Brainscape's Knowledge GenomeTM

Browse over 1 million classes created by top students, professors, publishers, and experts.


See full index

mbh vezbe > elektroforetsko razdvajanje lipoproteina > Flashcards

elektroforetsko razdvajanje lipoproteina Flashcards

1
Q

kako sve mogu da se razdvoje lipoproteini

A
  1. ultracentrifugiranjem na osnovu gustine
  2. elektroforezom na osnovu naelektrisanja i velicine
  3. hromatografijom
  4. gel filtracijom
  5. imunofemijom
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

kako se dele prema naelektrisanju

A
  1. beta frakcija LDL
  2. pre beta frakcija VLDL
    3.alfa frakcija HDL
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

apo na hilomikronima

A

apoB48
apoC2
apoE
apoA1

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

apo na vldlu

A

apoB100
apoC2
apoE

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

apo na IDL

A

apoE
apoB100

-podjednako holesterola i TG

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

apo na HDL

A

apoE
apoA1
apoA2
apoC1,2,3

-ima manje TG a vise kolesteorla i fosfolipida

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

na cemu se zasniva elektroforeza lipoproteina

A

zasniva se na razlictoj pokretljivosti u elektricnom polju zbog razlicitog naelektrisanja apolipoproteina

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

koji je medijum za elektroforezu i koji je pH

A

pH 8,6
-rutinski : celuloza acetat, agaroza
-poliakrilamidni gel razdvaja subfrakcije VLDL, HDL, LDL

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

koje boje se koriste

A

-boje se lipidni delovi molekula
-Oil Red, Sudan black, fat red 7B
-najveci nedostatak je taj da boje imaju vece afinitete za TG i ChE nego za slobodan Ch i PL

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

sta se radi posle bojenja

A

–odbojavanje i kvalitativna analiza posmatranjem razdvojenih frakcija a zatim semi kvantitativna denzitometriranjem

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

uzorak, cuvanje, priprema

A

-serum ili EDTA plazma
-ne moze heparinizirana jer utice naa rezultate,kod pacijenata na heparinu ce doci do aktivacije LPL i povecane pokretljivosti frakcija
-pacijent se priprema kao i za ostale lipidne analize
-obavezno naste kako bi moglo da se utvrdi da li je pojava hilomikrona i vldla patoloska
-najbolja je elektroforeza svezeg uzorka
-uzorak moze da stoji 5 dana u frizideru, ako stoji duze docice do povecanja pokretljivosti pre beta frakcije
-ne sme da se zamrzava i odmrzava jer na taj nacin dolazi do agregacije hilomikrona i vldla

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

kako ce izgledati frakcije

A
  1. alfa frakcija (HDL) ide najdalje i nalazi se u blizini anode i odgovara alfa 2 frak proteina
  2. beta frakcija (LDL) spora je , bliza katodi i odgovara beta 2 frakciji
  3. pre beta frakcija (VLDL) nalazi se izmedju alfa i beta i odgovara beta 1
  4. hilomikroni- ostaju u blizini starta i odgovaraju gama frakciji
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

kako izgleda elektroforegram zdrave osobe

A

-najveci udeo zauzima beta frkacija
-pre beta je slaba ili se ni ne vidi
-alfa frakcija je dobro definisana ali slabijeg intenziteta od beta

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

promene u alfa frakciji

A

-znacajno povecanje: opstruktivna zuica, ciroza jetre
-umereno povecanje: terapija estrogenima, trudnoca
-znacajno smanjenje: bolest parenhima jetre ili tangierovo oboljenje

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

odsustvo beta frakcije

A

-javlja se u retkom genetskom poremecaju gde postoji odsustvo svih lipoproteina sa apo b VLDL, LDL, hilomikroni
-koncentracije holesterola i TG su vrlo niske
-tazina simptoma varira
-heterozigoti su asimptomatski sa snizenim LDL-om

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

prisustvo lipoproteina X

A

-patoloski lipoprotein cest kod opstruktivne zutice
-u sebi ima neesterifikovan holesterol TG i PL
-ima manju elektroforetsku pokretljivost od beta frakcije pa se nalazi pre nje u predelu hilomikrona
-ako hilomikroni nisu bili prisutni vizuelno u seurmu a ova frakcija je prisutna potvrdjuje se pristustvo LPx
-boje koje se uobicajno koriste imaju slabiji afinitet za Lpx i mogu se dobiti lazno negativni rezultati

17
Q

znacaj ove elektroforeze

A

-identifikacija prisustva hilomikrona
-identifikacija LpX
-identifikazija hiperlipidemije III

18
Q

nedostaci metode

A

-nemogucnost kalibracije
-nedovoljna reproducibilnost zbog razlicitog afiniteta boja za pojedine lipoproteine

19
Q

koje su uloge apolipoproteina

A

-modulacija aktivnosti enzima koji ucestvuju u metabolizmu lipoproteina
-odrzavanje strukture lipoproteina
-ligandi za receptore na povrs celija

20
Q

apo a1

A

90% svih proteina u HDL
-HDL moze da sadrzi samo apoA1 ili i 2
-uglavnom ima vise apo A1 pa je dosta da se samo on odredjuje
-apoA1 je ligand za vezivanje apo za ABC receptore i kofaktor LCATa

