elektroforetsko razdvajanje lipoproteina Flashcards
kako sve mogu da se razdvoje lipoproteini
- ultracentrifugiranjem na osnovu gustine
- elektroforezom na osnovu naelektrisanja i velicine
- hromatografijom
- gel filtracijom
- imunofemijom
kako se dele prema naelektrisanju
- beta frakcija LDL
- pre beta frakcija VLDL
3.alfa frakcija HDL
apo na hilomikronima
apoB48
apoC2
apoE
apoA1
apo na vldlu
apoB100
apoC2
apoE
apo na IDL
apoE
apoB100
-podjednako holesterola i TG
apo na HDL
apoE
apoA1
apoA2
apoC1,2,3
-ima manje TG a vise kolesteorla i fosfolipida
na cemu se zasniva elektroforeza lipoproteina
zasniva se na razlictoj pokretljivosti u elektricnom polju zbog razlicitog naelektrisanja apolipoproteina
koji je medijum za elektroforezu i koji je pH
pH 8,6
-rutinski : celuloza acetat, agaroza
-poliakrilamidni gel razdvaja subfrakcije VLDL, HDL, LDL
koje boje se koriste
-boje se lipidni delovi molekula
-Oil Red, Sudan black, fat red 7B
-najveci nedostatak je taj da boje imaju vece afinitete za TG i ChE nego za slobodan Ch i PL
sta se radi posle bojenja
–odbojavanje i kvalitativna analiza posmatranjem razdvojenih frakcija a zatim semi kvantitativna denzitometriranjem
uzorak, cuvanje, priprema
-serum ili EDTA plazma
-ne moze heparinizirana jer utice naa rezultate,kod pacijenata na heparinu ce doci do aktivacije LPL i povecane pokretljivosti frakcija
-pacijent se priprema kao i za ostale lipidne analize
-obavezno naste kako bi moglo da se utvrdi da li je pojava hilomikrona i vldla patoloska
-najbolja je elektroforeza svezeg uzorka
-uzorak moze da stoji 5 dana u frizideru, ako stoji duze docice do povecanja pokretljivosti pre beta frakcije
-ne sme da se zamrzava i odmrzava jer na taj nacin dolazi do agregacije hilomikrona i vldla
kako ce izgledati frakcije
- alfa frakcija (HDL) ide najdalje i nalazi se u blizini anode i odgovara alfa 2 frak proteina
- beta frakcija (LDL) spora je , bliza katodi i odgovara beta 2 frakciji
- pre beta frakcija (VLDL) nalazi se izmedju alfa i beta i odgovara beta 1
- hilomikroni- ostaju u blizini starta i odgovaraju gama frakciji
kako izgleda elektroforegram zdrave osobe
-najveci udeo zauzima beta frkacija
-pre beta je slaba ili se ni ne vidi
-alfa frakcija je dobro definisana ali slabijeg intenziteta od beta
promene u alfa frakciji
-znacajno povecanje: opstruktivna zuica, ciroza jetre
-umereno povecanje: terapija estrogenima, trudnoca
-znacajno smanjenje: bolest parenhima jetre ili tangierovo oboljenje
odsustvo beta frakcije
-javlja se u retkom genetskom poremecaju gde postoji odsustvo svih lipoproteina sa apo b VLDL, LDL, hilomikroni
-koncentracije holesterola i TG su vrlo niske
-tazina simptoma varira
-heterozigoti su asimptomatski sa snizenim LDL-om
prisustvo lipoproteina X
-patoloski lipoprotein cest kod opstruktivne zutice
-u sebi ima neesterifikovan holesterol TG i PL
-ima manju elektroforetsku pokretljivost od beta frakcije pa se nalazi pre nje u predelu hilomikrona
-ako hilomikroni nisu bili prisutni vizuelno u seurmu a ova frakcija je prisutna potvrdjuje se pristustvo LPx
