bilirubin Flashcards
frakcije bilirubina u krvi
alfa-nekonjugovani
beta-monokonjugovani
gama-dikonjugovani
delta-kompleks nekonjugovani-albumin
diazo metoda
-referentna metoda
-reakcija bilirubina sa diazotovanom sulfanilnom kiselinom prilikom cega nastaju dva azodipirola koji su crveni u neutralnoj pH a plavu u baznoj i kiseloj
-deo bilirubina odmah izreaguje bez dodatka alkohola i on se naziva direktni tu spadaju konjugobani bilirubin i Bi kov vezan za albumin
-drugi deo se dobija oduzimanjem ukupnog Bi od direktnog i naziva se indirektni i to je nekonjugovani koji ne reaguje odmah jer se ne rastvara u vodi
-vrednos ukupnog Bi se dobija dodavanjem akceleratora u reakcionu smesu ( kofein, etanol, metanol)
-modifikacija ove metode:
-akceleratori su kofein i natrijum benzoat, oni oslobadjaju Bi iz komleksa i on se vezuje za kofein
HPLC metode
-omogucile su razdvanjanje i karakterizaciju svih frakcij i razlicitih fotoizomera sto je objasnilo mehanizam fototerapije neonatalne zutice
-nemaju klinicki znacaj
-nemaju adekvatnu preciznost, tacnost i osetljivost za referentnu
-greske sve cetiri frakcije mogu biti kumulativne pa je ukupna greska velika
-ne detektuju niske vrednosti
-u pripremi uzorka moze doci do gubitka delta frakcije
enzimske metode
-zasnivaju se na oksidaciji bilirubina bilirubin oksidazom
-pri razlicitim pH dobijamo selektrivnost frakcija
-pH 8 + natrijum holat i natrijum dodecisulfar SVE FRAKCIJE prelaze u biliverdin koji se dalje oksiduje do crvenih pa bezbojnih jedinjenja i meri se smanjenje apsorbance koje je proporcionalno konc
- pH 3,7-4,5 = DIREKTNI
-pH 10 = SAMO KONJUGOVANI
direktno spektrofotometrijsko odredjivanje
-znacajno kod neonatusa
-zasniva se na istovremenom merenju apsorbancije uzorka na dve talasne duzine na bihromatskim spektrofotometrima
-razlicite frakcije opkazuju razlicite apsorpcione maksimume
-problem kod neonatusa je taj sto talasna duzina na kojoj nekonjugovani bilirubin ima apsorpcioni maksimum ista je kao i za oksihemoglobin pa on interferira
-merenje se vrsi i na talasnoj duzini na kojoj apsorbuje samo oksihemoglobin pa se ove dve vrednosi oduzimaju i dobija se vrednost apsorbancije proporcionalna konc nekonjugovanog Bi
transkutano merenje Bi bilirubinometrom
-aparat koristi princip refleksione spektrofotometrije
-ima dva filtera kako bi se korigovala apsorbanca oksihemoglobina i merenje se vrsi na 8 tacaka na telu
-pogodno za neonatus jer nije invazivno i ekonomski je isplativo
urinarni bilirubin
-test traka
-diazo reakcija
-neophodan svezi urin jer je bilirubin nestabilan i na svetlu prelazi u biliverdin koji ne reaguje sa diazo reagensom
standard za kalibraciju
-kalibraci je problematicna zbog nestabilnosti na svetlu i vazduhu
-cist Bi je nerastvoran u vodi, rastvara se u rastvorru proteina
-konjugovani i nekonjugovani Bi imaju razlicite apsorpcione maksimume ali njihov maksimum zavisi i od sastava proteina matriksa odnosno da li su u pitanju humani ili animalni proteini
-neki proizvodjaci koriste govedji serum kao bazu za pripremu standarda, serum je obogacen nekonjugovanim Bi ili ditaurobilirubinom ili sa oba
-reakcija nekonjugovanog u govedjem serumu je nepredvidiva i nekompletna stoga je nemoguce tacno izmeriti Bi i ovo je najveci problem kod neonatusa kojima je vecina bilirubina nekonjugovano
-takodje i konjugovani u govedjem serumu daje nize vrednosti
-preporuka je koristiti homani serum
uzorci
-serum
-Bi je stabilan na 2 dana u firzideru ukoliko je serum zasticen od svetlosti
-slepa proba se koristi da bi se manjio efekat karotenoida
referentne vrednosti kod odraslih
ukupno 17mimol/l
direktni 3,4mimol/l
referentne vrednosti neonatusa
PREVREMENO RODJEN
24h: 17-137mimol/l
48h: 103-205mimol/l
3-5dana: 171-239mimol?l
ROJDEN U TERMINU
24h: 34-103mimol/l
48h: 103-171mimol/l
3-5dana: 68-137mimol/l