21
Q

klinicki znacaj odredjivanja apoA1

A
  1. procena rizika za nastanak kvb
    -bolje je odrediti apoA1 nego HDL jer su metode analiticki preciznije i na rezultat ne utice holesterol iz hrane
  2. otrkivanje naslednih poremecaja
    PORODICNA DEF APOA1
    -moze biti udruzena i sa def apo C3 ili apoC4
    APOA1 VARIJANTE
    -mutacije u genu mogu dovesti do potpune def ili do promene u strukturi.
    -najpoznatija putacija je apo A1milano
    TANGIEROVA BOLEST
    -posledica mutacije ABC transportera
    -snizene konz ukupnog Ch i HDL
    -homozigoti imaju ekstremno nisku konc apoA1 a heterozigoti 50%
    PORODICNA DEF LCAT
    -delimicna ili potpuna
    -smanjenje konc apoA1 i HDL
    HIPERALFALIPOPROTEINEMIJA
    -povisena konc HDL i apoA1
    -povisena konc jos u decijem uzdastu
    -manji rizik od kvb
    PORODICNA DEF CETP
    -homozigoti imaju izrazito visok HDL i apoA1
    -heterozigoti HDL normalan, apoA1 povisen
22
Q

klinicki znacaj odredjivanja apoB100

A
  1. procena rizika KVB
  2. otkrivanje naslednih poremecaja
    ABETALIPOPROTEINEMIJA
    -potpuni nedostatak lipoproteina koji sadrze apoB
    -konc Ch i TG znacajno snizene
    -apoB nedetektabilan
    HIPOBETALIPOPROTEINEMIJA
    -homoozigoti imaju nisku konc apo B
    -heterozigoti imaju konc apo B 25%-50% nizu
23
Q

apoE

A

-prisutan u svim lipoproteinima sem u LDL
-sintetise se u jetri a u plazmu dospeva preko nascentnog HDLa s kog se dalje prenosi na hilomikrone i VLDL
-remnanti HM i IDL mogu da vrate apoE HDL-u
-apoE je ligand za rec na jetri preko kojih se uklanjaju remnanti
-metabolizam remnanata je odredjen genetskim polimorfizmom apoE jr postoje tri alela i 6 mogucih fenotipova
-izoforme imaju razlicite afinitete za receptore
-E2 alel ima nizi afinitet za receptor pa su konc LDL i apoB100 manje nego kod homozigota sa E3
-kod E4 afinitet za receptor je veci sto dovodi do visih konc LDL i apoB100 kao i veceg rizika za aterosklerozu
-odredjiavnje fenotipa apoE ima veci znacaj od njegove konc

24
Q

koje metode se koriste za odredjivanje apolipoproteina

A

imunohemijske
-rid
-ria
-eliza
-imuneonefelometrije
-imunoturbidimetrija

-u rutinskim lab se najcesce koristi potpuno automatizovana imunonefelometrija i imunoturbidimetrija
-jedini nedostatak je interferencija u lipemincim uzorcima zbog cega je neophodno pre analize ukloniti TG ili dodati deterdzent u pufer kojim se vrsi razblazenje uzorka

25
Q

ELISA

A

-zasniva se na reakciji Ag-At pri cemu se koriste specificna At na odredjeni apolipoprotein
-koriste s edve vrste At
-primarno At je adsorbovano na zidove bunarcica u kojima se odvija reakcija a sekundarno je konjugovano enzimom i dodaje se nakon uzorka formirajuci sendvic strukturu
-ELISA mAt je predlozena za referentnu metodu
-mAt su specificnija od pAt
-ELISA je bolja od RIA-e jer ne koristi radioaktivne supstance i reagensi su stabilni duzi vremenski period a moze i da se polu automatizuje

26
Q

faktori koji uticu na imunohemijsko odredjivanje

A
  1. At koja ulaze u sastav reagensa moraju imati sposobnost prepoznavanja i vezivanja apolipoproteina sa razlicitih lipoproteinskih cestica
  2. u slucaju polimorfnih apolipoproteina moze se desiti da At imaju slabiji afinitet za vezivanje ili da ih uopsce ne prepoznaju. Zato je potrebno da se koristi mesavina mAt koja su specificna za razlicite epitope na razlictim izoformama apolipoproteina i ovo se zove panmonoklonalna At
  3. fenomen maskiranja- javlja se zbog toga sto seu Ag mesta na lipoproteinu cesto prekrivena lipidima pa At ne moze da se veze. Ag mesto mora da se demaskira upotrebom nejonskog deterdzenta koji razgradjuje lipoproteinske cestice
27
Q

kalibratori imunohemijskih metoda

A

-kalibratori su precisceni proteini koji imaju istu imunoreaktivnost kao protein cija se konc odredjuje
-apoB se ne moze dobiti u formi cistog proteina jer je hidrofoban i nestabilan pa se koristi preciscena LDL cestica rastvorena u serumu kao matriksu u kojoj je konc proteina odredjena analizom aminokiselina
-apoA1 je hidrofilan pa se koristi njegov ras u vodenim puferima
-kalibrator apoA1 se priprema kao liofilizat da bi bio duze stabilan
-apoB se menja usled liofilizacije pa se priprema teci apoB kalibrator koji se naflo zamrzava i cuva na -70 da bi bio duze stabilan

28
Q

referentne vrednosti za apoA1 i apoB100

A

apoA1: 1,1-1,3 g/l
apoB100: 0,86-1,6g/l

mbh vezbe (23 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2024 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions