Embryotransplantation og bioteknologi

Question 1

Embryonerne til ET kan altså opnås på flere måder, hvilke?

Answer 1

•Ovum-pick-up
•IVF fra slagtehusovarier
•Skylning af in vivo embryoner
- og en kombination af disse!

Question 2

Hvilke punkter er vigtige under embryotransplantation?

Answer 2

Superovulation
Skylning 
Embryoner 
Recipienter 
Sygdomskontrol
Drægtighed

Question 3

Hvad er definitionen på superovulation?

Answer 3

Hormonel behandling for at stimulere til ovulation fra flere follikler end normalt for arten

Question 4

Hvordan fungerer superovulation? Hvad gør man?

Answer 4

Normalt: Inhibin fra dominerende follikel undertrykker endogent FSH. De underordnede follikler tilbagedannes.

Superovulation: Vi tilfører så mere FSH, så at de vokser frem. PG tilbagedanner CL, og inducerer så den superovulerede brunst.

Question 5

Hvilke tre typer præparater benyttes ifm superovulation?

Answer 5

A: Follikelstimulerende (PMSG, FSH)
B: Luteolytiske (Prostaglandiner)
C: Ovulationsfremmende (HCG)

Question 6

I hvilken fase gives FSH ved superovulation?

Answer 6

I den midtluteale fase gives FSH, så at de små follikler udvikles

Question 7

Hvad vurderes superovulationssvaret ud fra?

Answer 7

Ovariernes størrelse og konsistens
Antal CL
Antal follikler

Question 8

Hvilke to steder kan der ske afvigelser der medfører individuel variation i superovulationer?

Answer 8

A: Oocytmodning
B: Ovidukten

Question 9

Hvordan kan afvigelser i ovidukten gøre at der sker individuel variation?

Answer 9

Bursae opfanger ikke alle oocytterne. De tabes i bughulen:
Væskeflow, ødem, motilitet ændres: Gamet-transport bliver asynkron

Question 10

Hvordan kan afvigelser i oocytmodningen gøre at der sker individuel variation?

Answer 10

Præmatur ovulation
Afvigelse i follikelendokrinologi (østrogen/progesteron)
Afvigelse i perifer endokrinologi (LH-top mangler eller progesteron for højt)

Question 11

Hvilken kommunikation er der mellem embryo og ovidukt?

Answer 11

En aktiv kommunikation, bl.a. embryotrofe faktorer såsom væksthormon og insulin

Question 12

Hvordan foregår en skylning?

Answer 12

Koen undersøges
Epiduralanæstesi anlægges
Rektum tømmes straks
Vask og afspritning
Skyllekateter indsættes i bedste horn, ballonen fyldes og der skylles med 5-7 sprøjter
Omhyggelig afsluttende tømning
Samme procedurer for andet horn og så hurtigt i laboratoriet

Question 13

Efter skylning, hvad sker der da i laboratoriet?

Answer 13

Filteret skylles to gange ned i petri skål med kvadreret bund.
Embryoner i 3cm petriskål med 10% serum.
Embryonerne klassificeres.
De vaskes 10 gange.
De suges op i hvert sit strå.
Strået placeres i transferator.

Question 14

Hvilke 4 typer embryokvalitet er der?

Answer 14

Type A: Homogen cellemasse og farve
Type B: Små afvigelser i form og farve
Type C: Tydelige afvigelser
Type D: Mange udstødte celler og degenerative forandringer

Question 15

Hvad er forskel på kvier og køer som recipient?

Answer 15

Kvier lidt bedre end køer

Køer avlsmæssigt billigst

Question 16

Hvad vil man opnå i recipienter:

Answer 16

Dobbelt- eller enkeltsynkronisering

Exakt brunstsynkroni med embryo
Epiduralanæstesi hos køer
Evt cervixdilatator
Skånsom ilægning i ipsilaterale horn

Question 17

Transmission af patogener ved ET, kan stamme fra?

Answer 17

Forurening (personel, udstyr)
Patogen i flushing eller transportmedie
Patogen adhærence til zona pellucida
Patogen penetration ind over zona pellucida

Question 18

Hvad er in vitro embryo produktion?

Answer 18

Relies on bringing together oocytes and semen in a petri dish

Question 19

In vitro embryo produktion er baseret på tre teknikker, hvilke?

Answer 19

1) modning af immatur oocyt in vitro
2) befrugtning af in vitro modnet oocyt
3) in vitro kultur af zygoten (som forhåbentlig bliver embryo)

Question 20

Hvordan opsamles oocytter fra levende dyr?

Answer 20

Collection of oocytes from live animals is mainly done in cattle and the horse using ultrasound guided transvaginal aspiration of oocytes from an often superovulated donor.

