hba1c Flashcards
osnovne karakteristike
-postoje 4 frakcije: HbA1a1, HbA1a2, HbA1b, HbA1c
-HbA1c je apsolutno predominantan pa onda odredjujemo samo njega
-glikacijom Hb prvo nastaje pre A1c koji je sifova baza i koji se konvertuj u stabilan ketoamin HbA1c
-Glikacija Hb se ne desava linearno vec u drugoj polovini zivotnog veka Hb tako da kako je njegov poluzivot 120 dana onda nema smisla odredjivati ovaj marker u kracem intervalu od 60 dana
-hba1c se koristi za pracenje metabolicke kontorle DM
- moze da se koristi i za DG DM >6,5%
-znacajno je snizen kod svih stanja sa skracenim zivotnim vekom eritrocita
-mnoge metode uz hba1c mere i prea1c koji treba ukloniti a ne bi doslo do lazno povisenih rez
-prea1c se uklanja inkubacijom eritrocita u fizioloskom rastvoru cime se prea1c razlaze na hba i glukozu
koje se metode koriste
-jonoizmenjivacka hromatografija
-afinitetna hromatografija
-imunohemijske metode
-elektroforeza
-hplc
referentna metoda
HPLC
-Hb se razlaze na peptide enzimom endoproteinazom Glu-C
-razdvanjanje glikoziliranog i neglikoziliranog N-terminalnog heksapeptidnog beta lanca
-njihova konc se odredjuje HPLC/masenom spektrofotometrijom ili dvodimenzionalnim prostupom : HPLC i kapilarna elektroforeza sa UV detekcijom
-oba principa daju identicne rez
-zbog velike specificnosti rezultati referentne su nizi od vrednosti komercijalnih metoda
jonoizmenjivacka hromatografija
-izvodi se na mikrokolonama sa slabokiselim katjonskim izmenjivacem
-princip razdvajanja frakcija Hb zasniva se na razlikama u naelektrisanju
-jonska jacina i pH pufera sa kojim se vrsi eluacija sa kolone se tako biraju da Hba1c bude manje pozitivno naelektrisan od ukupnog Hb, cime se sprecava njegovo vezivanje za negativno naelektrisanu smolu u koloni
-Hba1c se eluira sa kolone a ostale frakcije su vezane
-promenom pufera druge pH i jonske jacine sa kolone se spiraju sve frakcije
-procentualni udeo hba1c se racuna na osnovu odnosa apsorbancija oba eluata
ALTERNATIVNI NACIN ODREDJIVANJA
-sa kolone se eluira samo hba1c primenom odg pufera
-udeo hba1c se izracunava iz apsorbancije eluata u odnosu na apsorbanciju odgovarajuceg razblazenja pocetnog hemolizata
-na reproducibilnost rez uticu temp, pH i jonska jacina
kolorimetrijske metode
-princip je hidroliza hba1c u prisustvu oksalne kis pri cemu se oslobadja 5-hidroksimetil furfural
-reakcija se odvija 5h na 100stepeni
-smesa se hladi, proteini se taloze trihlorsircetnom
-u supernatant se dodaje tiobarbiturna kis i meri se apsorbancija
-na rez NE UTICE PREA1C
elektroforeza
-razdvajanje hba1c na agaroznom gelu zahvaljujuci razlicitom naelektrisanju u odnosu na ukupni hb
-kvantitativno odredjivanje se izvodi denzitometrijski
-pre izvodjenja elektroforeze neophodno je ukloniti prea1c
TEHNIKOM IZOELEKTROFOKUSIRANJA hba1c se razdvaja od ostalih hb formi na osnovu razlicite pokretljivosti u pH gradijentu na poliakrilamidnom gelu
afinitetna hromatografija
-koristi se kolona sa agarozom na kojoj je vezana m-aminofenil-borna kis
-za ovu kis se vezuje hba1c a neglikozilirane forme samo prolaze kroz kolonu
-hba1c se zatim spira rastvorom sorbitola
-mere se apsorbancije hb frakcija i izracunava se hba1c
imunoturbidimetrija
-zasniva se na odredjivanju udela hba1c u ukupnom hb inhibicijom aglutinacije
-na lateks cesticama se nalaze HbA1c At za koja se vezuje hba1c
-hba1c ima samo jedno vezivno mesto tako da njegovo vezivanje za At ne dovodi do aglutinacije
-dodaje se aglutinirajuci reagens koji se vezuje za slobodna mesta na lateks cesticama i izaziva aglutinaciju
-sto je vise hba1c manje je mesta za vezivanje aglutinirajuceg reagensa i manja je aglutinacija kao i apsorbancija koja je proporcionalna konc hba1c
kako pratimo da li je dobra terapija preko hba1c
-ako je hba1c>7% smatra se da je to kriterijum za prelazak na novi tip terapije
-kod zdravih osoba hba1c je 4-6%
-cilj terapije je da hba1c<7%
-kod pacijenata kod kojih je ispunjena ciljna vrednost hba1c on mora da se odredjuje 2 puta kodisnje a kod onih kod kojih nije 4 puta
u kojim jos jedinicama moze da se izrazi hba1c
mmol/mol
-koliko mmol hba1c ima u 1molu ukupnog Hb
lazno poviseni/snizeni rez
-hemolizna anemija
-oboljenja jetre
-prisustvo abnormalnih formi hb
kakav je hba1c u trudnoci
fizioloski nizi za 0,5% zbog hemodilucije
