מיקרוסקופיה

Question 1

מה ניתן לראות בכל המיקרוסקופים?

מה רק באלקטרונים?

Answer 1

כולם: תא בודד, חיידק,מיטוכונדריה , סופר-רזולוציה: ריבוזום, וירוס
רק אלקטרונים: חלבון גלובולרי, מולקולה קטנה, אטום

Question 2

מיקרוסקופ אור:
רזולוציה:
כמה עדשות:

Answer 2

מיקרוסקופ אור:
רזולוציה: הוא מוגבל במגבלת אורך הגל של אור, 0.2 מיקרומטר
כמה עדשות: 4 - קונדנסור, אובג’קטיב, טיוב, עינית.

Question 3

שני גלי אור בפאזה לעומת לא בפאזה

Answer 3

בפאזה: בהירות גבוהה, אמפליטודה גדולה.

לא בפאזה: מעורפל, אמפליטודה קטנה.

Question 4

DIC מיקרוסקופ

Answer 4

מגבירים את הבדלי הפאזה בין חלקים בדגימה,

כך שנוצרים הבדלים באמפליטודה.

Question 5

ניתן להגביר ולנתח את התמונה עי טכניקות דיגיטליות

Answer 5

מאפשר להתגבר על שני חסרונות של העין האנושית:
היא לא מסוגלת להבחין בשינויים בעצמת האור על רקע בהיר,
לא רואה ברמות אור נמוכות.

CCD, CMOS מתגברים על כך באמצעות מצלמה דיגיטלית.
רגישות פי 10 מהעין האנושית.
אפשר לצפות בתאים באור עמום לאורך זמן, ולמנוע נזק שאור חזק היה גורם להם.

Question 6

הכנת דגימה

Answer 6

קיבוע: עי גלוטראלדהיד למשל.
הקפאה: שעווה או רסין.
חיתוך: מיקרוטום

Question 7

המטוקסילין

Answer 7

צביעה: המוטוקסילין - קושר מטענים שליליים, קושר דנא, רנא.

Question 8

מיקרוסקופ פלוריסנטי
כמות עדשות:
פילטרים:

Answer 8

סופג אור באורך גל אחד ופולט באחר, ארוך יותר.
עדשות: לפי התמונה בספר שתיים?
פילטרים: שניים, הראשון מעביר רק אורכי גל שמעוררים, השני רק אורכי גל שנפלטו מעירור

Question 9

למה משמשת המראה הדיכורית במיקרוסקופ פלוריסנטי?

Answer 9

מעבירה קרני אור באורך הגל הנפלט, שוברת כאלו באורך הגל הנקלט.

בעצם היא מכוונת את האור לדגימה

Question 10

כיצד ניתן להציג תפוצה של מולקולות רנא בתא?

Answer 10

בעזרת in-situ hybridization.

Question 11

הצבעים הפלוריסנטיים פלורסין ורודמין

FITC ומה לגבי

Answer 11

פלורסין פולט אור ירוק כאשר מעורר עם כחול.
רודמין פולט אור אדום כאשר מעורר עם ירוק-צהוב.
נגזרת של פלורסין, פולט ירוק FITC

Question 12

איזה צבען פלוריסנטי נמצא בתחום האדום?

Answer 12

Cy5

Question 13

Fluorescent nanoparticles or quantum dots

Answer 13

חלקיקי קטנים של מוליך למחצה, עם מעטפת מסיסה במים.
אפשר להצמיד אותם לנוגדנים.
גדלים שונים יפלטו אור בצבעים שונים. ככל שגדול יותר, כך אורך הגל ארוך יותר.
אבל כולם עוברים עירור באור כחול.

Question 14

שימוש בנוגדנים

Answer 14

במיקרוסקופ פלוריסנטי - מצמדים למולקה פלוריסנטית.

באלקטרונים - חלקיק זהב ספרי

Question 15

אימונוהיסטוכימיה לא ישירה

Answer 15

שימוש בנוגדן ראשוני למולקולת המטרה ובנוגדן שניוני מסומן פלוריסנטית ל FC

Question 16

שימוש במרקר שהוא אנזים
דוגמה:
יתרון:

Answer 16

שיטה נוספת להגברת סיגנל של חלבון מטרה היא שימוש באנזים כמרקר המצומד לנוגדן השניוני.
לדוגמה, אלקאלין פוספט שמייצר ריאקציה עם צבע
יתרון: מגביר בצורה יעילה גם סיגנל מכמויות קטנות של חלבון

Question 17

בעיית ה
out of focus
של דגימות עבות

מתי נשתמש בכל אחת מהשיטות?

Answer 17

האור שלא בפוקוס מגיע גם כן וגורם לרעשי רקע.
שתי שיטות לפתרון הבעיה של דגימות עבות:

אופטית - קונפוקאלי

דיגיטלית - דה קונבולסיה: תחילה משיגים סדרה של תמונות ב
CCD, CMOS.
המחשב מחשב באמצעות
point spread function
מה אמור להיות המיקום של הנקודה ומנקה את הרעש.

קונפוקאלי - מועדף עבור דגימות עבות יותר עם רמות גבוהות של אור שלא בפוקוס.
דה-קונבולסיה - עדיפה כאשר כמות האור נמוכה, או דגימה לא צבועה.

Question 18

מיקרוסקופ קונפוקאלי

שיטה פלוריסנטית לרוב

Answer 18

מנקה אור שלא בפוקוס.
משתמש בלייזר כדי להאיר נק’ מדויקת בדגימה.
רק אור שמקורו בנק’ הזו יגיע לגלאי, אור אחר לא.
קרן הלייזר ממשיכה ובאופן זה סורקת את הדגימהת הסריקה נעשית באמצעות קרן דיפלקציה ומראה שזזה

Question 19

עובי דגימות

Answer 19

דה קונבולסיה - עד 40 מיקור מטר
קונפוקאלי - עד 150
מולטיפוטון - יגיע עד 250!!

Question 20

Multiphoton microscopy

Answer 20

במקום פוטון אחד באנרגיה גבוהה, שני פוטונים באנרגיה נמוכה תוך זמן קצר מאד.
יתורנות של שימוש באור באורך גל ארוך: הפחתת רעשי רקע, חדירה עמוקה.
חשוב במיוחד למחקר של דגימות חיות, במיוחד דינמיות של סינפסות.

Question 21

GFP

Answer 21

מקורו במדוזה,
יש לו מבנה של חבית ביתא עשויה 11 סדיני ביתא.
בתוך החבית קבור הכרומופור הפעיל.

Question 22

חלבון כימרי

Answer 22

חלבון שנוצר מחיבור של שני גנים
למשל חלבון שחיברו לו גן של
GFP
בתקווה שזה לא יפגע בפעילות שלו ויאפשר מחקר שלו