DH- Identificacao De Anticorpos Flashcards
QUais as possibilidades para surgimento de Ac inesperados?
- AloAc imunes
- AloAc naturais
- Ac passivos (ex IVIG)
- AutoAc
QUem devemos pesquisar Ocorrencia de Ac?
- Pacientes que vao receber Hemacias
- Doadores de Hemacias, sangue total ou componentes granulociticos
- Se possivel realizar em gestantes para avaliar risco de HDFN
- DOadores de Mo para TMO e Receptores
como e feito o teste em tubo para deteccao de Ac?
O que e obrigatorio testar ao usar teste em tubo em que a amostra e negativa??
Controle de coombs (Validar o resultado negativo) - ele tem que ser positivo para mostrar que a reacao esta funcionando
Quando e possivel avaliar hemolise no teste tubo?
QUando a amostra do soro e fresca e o reagente utilizado nao contem EDTA (para ter hemolise precisa de ativacao de complemento)
No geral como sao selecionadas Hemacias para triagem?
Hemacias O para evitar reacao com Anti-A ou anti-B
No geral sao duas hemacias R1R1 e R2R2 ou tres hemacias R1R1, R2R2 e rr
Explique efeito de dose? E quais os Ac mais comuns de acontecer?
Rh (Exceto D)
Kidd (Pode inclusive nao reagir com Hc hererozigotas)
Duffy
MNSs
Lutheran
Quais os reagentes que podemos usar para aumentar a reatividade do Ac antes de incubar a 37 graus?
Albumina 22%
LISS
PEG
QUal tipo de AGH e utilizado para detectar o Ac Poliespecifica ou monoespecifica
Monoespecifica no geral para IgG
Nao usamos o Poli O para evitar essa reação com complemento
COmo e o teste de Coombs para controle do negativo?
Sao Hemacias Rh positivas sensibilizadas com Anti-D logo vao reagir com o reagente AHG utilizado resultando em aglutinacao
Se o coombs for negativo deve repetir o teste
Quais as perguntas para identificar o Ac?
1) qual fase a reacao ocorreu?
- IgM reage melhor a temperatura ambiente e pode aglutinar na salina
- IgG reage melhor em fase de AGH
2) O controle autologo e positivo ou negativo??
- Se negativo pode indicar que a reacao e por um aloAc
- Se positivo pode ser um auto ou paciente com alo que recebeu transfusao nos ultimos 3 meses
3) Reacao ocorre em mais de uma Hemacia ?? Na mesma fase e mesma reatividade??
4) Tem hemolise ou reacao fraca?
- Hemolise> anti-Lea ou Leb, Anti-PP1Pk
- Aglutinacao fraca> Ac contra Lutheran ou anti-Sda
5) tem algutinacao real ou e um rouleaux?
- se rouleaux pode te algutinacao falsa (todos os testes que tem o plasma do pct iram algutinar incluindo autocontrole)
- Roleaux nao interfere na fase de AGH pois as Hc sao lavadas antes da adicao do AGH
- Roleaux pode sumir apos adicao de salina nos testes
Quais as principais limitacoes da triagem de Ac?
- Pode nao detectar Ac que circulam em baixos titulos (26% dos casos media 7 meses)
- Nao detecta ac contra ag de baixa prevalencia
- ac com efeito de dose pode nao ser detectado se nao tiver Hc homozigotas
O que fazer caso triagem de Ac positiva?
Realizar painel expandico
DAT
Auto controle
Confirmar historia clinica
Como a historia clinica pode ajudar na identificacao de Ac?
- Historio transfusional e gestacional (ex: se nao transfundiu nem gestou pensar em aloac que pode ser natural…)
- Se usou medicamentos (Daratumomabe), IVIG, RhIg, GAL…
- Identificar a raca dos individuos (alguns Ac sao especificos da raca branca ou negra)
QUal o primeiro passo ao analisar um painel?
