VL 9 Export von mRNAs Flashcards
1
Q
Export von mRNAs
A
- mRNAs müssen vor Export prozessiert sein
- 5’-Capping
- 3’-Polyadenylierung
- Spleißen
2
Q
Wie sieht Kern dass mRNA gespleißt worden ist?
A
- Spleißosom versieht mRNA mit Stempel
- Spleißosom hinterlässt an Spleißstellen Proteinkomplexe (EJC)
- EJC: Exon Junction Complex
- Qualitätsmerkmal
- Theorie: Transport und Prozessierung erfolgt gleichzeitig
- 5‘ Ende Kontakt mit Kernpore
3
Q
wie wird mRNA als gespleisst markeirt
A
- Spleißosom hinterlässt an Stellen wo Intron war Komplex von verschiedenen Proteinen → EJC (Exon Junction Complex)
- Qualitätsmerkmal, das sagt, dass es aus dem Kern rausexportiert werden
4
Q
Transport und Prozessierung erfolgt gleichzeitig
A
- DNA wird von DNA—abhängigeRNA-Pol II transkribiert
- Spleißen von Spleißosom
- RNA nimmt Kontakt während Transkription mit 5‘-Kappe
- Export beginnt schon
- RNA verlässt Kern
- Translation läuft schon
- Faktoren, die wichtig sind für Export sind in mRNA vorhanden, die translatiert werden
- Alles hängt zusammen
5
Q
Export von mRNAs
A
- mRNAs müssen vor Export prozessiert sein
- 5‘ capping
- 3‘ poly-Adenylierung
- Speißen
- Unreife mRNAs müssen im Kern bleiben!
- mRNA export wird deshaöb gekoppelt
- Transkriptiion
- Prozessierung
- (Translation)
6
Q
mRNA wird als mRNP transportiert
A
- mRNA ist nicht nackt
- 5‘-cap und cap-Bindeproteine
- 3‘-poly-Aschwanz zund poly-A-BP
- Spleißfaktoren
- Generelle RNA-BP (hnRNPs)
7
Q
Homologie
A
- Orthologe
- Gene mit gleicher Funktion in unterschiedlichen Spezies
- Gemeinsamer Vorfahr
- Durch Speziation
- A1 + A2 und B1 + B2
- Paraloge
- Gene mit unterschiedl. Funktion
- Vom glichen Gen stammend
- Durch Genduplikation
- A1 + B1 und A2 + B2
8
Q
3 Schritte beim mRNP Export
A
9
Q
A
10
Q
Mex67p
A
- Assoziiert mit Nukleoporinen
- Involviert in 75% aller mRNA-Exporte
- Konserviert in allen Eukaryoten
- Konditionale Mutante in Hefe
- Bei 37°C mRNA nur im Kern vorhanden
- Kein Export von mRNA
- Sonde die den polyASchwanz erkennt, polyT mit FLuoreszenzmarkierung
11
Q
Mutanten
A
Konditionale Mutante
- Veränderung im Gen
- Auswirkung auf Gen
- Phänotyp sichtbar wenn Bedingung sich verändert (z.B. Tempertaur)
- Wichtig bei essentiellen Genen
Knock-Out (Null-)Mutante
- Genfunktion = 0
Hypomorphe Mutante
- 90% Genfunktion
12
Q
mRNP Assemblierung
A
Dbp5
- Helicase
- In der Lage Proteine abzuwerfen
Pab1
- Poly-A-Bindeproteine
X
- Exon Junction Complex
CBC
- Cap-BP
13
Q
Translokation
A
- Schwache Interaktion zwischen Nups und Mex67p:Mtr2p
- Diffusion
- Verhinderung einer Rückkehr in der Pore
- Kotranskriptional
14
Q
Transfer von Dbp5
A
- mRNP gelangt in Pore
- durch Proteine hydrophobe Oberfläche
- fühlt sich wohl in Pore
- Aktivierung: dbp5 wird von Gle1 akzeptiert auf äußeren Nukleoporin
- Weitere Duffsuion
- Mex67p wird weggekickt
- Nur vorwärtsdiffusion möglich
15
Q
rRNA Prozessierung
A
- Nukleasen schneiden prä-rRNAs zurecht
- Basenmodifizierungen
- Beteiligt:
- snoRNPs (small nucleolar RNAs)
- Proteine
16
Q
rRNA Expression
A
in Nukleolus
17
Q
Nukleolus
A
- Subdomänen
- FC
- GC
- DFC
- Struktur
- Keine physikalische Barrieren (e.g. Membranen, sondern „liquid droplets“
- Veränderte Aufenthaltsdauer für Komponenten der Ribosomenbiogenese
- Er Nukleoslus ist eine „kinetische“ Struktur
18
Q
Tannenbaum rRNA im EM
A
19
Q
Sequenzspezifisches Schneiden der rRNA: snoRNPs unterstützen die Sequenzerkennung
A
snoRNA = small nucleolar RNA; snoRNP = small nucleolar Ribonucleoprotein particle
20
Q
Erkennung der zu modifizierenden Basen durch snoRNAs
A
- Komplementarität bestimmt Modifikationsstelle
- Passiert kotranskriptional
- Einige Proteine beteiligt, die auch die Katalyse machen (kein Ribozym)
21
Q
Sekundärstruktur der 16S rRNA von e.Coli
A
22
Q
Stabilität
A
- Halbwertszeit 5-10 Tage
- Massiv besetzt mit Proteinen
23
Q
tRNA Struktur
A
- Kleeblatt-Sekundärsrtuktur
- 75-95 nt
- Ungewöhnliche Basen
- L-förmige Tertiärstruktur
24
Q
tRNA Prozessierung
A
- Verkürzen
- Modifikation von Basen
- Evtl. Spleißen
- Anheften des CCA-Endes
- Anbinden der AS
- RNAseP = Ribozym
Gelb: Introns
Rot: modifizierte Basen
25
Q
Uridin Modifikationen
A
- Dihydro-Uridin
- Pseudo-Uridin
- Unterschiedliche Geometrie
- Hbrücken verhalten anders
- Wichtig für Sek. Struktur und Tertiärstruktur
26
Q
Beladung der AS
A
27
Q
Aminoacyl-tRNA-Synthetase
A
- Drei Bindungstaschen
- Aminosäure
- ATP
- tRNA
- Spezifität
- Muss AS erkennen
- Muss tRNA erkennen
- Erkennungstellen
- Multiple Erkennungsstellen
- Erkannt wird Anticodon
- Akzeptorarm
28
Q
Der genetische Code
A
- Proteine bestehen aus 20 verschiedenen Aminosäuren
- 3 Nukleotide codieren für eine Aminosäure
29
Q
Eigenschaften des genetischen Codes
A
- Triplettcode – Nirenberg-Leder Experiment
- Nirenberg-Leder-Experiment
- Unterschiedlich große Codonfamilien
- Selten Einzelcodons
- Kommafrei, nicht überlappend
- Mit Hilfe der Analyse von Mutantenproteinen von TMV (Tabakmosaikvirus) konnte gezeigt werden, dass einzelne AS geändert sein können
- Dies schließt überlappenden Code aus
- Eindeutig
- Degeneriert
- Synonyme Codons
- Universell
Startcodon: Methionin, AUG
Stoppcodon: UGA, UAA, UAG
30
Q
wie wird mRNA als gespleisst markeirt
A
- Spleißosom hinterlässt an Stellen wo Intron war Komplex von verschiedenen Proteinen → EJC (Exon Junction Complex)
- Qualitätsmerkmal, das sagt, dass es aus dem Kern rausexportiert werden
