Cellule Staminali

Question 1

Definizione

Answer 1

Cellule indifferenziate, non orientate ne specializzate; capaci di:
Automantenersi a lungo termine, risponder a segnali specifici, in grado di profilerare e di differenziarsi in cellule specializzate
Abbiamo cellule
Totipotenti (zigote)
Pluripotenti (cell embrionali)
Multi o di-potenti (staminali adulte)

Question 2

Numeri

Answer 2

Le staminali emopoietiche circolano nel sangue con una frequenza di 0.1% nel sangue midollare e di 0.01% in quello periferico

Question 3

Uso terapeutico cellule staminali

Answer 3

Trapianto da sangue cordonale, midollo osseo o sangue periferico mobilizzato.
Quest’ultimo nei pz oncologici gravi ma senza metastasi midollari: si somministrano fattori di crescita che ampliato le cellule staminali che entrano in circolo e i pz vengono sottoposti ad AFERESI. Vengono selezionate le cellule staminali, poi il pz viene sottoposto a dose radiante/chemioterapica letale; il tumore è eliminato, si iniettano le staminali e il pz riprende l’emopoiesi ed è guarito.

Question 4

Sedi emopoiesi

Answer 4

Dopo la nascita: midollo osseo vertebre, pelvi, sterno, coste, femore, tibia
Epoca fetale: sacco vitellino, milza, fegato (dopo il 4°mese inizia midollo osseo)

Question 5

Citofluorimetria x cell staminali

Answer 5

Cerchiamo +++ cell CD34+ e CD45+

L’approccio delle coltura entra in gioco quando la frequenza di osservazione in vivo diventa bassa, sono cell specializzate.

Question 6

Staminalità?

Answer 6

Un pool di cellule che hanno capacità di autorinnovamento, identificate dagli antigeni di membrana, cellule molto sensibili agli stimoli di citochine o umorali in base ai quali si differenziano.

Question 7

Metodi diagnostici (su sangue periferico)

Answer 7

Emocromocitometria: emocromo, con strumenti specializzati che ci danno le quantità del sangue periferico
Morfologia dello striscio periferico: microscopio ottico, usata quando allarme x alterazioni quantitative o qualitative dell’emocromo

Question 8

Metodi diagnostici (midollo osseo)

Answer 8

Agoaspiranzione: aspiro dal midollo il fluido midollare e vedo tutte le cellule; xmette di contare e vedere se ci sono aspetti morfologici di normalità o se ci sono displastici.
Biopsia osteomidollare: vedo tutta la struttura del midollo, ossea compresa; con immunoistochimica studio la distribuzione delle cellule e la presenza o meno di metastasi.

Question 9

Citochimica

Answer 9

Colorazioni orientate ad evidenziare componenti cellulari (es perossidasi x la serie leucocitico/neutrofila/eosinofila)

Question 10

Studi genetici

Answer 10

Citogenetica
PCR utile x l’amplificazione di piccoli quantitativi di DNA
Fish, applicazione su striscio della citofluorimetria

Question 11

Curva leucocitaria

Answer 11

Viene letta in percentuale, ma DEVE essere espressa in numeri assoluti: con le % si sbaglia

Question 12

Esame emocromocitometrico

Answer 12

Aspetti quantitativi: dosaggio emoglobina (HB o HBG), ematocrito (HCT o PCV), numero di GR, conta dei reticolociti
Aspetti qualitativi: MCV, MCH, MCHC, RDW e altri metodi nuovi, morfologia striscio di sangue

Question 13

Reticolociti

Answer 13

GR giovani usciti dal midollo osseo da poco (di solito 12h, fino 72h in situazioni di stress)
Sono GR più grandi che hanno ancora i residui di RNA; oggi gli strumenti li forniscono come conteggio, possono essere aumentati, diminuiti o pari a 0 (aplasia midollare che può essere virus indotta)

Si colorano con coloranti sopravitali, Azur B, nuovo blu di metilene e blu brillante di credile; i ribosomi (RNA) reagiscono con coloranti basici e formano precipitati granulo-filamentosi in quantità inversamente proporzionale all’età

Question 14

Serie eritroide (esame emocromocitometrico)

Answer 14

Schistociti adulti <0.1%
Neonati a termine 0.3-1.9%
Prematuri <5.5%

Question 15

Serie piastrinica (esame emocromocitometrico)

Answer 15

Aspetti quantitativi (numero piastrine) e qualitativi (dimensioni, granulazioni)

Question 16

Serie leucocitaria

Answer 16

Aspetti quantitativi: conta leucocitaria totale, formula leucocitaria totale (granulociti neutrofili, eosinofili, basofili, linfociti, monociti; cellule immature e/o atipiche)

Question 17

Elettroforesi dell’emoglobina

Answer 17

Valori normali di riferimento 
HbA1: 95-98%
HbA2:1.5-3.5%
HbF:<2% (adulto)- 80% neonato, gradualmente sostituito con HbA entro il 6 meso
HbC: X
HbS: X

Question 18

Citofluorimetria

Answer 18

CD3 x linfociti T
CD19 x linfociti B

CD 45 pane a, prende tutte le cell midollari
CD71 globuli rossi

Question 19

Citogenetica

Answer 19

Individuazione anomalie specifiche cromosomiche non random, aventi spesso un ruolo patogenetico; precisa definizione del rapporto anomalia cromosomica e aspetti morfologici/clinic; info prognostiche; DD di forme neoplastiche con processi reattivi

Alterazioni cromosomiche più frequenti sono:

• rilievo di riarrangiamenti cromosomici indicativi di buona o cattiva prognosi (necessario x scelta trattamento)
• conferma della clonalità di un’espansione

Question 20

FISH

Answer 20

Tecnica molecolare genetica che serve ad identificare parti specifiche di un cromosoma con una sonda marcata.
Il DNA target viene individuato con una sonda coniugata con fluorocromo

Question 21

Genetica molecolare

Answer 21

Individuazione di lesioni genetiche distintive associate a specifiche entità nosografiche mediante PCR.
La real time PCR permette di quantificare le copie di trascritto mediante l’uso di sonde fluorescenti incorporate nel trascritto

Non è solitamente di screening x oncologia

Question 22

Biopsia ossea

Answer 22

Vediamo parte corticale e poi stroma; alveare con adipociti

Question 23

Durata cell ematiche

Answer 23

Eritrociti 120 gg
Granulociti 6-7 ore
Piastrine 7-11 gg

Question 24

Produzione giornaliera

Answer 24

3 miliardi di eritrociti
1 miliardo di leucociti
1,5 miliardi di citochine