Interacciones Proteina-Proteina Flashcards
Clasificación de la interacción protéica (donde ocurren)
Entre dominios de una misma cadena polipep
Entre dominios de diferentes cadenas polipep
En complejos formados entre prot dependientes
Metodologías para evaluar interacciones prot-prot
Rayo x
ELISA
Doble híbrido Y2H
Microarreglos
Microscopía electrónica
Inmnunofluorecencia
FRET
Doble híbrido Y2H pasos
1 Fac de transc separado en 2 dom
2 A estos dom se le unen prot que se quiere analizar
3 Si hay interacción los FT se unirán y se transcribirá gen reportero
¿En qué 2 dominios se separa el FT en doble híbrido Y2H ?
Dominio de unión DNA
Dominio de activación
Doble híbrido Y2H
Técnica que detecta interacción de 2 proteinas mediante un FT con 2 dominios
FRET es una técnica…
Microscópica
FRET
Monitorea interacción en tiempo real
Prot marcadas con fluoróforos aceptores y donadores
Flouróforos FRET
CFP - donador
YPF - aceptor
CFP
Color azúl
Exitación en 436nm
Emite en 480nm
YFP
Color amarillo
Se activa con emisión de CFP (acepta) solo si hay interacción de prot
535nm
Ventajas de FRET
Se puede medir interacción en tiempo real