Manejo y Conservación de Muestras Biológicas Flashcards
Obtención de muestras biológicas
Sangre
Biopsia
Frotis
Hisopado
Punción lumbar
Muestras biológicas
Material como orina, sangre, tejido, células, DNA / RNA, proteinas
¿Para que sirven las muestras biológicas?
Dx
Monitorización
Investigación
Creación de bancos genéticos
¿Qué nos permite determinar los fluidos corporales?
Estado biológico y bioquímico del individuo
Los líquidos corporales también permiten evaluar:
Inflamación
Presencia de infecciones
Naturaleza de tumor
¿Que se evalua con respecto a los fluidos corporales?
Vol
Apariencia
Color
Conteo c.
Etc…
Tipos de muestras utilizadas para extracción DNA
Sangre (globulos blancos)
C. epi bucales
Raices de cabello
Biopsa de tejido
Líquido amniótico (Dx prenatal)
Tejido / c. en cultivo
Para cadaveres se puede extraer DNA de…
Raices de cabello y huesos largos porque tardan en degradarse
Metodología que permite indentificar mol de DNA/RNA mediante hibridación
Microarreglos
En que estructura se hacen los microarreglos
Estructura de vidrio o silicona
Fundamento de microarreglos
Principio de complementaridad
- Detección por fluoresencia (bn marcadas)
- Se obtiene señal donde hay hibridación
- Permite lesctura de miles de varientes en un solo ensayo
Tipos de microarreglos
DNA
RNA
Metilación
Proteinas
Microarreglos DNA
SNPs (detección de variantes específicas)
Chips desde 50,000 oligos
Microarreglos RNA
Análisis expresión génica
Analiza cDNA porque RNA es muy inestable
Microarreglos metilación
Análisis y comparación de sitios de metilación (CpG)
Microarreglos proteinas
Analisis de proteinas mediante a.c. específicos
Pasos de microarreglos
1 Distribución de oligonuc sobre estructura
2 Cada oligonuc contiene miles de copias
3 Se agregan fragmentos de DNA de librerias
4 Variantes se analizan de manera simultánea
5 Resultado reflejado por fluorecencia
Oligonucleótidos en microarreglos
Son primers
15-25 nucleótidos
Librerias
Colecciones de clonas DNA
¿Que se necesita para generar librerias?
1 Extraer DNA
2 Corte con enz de restricción
3 Genera fragmentos de restricción de distintos tamaños que se traslapan
4 Unión al vector y clonar
¿Que es la digestión controlada?
Corte con enz de restricción
¿Como, como investigador, controlo los cortes que quiero que mi enz de restricción genere?
Controlo concentración, tiempo y temp
Chip de microarreglos DNA / fluorecencia IMAGEN
Usos de los microarreglos DNA
Forense (perfil genético)
Ciencias de las salud (análisis de polimorf en enf metabólicas)
¿Porqué los microarreglos son específicos?
Porque los tejidos no expresan lo mismo y en momentos diferentes
¿En que microarreglos encontramos expresión diferencial?
RNA
¿En que microarreglos encontramos genotipos?
DNA
Microarreglos para identificar cancer por rutas metabólicas implicadas
RNA
Permite conocer expresión diferencial entre un px y otro
Usos de microarreglos RNA
Ciencias de la salud
- Análisis comparativo entre c. sanas y enf
- Analisis comparativos
Microbiología
- Estudios de patogenicidad
- Resistencia bacteriana
Posibles aplicaciones de microarreglos ARN
Dx temprano
Estudios de cancer
Guías de tx
Estudio de nuevos fármacos
¿A que está altamente asociado la metilación DNA?
Cancer
¿Donde se realiza la metilación del DNA?
Carbono 5 de citosina
¿Quién dona los metilos en la metilación de DNA?
S-adenosil metionina
La metilación del DNA…
Silencia / inactiva genes
Human Methylation 450 Beadchip (microarreglo)
Illumina
Cubre 99% de genes referenciados y 250,000 islas CpG
Infinitum II
De Illumina
Bisulfito cambia C>T cuando NO esta metilado
ROJO: NO met
VERDE: SI met
