RT-PCR e qRT-PCR Flashcards
Quale è il ruolo della RT-PCR?
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Quale è la prima cosa necessaria da fare per eseguire una RT-PCR?
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Nella RT-PCR dove si appariranno i primer sull’mRNA e perché?
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Nella RT-PCR, qual’ora volessimo trascrivere tutti gli RNA (tRNA, piccoli RNA…) quali primer si andrebbero ad usare e perché?
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Una volta ottenuto cDNA, nella RT-PCR cosa bisogna fare?
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Perché è usata il gene della gliceraldeide 3 fosfato come controllo per l’ espressione genica in RT-PCR?
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Cosa cambia tra RT-PCR e qRT-PCR, in termini di obiettivi? E quando allora sarà necessario fare la detection nel grafico in cui è indicata la fase di plateau nel caso della qRT-PCR?
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Quando la fase esponenziale durante qRT-PCR dura pochi cicli e quando dura invece molti cicli?
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Perché risulta essere insufficiente la sensibilità del gel di Agarosio e degli intercalanti nella qRT-PCR, e che strumento verrà quindi adottato?
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Come vengono sfruttati gli intercalanti nel termociclatore real time nella qRT-PCR?
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Cos’ è il SYBR green?
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Circa dopo quanti cicli si incomincia ad osservare un primo livello di fluorescenza nel termociclatore real-time?
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Su cosa si basa il ciclo threeshold? E cosa si intende con CT?
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Quale è la differenza fra quantificazione relativa e quantificazione assoluta in merito al detection dell’ espressione genica con PCR?
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Quale è il ruolo del normalizzante nella qRT-PCR?
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