specificni proteini

Question 1

koje imunohemijske metode se koriste

Answer 1

-najcesce imunonefelometrija i imunoturbidimetrija jer su jednostavne za izvodjenje
-ove metode mogu da se izvode merenjem kolicine stvorenog kompleksa Ag-At (ravnotezna) ili merenjem brzine stvaranja kompleksa Ag-At (kineticke)
-kineticke su brze ali su manje osetljive jer niskoafinitetna At ne stignu da izreaguju

Question 2

imunonefelometrija i imunoturbidimetrija

Answer 2

-obe metode se zasnivaju na reakciji izmedju proteina koji se odredjuje i antiseruma specificnog za taj protein
-antiserum se dodaje u reakcionu kiveru gde se nalazi uzorak i dolazi do stvaranja kompleksa usled cega dolazi do zamucenja u kiveti i rasipanje ulaznog snopa svetlosti
-NEFELOMETAR meri intenzitet rasute svetlosti pod odredjenim uglom 70/90
-TURBIDIMETAR meri intenzitet propustene svetlosti
-intenzitet rasute svetlosti je proporcionalan konc kompleksa a samim tim i konc proteina
-prilikom reakcije brzina formiranja kompleksa se povecava dok ne dostigne svoj maksimum
-rzinu promene rasipanja svetlosti belezi aparat i bira maksimalnu brzinu postignutu tokom reakcije jer je ona proporcionalna konc Ag odnosno proteina
-koriste se kalibratori poznatih koncentracija pri cemu aparat generise krivu zavisnosti max brzine od konc kalibratora
-konc Ag iz uzirka se onda preracunava odnosno ocita sa kalibracione krive

Question 3

RIA

Answer 3

-zasniva se na kompeticiji radioaktivno obelezenog Ag i proteina za specificna At
-u rastvor poznate konc radioaktivno obelezenog Ag dodaje se odg kolicina At
-u ovu smesu se dodaje i uzorak i dolazi do kompeticije ova dva Ag
-sto je veca konc Ag iz uzorka to ce se manje radioaktivno obelezenog Ag vezati
-nakon uklanjanja Ag-At kompleksa meri se kolicina radioaktivnosti u supernatantu koja potice od slobodnih Ag
-Jako osetljiva metoda ali ima slozene bezbednosne procedure

Question 4

ELISA

Answer 4

-zasniva se na upotrebi At obelezenih enzimom, najcesce peroksidazom koja u prisustvu vodonik peroksida oksiduje TMB do obojenog kompleksa cija se apsorbancija meri
-moze biti: direktna, sendvic, kopetitivna
-SENDVIC ELIZA:
-dva specificna At
-prva At se nalaze vezana za podlogu tako da u prvom koraku dolazi do imobilizacije Ag iz uzorka
-ispira se nevezani Ag i dodaje se sekuntarno At obelezeno enzimom
-sekundarno At prepoznaje druge epitope na Ag i omogucava kvantifikaciju vezanog Ag
KOMPETITIVNA ELISA
-zasniva se na kompeticiji izmedju Ag vezanog za podlogu i Ag iz uzorka za specificna primarna At
-sto je veca konc AG u uzorku toce manje primarnih At reagovati sa Ag vezanim za podlogu
-ispiranjem se uklanjaju kompleksi
-primarna At vezana za Ag na podlozi ostaju imobilisana i dodaju se sekundarna At koja omogucavaju kvantifikaciju
-konc Ag iz uzorka obrnuto je srazmerna izmerenom signalu

Question 5

kada se dobijaju lazno snizeni rez

Answer 5

-kao posledica efektra prozone
-ovaj efekat se javlja ukoliko su Ag ili At u velikom visku

Question 6

na sta treba da se obrati paznja prilikom izbora odg metode za odredjivanje specificnih proteina

Answer 6

1. OSETLJIVOST METODE
   -detekcioni limit 0,1-10mg/l imunonefelometrija
   -imunoturbidimetrija ima limit 20-30mg/l
   -najosetljivija je RIA meri konc reda ng/l
2. PRECIZNOST METODE
   –nefelometrija je prezicnija od RIA i ELISA
   -koef varijacije za nefelometrijske metode unutar serije je manji od 5% a kod ove dve je 5-10%
3. VREME POTREBNO ZA IZVODJENJE
   -nefelometrija je brza i traje od par minuta do 1h
   -RIA i ELISA traju i do par sati
4. LABORATORIJSKA OPREMA
   -nefelometri i turbidimetri imaju mikroprocesore koji generisu kalibracione krine i automatski racunaju konc
   -RIA zahteva specijalne brojace radioaktivnog signala
   ELISA zahteva upotrebu posebnih uredjaja za ocitavanje signala

Question 7

imunoglobulini

Answer 7

imunoturbidimetrija i imunonefelimetrija

Question 8

komponente komplementa

Answer 8

-serum/EDTAplazma

Question 9

prealbumin i retinol vezujuci protein

Answer 9

turbidimetrija i nefelometrija

Question 10

alfa1 antitripsin

Answer 10

turbidimetrija i nefelometrija

Question 11

alfa1 kiseli glikoprotein

Answer 11

turbidimetrija i nefelometrija

Question 12

alfa1 fetoprotein

Answer 12

RIA i ELISA

Question 13

haptoglobin

Answer 13

imunonefelometrija i imunoturbidimetrija

Question 14

ceruloplazmin

Answer 14

nefelometrija i turbidimetrija

Question 15

transferin

Answer 15

nefelometrija i turbidimetrija

Question 16

beta2 makroglobulin

Answer 16

RIA i ELISA

Question 17

apo B

Answer 17

turbidimetrija i nefelometrija

Question 18

CRP

Answer 18

nefelometrija RIA ELISA