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BIOLOGÍA MOLECULAR > Vf > Flashcards

Vf Flashcards

1
Q

Conjugación

A

proceso de transferencia horizontal de material genético entre una célula bacteriana donadora y una receptora por CONTACTO DIRECTO

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Q

Transducción

A

el DNA es transferido de una bacteria a otra mediante un BACTERIÓFAGO

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3
Q

transducción generalizada

A

transferencia de cualquier región del genoma bacteriano

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4
Q

transducción especializada

A

transferencia de loci adyacente al sitio de integración del profago

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5
Q

DNA exógeno es introducido en una célula mediante un vector viral

A

transducción

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6
Q

En la transducción, cómo puede integrarse el DNA al genoma de la bacteria

A

por recombinación sitio específica (homología de secuencia)

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7
Q

Transformación

A

variación hereditaria de una célula bacteriana susceptible, originada por la captación de ADN desnudo libre en el medio

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8
Q

Transformante

A

célula que ha sido transformada

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9
Q

Principio de transformación de Griffith

A

una bacteria mueta se degrada y libera fragmentos de ADN al entorno

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10
Q

Competencia

A

estado fisiológico característico limitado en el tiempo que permite captar ADN del medio externo

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11
Q

factores ambientales de la competencia

A

densidad celular del cultivo
temperatura
ph
nutrientes

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12
Q

Formas de codificar la competencia

A

en el genoma
de forma artificial

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13
Q

Transformación natural

A

codificada en los genes celulares

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14
Q

Transformación artificial

A

no está codificada en los genes celulares

es inducida por procedimientos en donde las células son convertidas en permeables

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15
Q

Estas técnicas se basan en tratamientos químicos o físicos que producen microporos en la célula

A

transformación artificial

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16
Q

Química

A

las células e incuban en hielo con el DNA exógeno en presencia de cationes divalente como Ca (CaCl2)

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17
Q

Qué es lo que causa que entre el DNA a la célula en la química

A

shock térmico

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18
Q

Microinyección

A

bajo el microscopio empleando microagujas y micromanipuladores

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19
Q

Lipofección

A

el DNA se encapsula en lipomas las cuales se fusionan enseguida con la membrana celular

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20
Q

Electroporación

A

aumento de permeabilidad en la membrana celular mediante aplicación de un campo eléctrico (10-20 kV/cm)

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21
Q

Se forman poros a través de los cuales puede entrar el DNA exógeno

A

electroporación

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22
Q

Puede causar la muerte celular en la electroporación

A

exposición excesiva a campos eléctricos

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23
Q

Vectores virales

A

se aprovecha la capacidad natural que tienen los virus de ingresar su información genética a la célula blanco

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24
Q

Biobalística

A

pequeñas partículas de oro o tungsteno cubiertas de ADN se disparan a las células

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25
Q

Eficiencia de transformación en biobalística

A

baja

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26
Q

Clonación

A

variedad de procesos que pueden usarse para producir copias genéticamente idénticas de un ente biológico

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27
Q

Clonación DNA in vivo (celular)

A

amplificación de moléculas de ácido nucleico mediante su introducción, asistida por vectores, en células en cultivo

28
Q

Clonación proteína in vivo (celular)

A

producción de proteínas mediante la introducción asistida por vectores, en células en cultivo, de la información genética requerida para la síntesis de dicha proteína

29
Q

En la clonacion celular se requiere de

A

vectores

30
Q

El vector es…

A

un portador

31
Q

Molécula de DNA cuya misión es unirse con el fragmento de DNA llamado inserto

A

vector

32
Q

con quien se une el vector

A

con el inserto

33
Q

Son elementos genéticos con capacidad autoreplicable

A

vectores

34
Q

el inserto puede ser…

A

ADN genómico
cADN
producto de la retrotranscripción del ARN
producto de PCR

35
Q

aspectos para seleccionar un vector

A
  • tamaño máximo del inserto que admiten
  • tipo de célula anfitriona
  • plásmidos
36
Q