Exluir Ac que nao podem ser responsaveis pela reatividade analisada
- Analisar Hcs negativas em todas as fases (Os Ag dessas hcs em geral nao sao os culpados pela reatividade do Possivel AloAC)
Obs: E recomendado usar a exclusao apenas quando tem o Ag em Homozigose (visto possibilidade de não reatividade do ac em heterozigose)
Obs: A exceção a essa regra São Ag de baixa prevalência que são raramente expressos em homozigose como K, Kpa, Jsa, Lua (Podem ser excluidos em Heterozigose)
O que fazer apos utilizar a regra da exclusao?
Utilizar a técnica de inclusão
Regras para usar a tecnica de inclusao?
1) Todas as ceulas positivas reagem no mesmo grau?
- Reatividades diferentes podem indicar mais de um Ac
- pode ter efeito de dose
- Celulas que tem dois Ag culpados podem reagir mais
- Ag com expressao variavel
2) As celulas positivas reagem na mesma fase ou nao?
- Reacoes em fases diferentes podem indicar multiplos Ac
- Efeito de dose (Hc homozigota pode reagir antes da AGH)
- Fase da reacao identifica o provavel tipo de Ac e significancia clinica
3) As Hc positivas levam ao mesmo Ag ??
- Todas as Hcs positivas para o Ag reagem e todas negativas nao reagem
4) Todos os Ac contra Ag comuns foram excluidos?
- As vezes pelo painel nao vai dar pra excluir Ac contra ag de baixa prevalencia (Kpa, Jsa, Lua..) e visto baixa frequencia de Ac nao e necessario fazer testes adicionais para excluir esses Ac
- porem se nao for possivel excluir um Ac contra Ag de alta frequencia deve ser realizado teste com hemacias selecionadas para excluir esses antigenos…
Cite um exemplo de como realizar testagem de hemacias selecionadas qnd fica na duvida entre dois ag culpados de alta relavancia?
Ex> nao consegui excluir anti-E e anti-Fya
Realizar testagem com hemacia E+e-, Fya- se nao reagir esta excluido o anti-E
O que mais podemos ter de regra para investigar hemacias positivas?
5) O controle autologo e negativo?
- negativo sugere um alo
6) Temos prova suficiente para provar o Aloac suspeito?
- Precisa de pelo menos 3 hc com Ag positivo e 3 Ag negativo
A regra das 3 hc positivas e negativas pode ser usada quando um painel tem multiplos Ac?
Sim, porem tem que usar a regra para cada um dos Anticorpos identificados
Ex: Anti-K e anti-E
3 hc negativas que sao K-E-
3 hc positivas que sao K-E+
3 hc positivas que sao K+E-
A regra dos 3 e 3 contempla quantos por cento de acertividade?
95%
logo pode ocorrer os achados em 5% dos casos devido ao acaso
O que mais pode ser usado para analisar o painel?
7) O paciente não tem o Ag culpado?
- Pct nao faz Ac contra Ag que ele tem proprio
- Devemos fenotipar o paciente para o Ag encontrado no Painel
- Pode ajudar em casos complexos
Pacitente encontra um Aloac no painel e acaba sendo fenotipado com positividade para esse mesmo ag o que pode ter acontecido?
Falso positivo
Erro de tecnica…
Quando nao e possivel fenotipar o individuo?
Quando o DAT positivo
Ou
Recebeu transfusão nos últimos 3 meses
O que da pra fazer para fenotipar o paciente com DAT positivo?
Utilizar tecnicar de eluicao para retirar o Ac da membrana da hemacia e poder fenotipar o paciente
- Glicina acida EDTA (EGA)
- Cloroquina
Se apos eluicao o DAT for negativo e possivel realizar a fenotipagem
Quando realizamos a tecnica da Eluicao qual o unico Ag que nao pode ser fenotipado?
Kell, pois os Ag kell sao desnaturados com Glicina acida EDTA
E se o DAT vier positivo apos tratamento com EGA?
