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UE 2 > Microscopie > Flashcards

Microscopie Flashcards

1
Q

en MO observation de

A

tissus, cellules, hématies, bactéries

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2
Q

≠ MO

A

microscopie conventionnelle
à fluorescence
confocale

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3
Q

résolution MO (conventionnelle et à fluorescence)

A

10mm - 200nm

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4
Q

en ME observation de

A

cellules, organites (ribosomes, mitochondries, lysosomes, noyaux), virus, atomes et molécules

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5
Q

≠ ME et résolution

A

MET
MEB
résolution: 100µm - 10nm

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6
Q

en microscopie à sonde locale obs de

A

prot, aa, ADN/ARN, atomes

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7
Q

≠ microscopie à sonde locale

A

AFM: microscopie à force atomique → 10nm-1nm
STM: microscopie à effet tunnel → 10nm-0,5nm

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8
Q

amplitude

A

la distance entre une crête ou un creux et la position de repos

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9
Q

longueur d’onde

A

cycle

distance entre 2 crêtes consécutives

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10
Q

longueur d’onde augmente →

A

fréquence diminue
énergie diminue
résolution diminue

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11
Q

longueur d’onde croissante

A

rayons gamma < rayons X < UV < lumière visible < IR < micro-ondes < ondes radio et TV

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12
Q

lumière bleue (λ =488nm) par rapport à lumière rouge (λ=650nm)

A

+ grande fréquence
transporte + d’énergie
résolution sup

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13
Q

image observée en 2 temps

A

image réelle créée par objectif

image virtuelle créée par oculaire

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14
Q

lentilles

A

lentilles de l’oculaire
lentilles du condenseur de type Abbe
lentilles de l’objectif

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15
Q

lentilles de l’oculaire

A 
lentille oculaire
lentille du diaphragme
lentille du champs
projettent l'image sur la rétine = oculaire Huygenien
grossissement X5 - X10
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16
Q

lentilles du condenseur de type Abbe

A

organisées en doublet ou en triplet
concentration lumière sur l’échantillon/ le spécimen
processus de correction des aberrations optiques

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17
Q

lentilles de l’obj

A

comprennent un ménisque et le lentilles hémisphériques frontales (tout en bas)
processus de correction des aberrations optiques
organe le + important du microscope
grossissement X0,5 - X100

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18
Q

microscopie à (épi)fluorescence

A

résolution de même ordre que microscopie conventionnel (10mm-200nm)
source de lumière = lampe à Xe ou Hg
présence de filtres et de miroirs
mise en jeu fluorochromes

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19
Q

fluorochromes

A

possèdent souvent

  • structures cycliques aromatiques
  • résidus tryptophane (indole)
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20
Q

FITC

A

fluorochrome lumière verte

déplacement de stokes ~ 30nm

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21
Q

immuno-fluo

A

le + souvent fluorochromes sont exogènes = introduits dans le tissu par les AC (couplés à des fluorochromes, spé pour le tissu examiné)
déterminer la loc. tissulaire d’un épitope (aka site Ag)

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22
Q

immuno-fluo directe

A

Ac primaire couplé avec le fluo

l’Ac primaire reconnait l’épitope (aka site Ag)

23
Q

immuno-fluo indirecte

A

Ac secondaire couplé avec le fluo

l’Ac secondaire reconnait le fragment Fc de l’Ac primaire → amplifie le signal

24
Q

fluorochromes émettent photon (signal) après excitation

A

photon de longueur d’onde donnée est absorbé
e- passe sur orbital d’énergie sup
e- repasse sur orbitale initiale: accompagne l’émission d’un photon d’énergie inf à celle du photon absorbé

25
Q

déplacement de Stokes aka stockes shifts

A

= l’écart entre la longueur d’onde du pic d’émission et celle du pic d’absorption
longueur d’onde émise est + grande que celle de l’onde absorbée
chaque fluorochrome: spectre + pic d’excitation et spectre + pic d’émission