Clasificación de vectores

A

de clonación
de expresión

37
Q

Finalidad del vector de clonación

A

almacenar secuencias y permitir la obtención de grandes cantidades del inserto

38
Q

Capacidad de expresar el DNA recombinante

A

vector de expresión

39
Q

Objetivo del vector de expresión

A

producir un transcrito (RNA) o la proteína producto de ese transcrito

40
Q

Qué posee el vector de clonación

A

secuencias que le permiten mantener su replicación y la del DNA que transportan, independientemente del DNA genómico

secuencias codificadas para un gen de elección. El producto del gen no debe de estar presente en el tejido u organismo

sitios múltiples de clonación

41
Q

Sitios múltiples de clonación

A

PERMITE LA SELECCIÓN DE SITIOS DE RESTRICCIÓN PARA LA CLONACIÓN

42
Q

genes de resistencia

A

ampicilina

43
Q

genes reporteros

A

Lac Z (b-galactosidasa)
GFP (proteína verde fluorescente)
luciferasa

44
Q

genes que complementan defectos nutricionales en cepas mutantes

A

E. coli TRP1

45
Q

Características del vector de expresión

A

secuencias reguladoras
promotor
operador
sitio de unión a ribosa (SUR)
secuencia de término de la transcripción (TT)
secuencia de poliadenilación (eucariota)
codon de inicio y paro de la traducción

46
Q

SUR

A

shine-dalgarno (procariotas)
kozak (eucariotas)

47
Q

Vector pCMVTNT

A

región potenciadora o promotora de CMV que permite una fuerte expresión constitutiva en muchos tipos de células

48
Q

Procedimiento general

A

1 preparación de inserto
2 preparación del vector
3 preparación de la construcción final
4 transformación
5 selección de transformantes
6 propagación de transformantes
7 purificación de vectores o proteínas recombinantes

49
Q

1 preparación de inserto

A

el DNA se corta con la o las enzimas de restricción adecuadas

50
Q

2 preparación del vector

A

el policonector o sitio múltiple de clonación (MCS) permite emplear cualquier combinación de enzimas de restricción

51
Q

3 preparación de la construcción final

A

unión covalente in vitro de un inserto de DNA cortado, empleando una ligasa

52
Q

5 selección de transformantes

A

cuando la célula ya fue transformada crece en medios de cultivo selectivos solidos

métodos genéticos o de selección fenotípica

levantamientos de colonias o placas

53
Q

6 propagación de transformantes

A

se seleccionan las colonias de interés y se crecen en medios líquidos

54
Q

Cuando se lleva a cabo la clonación

A

división celular junto con la del genoma, formación de copias de rDNA incorporadas

55
Q

Posee un gen de resistencia a ampicilina y el gen Lac Z

A

vector plasmídico pUC18/19

56
Q

interrumpe el gen LacZ

A

MCS (sitio múltiple de clonación)

57
Q

X-gal

A

SUSTRATO de la B-galactosidasa-LacZ

58
Q

Es X-gal es hidrolizado a…

A

galactosa y 5-dibromo-4,4-dicloro-índigo

59
Q

Confirma la actividad de la B-galactosidasa

A

el color azul

60
Q

IPTG

A

INDUCTOR de la B-galactosidasa

61
Q

Análogo no-hidrolizable de la alolactosa que es un metabolito isómero de la lactosa, dispara la transcripción del operón Lac

A

IPTG

62
Q

Ampicilina

A

NO permite el crecimiento de las colonias bacterianas que no portan el gen de resistencia que posee el vector pUC18

63
Q

disueltos en el medio de agar de una placa de cultivo

A

ampicilina
IPTG
X-gal

64
Q

LacZ

A

codifica para la B-galactosidasa que hidroliza a X-gal y genera colonias color azul

65
Q

genera color azul

A

hidrolización de X-gal por la B-galactosidasa

66
Q

Si se inserta un fragmento de ADN en el MCS…

A

se inactiva este gen y se vuelve incapaz de sintetizar B-galactosidasa funcional, y da color blanco

67
Q

características de colonias color azul

A

crecimiento indica que fueron transformadas con el pUC18 y poseen el gen de resistencia a la ampicilina, Lac Z inactivo porque el vector está vacío

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