Immunologie Flashcards
Quelles sont les composantes du SI?
- Leucocytes
2. Organes lymphoïdes primaires (thymus, moelle osseuse) et secondaires (rate, ganglions)
Quelles sont les tâches du SI?
- Perception/détection
- Communication
- Attaque
- Mémoire
Pourquoi parlons-nous d’un système?
Dépend de multiples interactions entre différents types de cellules immunitaires
Quels sont les acteurs principaux du SI
Les lymphocytes B, les cellules T auxiliaires et les cellules T cytotoxiques
Quelles sont les différences entre la réponse immunitaire innée et la réponse adaptative
- L’innée est rapide et l’adaptative lente
- L’innée reconnaît des motifs et l’adaptative a une reconnaissance individuelle
- L’innée n’a pas de mémoire et l’adaptative a une mémoire
Quelles sont les étapes historiques et expérimentales les plus importantes dans la découverte et la caractérisation des Ac?
- Expérience de Behring et Kitasato qui permet la découverte des antitoxines
- Le transfert de sérum
- La spécificité des Ac par Landsteiner
Quels sont les différents éléments structuraux des Ac?
- 2 chaînes lourdes et deux chaînes légères
- Régions variables (en haut) et régions constantes
- 5 isotypes différents
- Régions hypervariables dans les régions variables
Quels sont les principes de la reconnaissance des antigènes par les Ac?
Les régions hypervariables de l’Ac reconnaissent un épitope d’un Ag et peuvent se lier avec ce dernier
Quel est le mécanisme primaire de génération de diversité des récepteurs d’Ag par réarrangement génomique?
Pour les chaînes légères, il y a une recombinaison aléatoire entre les éléments V et J. Dans une chaîne lourde, il y a une recombinaison aléatoire des éléments V, D et J. Une addition des nucléotides P et N s’ajoutent à la diversité de recombinaison.
Nommez des similarités et des différences entre les cellules B et T
- Similarités : Ils font parti de la réponse adaptative, recombinaison V(D)J
- Différences : Cellules T immunité cellulaire et B immunité humorale, lymphocytes B reconnaissent antigènes, lymphocytes T reconnaissent peptides et CMH du soi, cellules B ont commutation isotypique et HMS
C’est quoi la définition d’un organe lymphoïde primaire? Donnez deux exemples.
Développement et sélection des lymphocytes. Moelle osseuse et thymus.
Quels sont les trois types de lymphocytes?
- Cellules B
- Cellules T auxiliaires
- Natural Killer
Combien de valences possède un IgM, un IgG, un IgA?
- IgM : 10
- IgG : 2
- IgA : 4
L’expérience de Behring et Kitasato représente quel type d’immunisation ?
Immunité passive
Un anticorps est composé de combien de peptides ? lesquels?
4, 2 chaînes lourdes et 2 chaînes légères
Expliquez la différence entre un épitope linéaire et conformationnel.
L’épitope conformationnel est la protéine native et l’épitope linéaire est le peptide ou la protéine dénaturée
Combien de CDRs participent à une interaction entre un anticorps et un antigène ?
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Pourquoi dans le terme « V(D)J » le D se trouve entre parenthèses ?
Parce qu’il n’y a pas d’éléments D pour la recombinaison des chaînes légères
Une région des N-nucléotides long de 12 bases peut coder pour combien de différentes
Boucles CDR3 ?
204, car 12 bases = 4 acides aminés et 20 acides aminés totaux
À quoi sert le complexe Igα/Igβ ?
Il sert à la transmission des signaux à l’intérieur de la cellule grâce aux motifs ITAMs
Est-ce qu’un poulet avec une mutation dans RAG (1 ou 2) va avoir un répertoire de cellules
B normal, puisque sa diversité des récepteurs Ig est générée par conversion génique ?
Non, parce qu’il y a génération d’un récepteur fonctionnel par RAG avant conversion génique. Si pas de RAG, pas de matrice pour conversion génique.