-boje koje se uobicajno koriste imaju slabiji afinitet za Lpx i mogu se dobiti lazno negativni rezultati
znacaj ove elektroforeze
-identifikacija prisustva hilomikrona
-identifikacija LpX
-identifikazija hiperlipidemije III
nedostaci metode
-nemogucnost kalibracije
-nedovoljna reproducibilnost zbog razlicitog afiniteta boja za pojedine lipoproteine
koje su uloge apolipoproteina
-modulacija aktivnosti enzima koji ucestvuju u metabolizmu lipoproteina
-odrzavanje strukture lipoproteina
-ligandi za receptore na povrs celija
apo a1
90% svih proteina u HDL
-HDL moze da sadrzi samo apoA1 ili i 2
-uglavnom ima vise apo A1 pa je dosta da se samo on odredjuje
-apoA1 je ligand za vezivanje apo za ABC receptore i kofaktor LCATa
klinicki znacaj odredjivanja apoA1
- procena rizika za nastanak kvb
-bolje je odrediti apoA1 nego HDL jer su metode analiticki preciznije i na rezultat ne utice holesterol iz hrane - otrkivanje naslednih poremecaja
PORODICNA DEF APOA1
-moze biti udruzena i sa def apo C3 ili apoC4
APOA1 VARIJANTE
-mutacije u genu mogu dovesti do potpune def ili do promene u strukturi.
-najpoznatija putacija je apo A1milano
TANGIEROVA BOLEST
-posledica mutacije ABC transportera
-snizene konz ukupnog Ch i HDL
-homozigoti imaju ekstremno nisku konc apoA1 a heterozigoti 50%
PORODICNA DEF LCAT
-delimicna ili potpuna
-smanjenje konc apoA1 i HDL
HIPERALFALIPOPROTEINEMIJA
-povisena konc HDL i apoA1
-povisena konc jos u decijem uzdastu
-manji rizik od kvb
PORODICNA DEF CETP
-homozigoti imaju izrazito visok HDL i apoA1
-heterozigoti HDL normalan, apoA1 povisen
klinicki znacaj odredjivanja apoB100
- procena rizika KVB
- otkrivanje naslednih poremecaja
ABETALIPOPROTEINEMIJA
-potpuni nedostatak lipoproteina koji sadrze apoB
-konc Ch i TG znacajno snizene
-apoB nedetektabilan
HIPOBETALIPOPROTEINEMIJA
-homoozigoti imaju nisku konc apo B
-heterozigoti imaju konc apo B 25%-50% nizu
apoE
-prisutan u svim lipoproteinima sem u LDL
-sintetise se u jetri a u plazmu dospeva preko nascentnog HDLa s kog se dalje prenosi na hilomikrone i VLDL
-remnanti HM i IDL mogu da vrate apoE HDL-u
-apoE je ligand za rec na jetri preko kojih se uklanjaju remnanti
-metabolizam remnanata je odredjen genetskim polimorfizmom apoE jr postoje tri alela i 6 mogucih fenotipova
-izoforme imaju razlicite afinitete za receptore
-E2 alel ima nizi afinitet za receptor pa su konc LDL i apoB100 manje nego kod homozigota sa E3
-kod E4 afinitet za receptor je veci sto dovodi do visih konc LDL i apoB100 kao i veceg rizika za aterosklerozu
-odredjiavnje fenotipa apoE ima veci znacaj od njegove konc
koje metode se koriste za odredjivanje apolipoproteina
imunohemijske
-rid
-ria
-eliza
-imuneonefelometrije
-imunoturbidimetrija
-u rutinskim lab se najcesce koristi potpuno automatizovana imunonefelometrija i imunoturbidimetrija
-jedini nedostatak je interferencija u lipemincim uzorcima zbog cega je neophodno pre analize ukloniti TG ili dodati deterdzent u pufer kojim se vrsi razblazenje uzorka
