HDL

Question 1

sadrzaj lipidnih komponenti

Answer 1

20% Ch
30% PL
2-5% TG

Question 2

kako sve mogu da se ispituju HDL cestice

Answer 2

-mogu da se razdvoje od ostalih lipoproteina-ultracentrifugiranje ili elektrof.
-mogu da se razdvoje njegove frakcije -ultracentrifugiranje, elektroforeza na gradijent gelu poliakrilamida, nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija
-mogu da se odrede konc njegovih lipida i apo

Question 3

kako se odredjuje HDL-holesterol

Answer 3

1. preparativnim ultracentrifugiranjem
2. kvantitativnom elektroforezom
3. jonoizmenjivackom hromatografijom
4. selektivnom precipitacijom
5. direktnim metodama

Question 4

preparativno ultracentrifugiranje

Answer 4

-ref metoda
-separacija lipoproteina se postize na osnovu razl gustine
-ako se razdvajaju sve frakcije uzorak plazme se centrifugira vise puta na razlicitim gustinama pri velikim brzinama
1. ultracentrifugiranje 18h na 40 hiljada obrtaja pri gustini 1,006kg/l- na povrsini se izdvaja VLDL
2.uklanjanje VLDL i podesavanje gustine dodavanjem KBr
3. ultracentrifugiranje 20h na 1,063kg/l- izdvajanje LDL
4.uklanjanje LDL i podesavanje gustine dodatkom KBr
5. ultracentrifugiranje na 1,21kg/l- izdvajanje HDL
-u izdvojenim frakcijama se sad mogu meriti TG, PL, Ch, Apo

Question 5

izdvajanje samo HDL ultracentrifugiranjem

Answer 5

-samo jedan korak ultracentrifugiranja kako bi se uklonile VLDL cestice (1,006kg/)
-nakon uklanjanja sloja VLDL u plazmu se dodaje smesa heparina i MgCl2, ova smesa specificno talozi samo lipoproteine sa apoB100
-HDL ostaje u supernatantu

Question 6

precipitacione metode

Answer 6

-precipitacija svih lipoproteeina koji sadrze apoB100
-HDL ostaje u supernatantu
-odredjivanje Ch u supernatantu je HDL-Ch
-holesterol se odredjuje enzimskom metodom preko H2O2
-precipitacioni reagensi (smesa polianjona i dvovalentnog katjona):
heparin+ MnCl2
heparin+ CaCl2
dekstran sulfat + MgCl2
Na-fosfovolframat + MgCl2
polietilenglikol

Question 7

nedostaci precipitacionih metoda

Answer 7

-nakon precipitacije je potrebno izvrsiti centrifugiranje i to moze dovesti do greske
-tek nakon centrifuguranja moze ostatak da se radi na automatu
-kad se u lipemicnim uzorcima za talozenje koristi heparin +MnCl talozenje nije potpuno i ovaj problem se prevazilazi filtriranjem ili centrifugiranjem na velikim brzinama
-talozni reagensi Na-fosfovolframat+MgCl2 i dekstran-sulfat+MgCl2 ne interferiraju u enzimskim reakcijama i bolje precipitiraju lipoproteine ali mogu da istaloze i malu kolicinu HDL

Question 8

druga generacija precipitacionih metoda

Answer 8

-precipitacioni reagens: dekstran-sulfat i metalne kuglice
-dekstran sulfat talozi ApoB lipoproteine a metalne kuglice ih vezuju i one se uklanjaju pomocu magnetnog diska
-posle uklanjanja se odredjuje konc Ch enzimskim metodama

Question 9

direktne metode

Answer 9

-potpuna automatizacija, ne zahtevaju precipitaciju
HOMOGENO ODREDJIVANJE
-zasniva se na primeni specificnih deterdzenata, At i surfaktanata kojima se modifikuje povrsina lipoprot VLDL,LDL,HM
-ovako modifikovane cestice nece reagovati sa enzimima u enzimskj metodi pa reaguje samo HDL-Ch
PRIMER HOMOGENE METODE
-4 reagensa
1. polietilenglikol-agregacija apoB cestica
2. anti-apoB100At i anti-apoCAt koja blokiraju agregirane cestice
3. enzimi za odredjivanje Ch
4. soli gvanidina zaustavljaju bojenu reakciju i rastvaraju agregate cime se razbistri reakciona smesa i omoguceno je merenje A

Question 10

Rf

Answer 10

visok rizik <0.9mmol/l
optimalne vrednosti >1,55mmol/l