Est-ce qu’une cellule B qui produit du IgE peut « switcher » pour produire un autre isotype d’anticorps ?
Oui pour un IgA2
Identifier, nommer + distinguer éléments structuraux Ac
- 2 chaînes lourdes, 2 chaînes légères
- 2 fragments Fab, 1 fragment Fc
- Régions variables + régions constantes
- Régions hypervariables ( CDR1-3)
Étape réarrangement V(D)J
1) Spécificité type cellulaire stade différenciat°régulé par transcription loci + expression complexe RAG
2) Synapse par RAG
3) Clivage par RAG
4) Apprêtement + liaisongénération diversitécode pour rcpt
Génération diversité additionnelle P- + N-nucléotide
1) P-nucléotide : Épingle à cheveux complexe Artemis + DNA-PKouvre épingle et former palindrome
2) N- nucléotide : TdTajoute nucléotides de manière aléatoire
Caractéristiques BCR
- IG mbrnR + module transmission signal : Igalpha, IgBeta
- Mutation IgAIpa, IgBetaabsence cellules B
- Motif transmission signal : ITAMs activation via phosphorylation tyrosines
Caractéristiques TCR
- AlphaBeta hétérodimère
- Module transmission signal : CD3
- Motif transmission signal : ITAMs
Observations sur lg
- Répertoire naïf = IgM
- Réponse primaire= IgM
- Réponse après re-stimulation = IgG, IgA, IgE
- IgM = faible affinité
- IgG, IgA, IgE = haute affinité
Génération diversité après rencontre Ag
- Hypermutation somatique (HMS) : augmentation de l’affinité
- Commutation isotypique (CI) : IgM IgG, IgA, IgE
HMS
- Mutations ponctuelles dans les régions V
- Mécanisme dépendant de la protéine AID
Commutation isotypique
- Pas d’implication des protéines RAG
- Dépendante d’une réponse immunitaire active
- Strictement dépendant d’AID
- AID induit cassures simple-brin dans ADN régions S
- Morceau ADN entre 2 régions S est enlevé
Génération diversité chez poulet
- Bursa de Fabricius Seulement élément VH et Vlambda
- Réarrangement V(D)J tjrs le même générant même récepteur
- Diversification via conversion génique (CG)
- Strictement dépendant de l’AID
Importance de AID
- Essentiel pour HMS, CI, CG
- Mutation dans gène AID HIGM2
- Surexpression AID développement tumeurs
HIGM2
- Maladie autosomique récessive dans gène AID
- Développement normal cellules B mais pas HMS et pas CI donc pas mémoire immunologique
- Réponses IgM primaires à répétition taux IgM élevé
Avantanges antiséra
- Bon, pas cher, rapide
Désavantages antiséra
- Hétérogènes, quantités limitées, impossible de reproduire la même combinaison d’anticorps
Avantages Ac monoclonaux
- Une seule spécificité
- Quantité illimitée d’Ac
- Mêmes des Ag complexes mènent à des Ac purs
Désavantages Ac monoclonaux
- Devraient être des Ac humains
- Pas d’affinité assez forte
- Cher, long
IvIg
- Préparation IgG donneurs humains
- Tx pour immunodéficiences cellules B
Maladie sérum
- Réaction systémique VS dose Ac d’une autre espèce
- Génération de complexes immuns
Humanisation des Ac
- Chimériques : VH et VL d’un Ac de souris, reste humain
- Humanisé : CDRs VH et VL d’un Ac de souris, reste humain
- Ac de souris haute affinité (Hybridome)
- Ac entièrement humain à partir bibliothèque phages
- Souris humanisées
Phage antibodies
- Expression du domaine variable d’un Ac à la surface d’un bactériophage
- Génération d’une bibliothèque des phages-Ac avec différentes spécificités
- Sélection in vitro de la spécificité (Ac) recherchée
- Maturation d’affinité par mutagénèse
- À partir des domaines VH et VL re-génération d’un AC complet avec partie Fc désirée
Souris humanisées
- Produisent pas Ac souris (KO)
- Souris transgéniques avec locis génétiques pour Ig humains
- Génération des Ac de haute affinité par immunisation et technique hybridoma conventionnelle
Différence entre CMH-I et CMH-II