26
Q

filtres low pass

A

laissent passer ondes avec longueur inf. à une valeur donnée

27
Q

filtres high-pass

A

laissent passer ondes avec longueur sup. à une valeur donnée

28
Q

filtres band pass

A

laissent passer ondes avec longueur comprise dans intervalle donné

29
Q

ex filtre d’excitation destiné à exciter un fluo. par une lumière bleue pour obtenir signal vert

A

filtres d’excitation passe bas: laisse passer que ondes bleues
miroir dichroïque dévie les ondes bleues vers échantillon
ondes bleues excitent FITC
miroir dichroïque laisse passer ondes vertes émises vers l’oculaire from FITC
ondes vertes arrivent jusqu’au capteur

30
Q

marquages w/ couples de fluo.

A

pics d’émissions éloignés: marquage double

pics d’émissions très rapprochés: pas de distinction entre signaux émis (impossible à lire)

31
Q

marquage de fibroblastes en culture

A

noyaux → DAPI (bleu)
actine → FITC (vert)
tubuline des MT → Texas Red (rouge)

32
Q

fluorochromes d’origine transgénique

A

gène codant pour une prot fluo. d’origine naturelle est fusionnée avec le gène codant une autre prot
construction introduite dans des cellules
distribution et dynamique de la prot d’intérêt taguée peut être observée car la prot de fusion obtenue est fluo

33
Q

GFP (prot fluo verte)

A

première prot fluo découverte

prix Nobel 2008

34
Q

GloFish

A

gènes de prot fluo sont sous le contrôle du promoteur du gène codant pour de chaînes légères de la myosine (prot µ)

35
Q

Brainbow mouse

A

explorer connectivité du cerveau

mélange de 4 fluorochromes ≠ → 100 nuances

36
Q

réfraction

A

fléchissement de l’onde par lentille

37
Q

interférence

A

sommation des amplitudes de 2 ondes “après” la lentille: constructive/ destructive

38
Q

diffraction

A

création d’ondelettes secondaires par l’obstacle

39
Q

lentille convergente: angle de déviation

A

+ important

  • pour les ondes éloignées du centre
  • pour les ondes courtes
40
Q

convolution

A

modification du signal par un système optique

41
Q

équation rayon de la PSF

A

r = 1,22λ /2NA

42
Q

équation de l’ouverture numérique

A

NA = n x sinµ

43
Q

équation D

plus D est petite plus la résolution K est bonne

A

D = 0,61λ /NA

44
Q

λ des électrons MET

A

λ = h/mv

45
Q

prix nobel de chimie 2014

microscopie à fluo à nanodimension

A

Eric Betzig, William Moerner, Stefan Hell

46
Q

découverte e-

prix nobel 1906

A

Joseph John Thompson

47
Q

établie nature ondulatoire des e-

prix nobel 1929

A

Louis de Broglie

48
Q

découvre constante de Plank

prix nobel 1918

A

Max Plank

49
Q

1er MET

A

Ruska, Berlin 1932

50
Q

résolution max MET

A

0,1 nm (0,07 nm en 2006)

51
Q

résolution max MEB

A

1-5nm

52
Q

canon à électrons

A
  • filament = cathode, émission thermoionique des e- (2700°C)
  • cylindre de Wehnelt: concentre e- vers l’axe central
  • anode: accélère les e-
  • faisceau d’e- accéléré et projeté du sommet de la colonne vers échantillon
53
Q

lentilles électromagnétiques

A
  • création champ magnétique:
    déforme et fait tourner FE
    change distance focale
    assure cohérence du FE
  • défauts: déformables, imparfaites, sujettes à des aberrations
  • changement de leur épaisseur: changer distance focale
54
Q

détecteur d’Everhard-Thornley

A

capte e- secondaires

e- captés sont transformés en photons transmis dans un analyseur: photomultiplicateur

UE 2 (33 decks)

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