albumin Flashcards
osnovne informacije o albunimu
-globuularni protein
-sinteza u jetri koja zavisi od unosa albumina i njegove konc u krvi
-poluzivot 15-19 dana
-izoelektricna tacka je izmedju 4-5,8
-najvaznije uloge su : transport, odrzavanje onkotskog pritiska, endogene obezbedjivanje aminokiselinama
-vezuje nepolarne komponentne plazme kao sto su : bilirubin, slobodne masne kiseline, hormoni, lekovi, Ca
-njegova konc u ekstracelularnoj tecnosti se koristi kao indikator propustljivosti razlicitih membrana
-njegova konc odrazava i nutritivni status organizma jer zavisi od unosa proteina
-njegova konc se odredjuje u serumu ali moze i u hepariniziranoj plazmi
istorijske metode
precipitacione
preko odredjivanja koncentracije globulina
precipitaciona metoda
-zasniva se na precipitaciji proteina solima ili koselinama nakon cega se albumin ne talozi
-centrifugiranje
-albumin je u supernatantu i njegova konc se odredjuje biuretskom metodom
-METODA NIJE SPECIFICNA ZBOG INTERAKCIJE SA DRUGIM PROTEINIMA INE MOZE SE AUTOMATIZOVATI
metoda preko odredjivanja globulina
-zasniva se na velikoj razlici u sadrzaju triptofana u albuminu i globulinu (ugl triptofan)
-glioksilna kiselina u prisustvu Ca u kiseloj sredini reaguje sa triptofanom iz globulina pricemu se stvara purpurni kompleks ciji se intenzitet meri na spektrofotometru
-konc albumija se dobija iz razlike ukupnih proteina i globulina
-NEDOSTACI: potrebno je izvrsiti standardizaciju serumom kako albumin ne bi interferirao i potrebno je uraditi i ukupne proteine
-SLOBODAN TRP NE INTERFERIRA
elektroforeza
-zasnovane na elektroforetskom razdvajanju proteina na CELULOZA-ACETATU ili AGAROZI
-nakon bojenja odvojenih frakcija procenat svake se odredjuje denzitometriranjem
-koncetracija albumina se dobija mnozenjem ukupne koncentracije sa procentom albumina
-NEDOSTACI: boja se ne vezuje podjednako za sve serumske proteine, stepen vezivanja je proporcionalan koncentraciji odredjenog porteina u serumu pa ovom metodom dobijamo nesto vise vrednosti albumina. metoda postaje tacnija ako se albumin eluira sa gela i odredi standardnom metodom za proteine
imunohemijske metode
-radijalna imunodifuzija
-elektroimunodifuzija
-nefelometrija
-turbidimetrija
-stacionarna faza kod RID i EID je agaroza sa antitelima na albumin
-albumin se moze dobiti u preciscenom stanju takoda su antiserumi koji se koriste jako dobri a metode jako specificne i osetljive
metode koje se zasnivaju na vezivanju boje za albumin, opste karakteristike i podela
-najcesce se koriste
-zasnivaju se na promeni apsorpcionog maksimuma boje kada se za nju veze albumin, pri cemu se ovo vezivanje odvija u prisustvu drugih proteina
-koriste se boje:
-metil oranz
-HABA
-BCG (brom-krezol plavo)
-BCP (brom krezol purpurno)
metil oranz metoda
-nespecificna, ima mnogo interferencija
-interferencije: beta lipoproteini, alfa1 i 2 globulini,
-slabije interferencije: bilirubin, drugi proteini
-moguce lazno povisene vrednosti
HABA
-specificna za albumin ali MALA OSETLJIVOST
-interferencija: salicilati, sulfonamidi, penicilini, konjugovani bilirubin
-standard: humani albumin ili humani merkapto-albumin
-hemijski tretiran albumin ne moze da bude standard jer se ne vezuje na isti nacin za boju
-korelacija rezultata ove metode sa elektroforezom je slaba pogotovo kod novorodjencadi sa hemoliticnom bolesti, pacijentima sa bolestima jetre
-kod pacijenata sa bolestima bubrega daju vise konc nego elektroforeza
metoda sa BCG
-pH 4.2-4,5 sukcinatni pufer
-nejonski deterdzent Brij 35 se dodaje da ib se smanjila apsorbanca slepe probe sprecio turbiditet i obezbedila linearnost
-standardi: humani i govedji serumski albumin
-specificnost ove metode je dobra kada se analizira serum zdravih osoba, posto bilirubin, lipemija i salicilati ne interferiraju
-hemoliza smanjuje vrednost albumina, a slepa proba ne koriguje ovu interferenciju
-slaba korelacija sa elektroforezom i EID i RID
-vrednosti su slicne u opsegu konc 35-50g/l ali ispod 35 BCG daje visu vrednost
PRVA MODIFIKACIJA
-uklanjanje interferencija koje poticu od alfa i beta globulina, fibrinogena i Hb dodatkom NaCl, snizavanjem temp sa 45 na sobnu i smanjenje moncentracije deterdzenta
DRUGA MODIFIKACIJA
-specificnost se povecava merenjem apsorbancije odmah posle reakcije
-dokazano je da albumin dovodi do pomeranja apsorpcionog maksimuma u prvom minutu a proteini akutne faze posle 5min
metoda sa BCP
-pH 5,2
-prednost u odnosu na BCG je da BCP ne vezuje druge proteine ( ceruloplazmin i alfa 1 glikoprotein) pa merenje ne mora da bude momentalno
-standard je humani serumski albumin
-govedji serumski albumin ne moze da se oristi jer sa bojom gradi kompleks koji ima malu apsorbanciju na datoj talasnoj duzini
kad se javlja hipoalbuminemija
- poremecaj u sintezi, primarno kod oboljenja jetre i sekundarno usled msanjenog unosenja proteina hranom
- povecan katabolizam proteina usled razgradnje tkiva ili inflamatornog porcesa
- smanjenje apsorpcije ak kod malapsorpcije
- gubitka proteina urinom, fecesom, kozom
- pormene u distribuciji albumina, tj prelazak u ekstravaskularni prostor (ascites)
referentne vrednosti
novorodjencad: 28-44g/l
odrasle osobe: 35-55g/l
>60god: 34-48 g/l