- CMH-I (CD8) : Tuer cellule qui est infectée par un virus, alpha + B2m, peptides 8-10 aa
- CMH-II (CD4) : Th1 interagissent avec phagocytes qui ont ingéré pathogènes pas capable de le tuer, Th2 aident cellules B a faire CI et HMS, alpha-beta hétéro dimère, peptides longueur variable
Fonction molécules CMH
- Présentation de l’antigène aux lymphocytes T afin de les activer
Voies peptides CMH-I
- Protéine dans cytosol dégradée par UPS
- Transport peptide cytosol vers RE par TAP
- Chaperonnes stabilisent molécules CMH-I
- Conformation stable une fois chargé avec peptide dans RE
- Changement de conformation permet sortie du RE vers surface
Voies peptides CMH-II
- Ag captés de l’extérieur de la cellule par phagocytose/endocytose
- Peptides produits dans phagolysosome
- Chaîne invariante (li) bloque sillon de présentation dans RE et dirige dans compartiment de chargement où il est dégradé, sauf pour peptide CLIP
- Molécule HLA-DM catalyse échange CLIP contre peptide de l’extérieur
Pourquoi nom CMH
- Rejet de greffe = contrôlé par CMH
- Gènes localisés ensemble dans locus CMH
- Complexe sur bras court du chromosome 6
À quoi sert le polymorphisme
- Variations alléliques héréditaires
- Se situent dans les sillons de présentation Ag
- Préférences alléliques des peptides liés
- Restriction de la reconnaissance des Ag par les cellules T
- Spectre très limité de peptides présentés
Quelles sont les conséquences du polymorphisme?
Allèles de susceptibilité et résistance pour maladies infectieuses et auto-immunes
Régulation CMH-II
- Régulée au niveau de la transcription
- Promoteurs proximaux hautement conservés
- Existence absence héréditaire des CMH-II (BLS)
- BLS : défaut régulation, génétiquement hétérogène
- CIITA = régulateur expression CMH-II
Distinguer différentes étapes vie cellules B et T
Cellules B
- Réarrangement des gènes Ig (BCR) dans les précurseurs B dans la moelle
- Cellules B immatures liant des Ag de surface (du soi) sont éliminées (sélection négative dans moelle osseuse)
- Cellules B matures liant des Ag étrangers sont activées
- Cellules B activées génèrent des cellules plasmatiques et mémoire
Cellules T
- Réarrangement des gènes du TCR du précurseur de cellule T dans le thymus
- Sélection positive et négative des cellules T immatures dans le thymus
- Cellules T matures rencontrent des Ag dans les organes lymphoïdes périphériques et sont activés
- Les cellules T activées prolifèrent et migrent dans les sites périphériques et éliminent l’infection
Analyser rôles étapes et identifier leur fonction et caractéristiques principales
a. Phase I
- 1ère étape : réarrangement VH récepteur pré-B vérifie existence d’une chaîne lourde fonctionnelle, transport à la surface et association avec Igalpha-beta
- 2e étape : prolifération et réarrangement VL rentabiliser investissement dans la génération d’une chaîne lourde fonctionnelle association avec plusieurs chaînes légères
b. Phase II
- Élimination cellules autoréactives
- Délétion clonale (apoptose), anergie, receptor editing
c. Pre-TCR
- La chaîne beta ne peut pas sortir seule de l’intérieur de la cellule
- L’expression de pTalpha permet l’expression à la surface et association avec CD3
Associer fonction points contrôle avec stratégie évolutive génération répertoire cellules B et T
- Signal de sauvetage pour les cellules ayant la mort programmée
- Signalisation via pré-BCR et BCR
- Arrêt du réarrangement (boucle rétroactive négative)
- Prolifération et progrès de la différenciation
- Signalisation via pré-TCR et TCRalpha
Comprendre importance exclusion allélique
- Mécanismes qui assurent qu’une cellule B exprime seulement un type de BCR/Ac
