purifiés ou recombinants comme substrats (BP180 par ex.) sur lesquels est incubé le sérum des patients. Les anticorps du sérum sont ensuite révélés par un procédé enzymatique.

Question 22

But ELISA (3 exemples)

Answer 22

Détection IgG : par exemple :

• Ac anti-desmogléine 1 (pemphigus superficiel et vulgaire)
• Ac anti-desmogléine 3 (pemphigus vulgaire)
• Ac anti-BP180 (pemphigoïde bulleuse / muqueuse / gestationnelle)

Question 23

Technique immunoblot

Answer 23

• Echantillons protéiques sont déposés sur ungeld’électrophorèse séparés selon leurs caractéristiques : migration protéines
• Une fois migrées : transférées sur une membrane qui peut être composée de nitrocellulose ou de polyfluorure de vinylidène (PVDF)
• Détection: appliquer sur la membrane desanticorpsmarqués spécifiques desprotéinesque l’on veut observer. On pourra ainsi observer leur position sur le gel.