Question 21

Kan man opsamle oocytter fra andet en levende dyr?

Answer 21

In domestic large animal species oocytes may also be collected from newly slaughtered animals.

Question 22

Hvordan opsamler man follikler fra et ovarie?

Answer 22

En kanyle på en vacuum pumpe. Foliklens indhold aspireres i en vacutainer.

Question 23

Aspirerede oocytter er i hvilken fase af meiosen?

Answer 23

In domestic large animal species, aspirated oocytes will be in the resting prophase of the first meiotic division, awaiting either ovulation or degeneration.

Question 24

Hvad er COCs?

Answer 24

Cumulus- oocyte-complexes. Det er det man aspirerer eller skyller. Det er i virkeligheden oocytten med den omkringliggende granulosaceller som kaldes cumulus celler.

Question 25

Oocytter udvælges til in vitro modning på baggrund af?

Answer 25

Only oocytes surrounded by three or more layers of cumulus cells are selected for in vitro oocyte maturation.

Question 26

Inkubationstiden af oocytten i IVM-mediet afhænger af dyreart. Hvorfor?

Answer 26

Tiden er defineret ud fra tide det tater for kernen af mode (i oocytten), sp altså genoptagelsen af den anden meiotiske metaphase.

Question 27

Bruger man optøet frosset sæd til in vitro embryo produktion hos alle dyrearter?

Answer 27

Nej ikke svin. Sæden fra orner tolererer ikke fryse-optøningsprocessen godt.

Question 28

Hvad skal der gøres ved sæden inden den kan benyttes til in vitro fertilization?

Answer 28

Den skal renses fra fortynder.

Question 29

Success af in vitro befrugtningsprocessen evauleres ofte på baggrund af antallet af pronuclei i den potentielle zygote. Hvad betyder det der er hhv 0, 1, 2 eller 3 PN?

Answer 29

0: Ubefrugtet oocyt 1: Parthenogenetic activation (aktiveret oocyt uden befrugtning) 2: Normal befrugtet 3: Polyspermy

Question 30

Hvad kan man gøre for at undgå polyspermi?

Answer 30

Man kan lave intracytoplasmic semen injection (microinseminering)

Question 31

Forklar en microinseminering

Answer 31

One isolates a single activated sperm cell in a viscous medium and injects it into a mature oocyte.

Question 32

Hvad er "Denudation" og hvorfor gør man det?

Answer 32

Det er fjernelse af cumulus celler. Man gør det for bedre at kunne visualisere befrugtningen.

Question 33

Hvor længe kan man have embryo in vitro?

Answer 33

Det er muligt indtil embryo når blastocyst stadiet, og skilles fra sit zona pelucida. Videre udvikling af embryo skal ske i en surrogat.

Question 34

For meget mere detalje om de forskellige metoder af In Vitro Embryo Production se slide:

Answer 34

Embryotechnologies in Domestic Large Animal Species, noter.pdf Der er møg mange detaljer jeg ikke har med :p

Question 35

Giv tre gode årsager til at lave genetisk modificerede grise

Answer 35

1) Models for human disease 2) ”Gene pharming”. The making of pharmaceutical drugs, antibodies, hormones, enzymes or vaccines in live animals 3) Xenotransplantation

Question 36

Nævn de tre måder at lave genetisk modificerede grise i DK

Answer 36

1) Generation of transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer, the so- called cloning technique. 2) Generation of transgenic pigs through the generation of mixed embryos, the so-called chimeras. 3) Generation of transgenic pigs by sperm mediated gene transfer using microinsemination or ICSI.

Question 37

Beskriv teknikken for standard kloning (somatic cell nuclear transfer)

Answer 37

Kernen med organismens DNA fra en somatisk celle fjernes, og resten af cellen smidt væk. Samtidig fernier man kernen i en ægcelle. Kernen fra den somatiske cells placers i ægcellen. Herefter vil den somatiske cellekerne blive omprogrammeret af værtscellen. Ægget med den nye kerne stimuleres via shock og starter deling. Efter mange mitotiske delinger ender det ud i en blastocyst med DNA identisk til værten.

Question 38

Hvad betyder knock in og knock out?

Answer 38

* Knock-in = Insertion of new DNA | * Knock-out = Deletion of existing DNA

Question 39

Hvad er en chimera?

Answer 39

An organism composed of two or more genetically distinct cell types • Cells from two or more zygotes

Question 40

Hvad er en mosaic?

Answer 40

An organism whose cells consist of at least two genotypically distinct populations that arose after fertilization. • Cells of a single zygote lineage

Question 41

Beskriv sperm-mediated gene transfer

Answer 41

Man bruger sædcelle som transportmiddel for fremmed eller exogen DNA ind i oocytten under befrugtning