- Si fonctionnel : boucle rétroaction négative
Comparaison cellules B et T
- Plus compliqué chez cellules T
- Plus de choix
- Reconnaissance d’un AG seulement avec CMH
- Sélection positive + négative
Analyser enjeux et mécanismes sélection positive et négative des thymocytes
- Migration des thymocytes dans thymus différents types cellules stromales à différents endroits + différentes fonctions migration thymocytes essentielle pour différenciation + sélection
- Sélection positive interaction de faible affinité avec CMH + peptide du soi
- Sélection négative interaction trop forte avec CMH, reconnaissance spécifique peptides soi
- Central tolerance expression ectopique protéines périphérie dans cellules épithéliales médullaires (MEC)
Immuno-essai
- Interaction entre Ag et Ac
- Avantages spécificité, force interactions, générer des Ac contre beaucoup Ag différents
- Défi comment détecter + quantifier interaction, importance système bi-phaisque
Radioimmunoassay (RIA)
- Compétition entre Ag purifié radiomarqué et solution qui contient Ag à doser
- Courbe étalon avec Ag référence (non-marqué, quantité continue)
- Incubation Ac avec quantité fixe Ag radiomarqué + quantités croissantes Ag non-marqué
Immunoprécipitation (Hémagglutination)
- GR se déposent différemment dans les puits si agglutinés ou non
- Titre antisérum inverse plus grande dilution donnant réaction positive
- Couplage avec bille agarose couplé protéine A ou G (centrifugation) ou billes magnétiques couplés Ac secondaires (aimant)
Immunofluorescence
- Couplage Ac à fluorochromes
- Chromophores composés qui absorbent lumière
- Fluorochromes re-émettent la lumière après excitation
Cytométrie en flux (FACS)
- Cellules colorées avec Ac couplés à fluorochromes
- Cellules passent une à une devant laser excitation fluorochrome
- Analyse populations cellules
- Analyse multi-paramétrique
ELISA
- Couplage covalent Ac à une enzyme
- Réaction enzymatique génère produit coloré amplification signal + quantification
- Attachement d’un des partenaires à phase solide séparation par lavage
Bead-arrays
- Analyse par FACS (3 couleurs)
- Populations billes distinguables par double fluorescence
- Sur chaque type billes, Ac spécifique pour un Ag différent
- Détection Ag comme sur ELISA sandwich (mais détection Ac fluorescent)
Immunobuvardage
- Ac couplé à une enzyme
- Incubation avec substrat chémoluninescent
Mécanisme action AID
- Agit sur ADN
- Transcription pour générer ADN simple brin
- C U
- HMS : U peut être reconnu comme un T = mutation
- U peut être reconnu par UNG et clivé = site abasique
- Si site abasique réparé = mutation (HMS)
- Si site abasique pas réparé = bris ADN = CI ou CG
Devant les éléments D du locus IgH se trouvent des promoteurs qui créent des transcrits
stériles (non-codants pour une protéine). Ils servent à quoi ?
Ce sont des switch region qui permettent d’ouvrir la chromatine pour permettre la transcription
Expliquer la nécessité co-stimulation
- Signal entre CD80, CD86 de la CPA et CD28 de la cellule T
- Éviter autoimmunité
- Si pas de co-stimulation, pas activation cellule T et amène anergie
Analyser fonction CPAs
- Présentent Ag sur molécules CMH aux cellules T
- Capables de fournir la co-stimulation
Expliquer la nécessité de terminaison de l’activation
- Boucle activation autocrine par IL-2 doit être terminée
- Défaut terminaison activation mène à lymphoprolifération généralisée
L’histoire du TGN1412
- Après prise Ac : Inflammation massive, douleur, vomissements, œdèmes, coma et faillite d’organes
- Dirigé contre CD28
- Empêche la signalisation des TCR et active les cellules T peu importe leur spécificité
