Quiz

Question 1

Nommez deux enzymes pouvant être utilisés pour la révélation des protéines.

Answer 1

• Chimioluminescence : peroxydase (HRP), catalyse l’oxydation du luminol et produit de la lumière
• Fluorescence : fluorophore

Question 2

nommez deux techniques alternatives au western blot qui pourraient permettre de détecter votre protéine d’intérêt dans un échantillon donné.

Answer 2

• ELISA
• Cytométrie en flux

Question 3

Expliquez comment se déroule et à quoi sert l’étape de blocage après le transfert des protéines sur membrane de nitrocellulose.

Quel agent bloquant doit-on utiliser pour la détection des protéines phosphorylées et pourquoi?

Answer 3

• incuber la membrane avec une solution de bocage afin d’empêcher les anticorps de se lier de manière non spécifique à la membrane et d’augmenter la stabilité de l’anticorps.
• Le BSA (albumine de sérum bovin) doit être utilisé pour détecter des protéines phosphorylées car le lait en poudre contient de la caséine, qui est une phosphoprotéine. Cette caséine pourrait interférer avec la détection des protéines phosphorylées en se liant aux anticorps anti-phosphoprotéines et masquer ou perturber la détection.