E possivel repetir mais uma vez
Se continuar positivo apos dois tratamentos nao sera possivel fenotipar
O que pode ser feito para fenotipar o individuo que transfundiu e tem DAT positivo?
Tipagem reticulocitaria
(Utiliza o reticulócito para fazer a fenotipagem)
O que pode ser feito caso a fenotipagem seja dificultada?
Realizar genotipagem molecular
O que pode ser feito alem do que ja foi dito para resolver identificacao do Ac?
- Painel selecionado
(Ex pode ser usado quando um pct ja tem um ac e quero ver se ele tem outro adicional) - Tratamento enzimatico
- Neutralizacao
(Alguns ac podem ser neutralizados por substancias… isso permite identificar outros ac no painel) -> Ex: Lewis e P1 - Adsorcao
QUais as principais limitacoes para a adsorcao de ac com Hemacias autologas?
Volume de Hemacias (as vezes em anemia grave nao tem volume adequado)
Recebeu transfusao nos ultimos 3 meses
Obs: e possivel tratar essas Hc previamente a adsorcao para aumentar a ligacao com Ac
Como e o mecanismo de auto adsocrcao ? E pq precisa de muito volume de Hemacias?
No geral pode ser necessario varias adsorcoes para negativas um DAT (6-8 vezes)
inclusive pode acontecer de a autoadsorcao nao ser capaz de remover o autoac
Se nao e possivel fazer uma autoadsorcao o que da pra fazer?
Aloadsorcao
Qual o grande defeito da aloadsorcao
?
Hemacias alogenicas podem acabar adsorvendo Ac contra Ag de alta prevalencia
Quais os dois tipos de aloadsorcao?
- Paciente fenotipado: usar Hemacias alogenicas compativeis fenotipicamente
- Paciente nao fenotipado: Utiliza Hc O com o fenotipo R1R1, R2R2, rr. Alem disso uma das Hc tem que ser negativo para K e outra negativa para Jka e outra negativa para Jkb
As hemacias devem ser tratadas com enzima (Negativar duffy e MNS)
Acidificacao do pH pode ajudar identificar qual Ag?
Anti-M
O que fazer caso eu queira estudar um Ac que esta ligado na Hc (com coombs direto positivo)??
Eluicao e estudar esses ac no painel
QUal teste deve ser positivo no Eluato para validar o teste?
Last wash deve ser positivo…Se negativo invalida o teste
Obs: O eluato concetra os Ac
quais os metodos de eluicao?
Dependente de temperatura
pH
Solventes organicos
QUais Ac que em geral nao causm hemolise significativa e que posso liberar transfusao caso crossmatch compativel?
Anti-M
Anti-N
ANti-P1
Anti-Lea
Anti-Leb
Posso usar crossmatch como um divisor de aguas para permitir ou nao a liberacao da bolsa para o paciente?
Nao.
Pois caso o paciente tenha um Ac que ja nao e mais identificado o crossmatch vai ser compativel… Logo nesse caso deve pesquisar o Ag antes de fazer o crossmatch
Como descobrir quantas bolsas testar para achar bolsa com Ag negativo para o aloac?
Dividir numero de bolsas necessario para o paciente pela frequencia esperada na populacao de Ag negativo
Ex: 2 bolsas, E negativo
2/ 0,7 (frequencia de individuos E negativos) = 2.8 (devo testar em geral 3 unidades para encontrar bolsa E negativo)
De um exmeplo de como a raca pode ser usada para procurar um Ag negativo?
Fya
90% dos negros sao Fya negativos contra apenas 34% dos brancos
Devo respeitar o fenotipo do individuo para transfundir?
EM geral existe uma recomendacao de respeitar o fenotipo em pacientes cronicamente transfundidos especialmente Talassemicos e pacientes com SCD
Alem disso e recomendado no geral respeitar Rh e kell , pois sao os Ag mais imunogenicos
Obs: isso para pacientes que nao tem aloac
