Ve Flashcards
Qué es la hibridación de ácidos nucleicos
forma de detectar secuencias específicas de nucleótidos empleando sondas marcadas
De donde proceden los ácidos nucleicos involucrados
de fuentes diferentes
Cómo son las sondas
de cadena sencilla
Fluorescent in situ Hybridization (FISH)
permite mapear la ubicación relativa de secuencias diferentes a lo largo de secuencias únicas de DNA
Qué permite localizar FISH
la expresión génica en un tejido
En FISH, como se desnaturaliza el DNA
con solución salina caliente
Contratinción de FISH
ioduro de propidio
Sondas específicas de locus
anomalías cromosómicas numéricas (aneuplodías) y estructurales (deleción, duplicación)
específicas para una región cromosómica única
Sonda fusión dual
se unen a regiones contiguas al punto de traslocación
Traslocación
anomalía estructural
se transfiere una parte del cromosoma a otro
Sonda doble color para ruptura
revelan eventos de traslocación
se unen al cromosoma intacto flanqueando el punto de ruptura
ocurre traslocación y la sonda se separa
Sondas centroméricas (satélite)
hibridan en las regiones repetidas que rodean los centrómeros
pueden detectar aneuploidía
Sondas teloméricas
revelar pequeñas deleciones o traslocaciones que NO son fáciles de visualizar en el cariotipo estándar
Objetivo de Northern Blot y Southern Blot
identificar secuencias de interés en el ácido nucleico inmovilizado en una matriz de papel, nylon o nitrocelulosa
Cómo puede ser la transferencia en NB y SB
pasiva o electrotransferencia
Southern Blot ejemplo
DNA genómico digerido previamente con enzimas de restricción
Northern Blot ejemplo
análisos de expresión. Niveles del RNAm
Sonda marcada o acoplada a una etiqueta
P32 (radiactivo)
Digoxigenina (DIG)
Digoxigenina (DIG)
anticuerpos específicos alfaDIG
anticuerpo acoplado a fosfatasa alcalina
sustrato quimioluminiscente. CSPD
Qué se debe considerar en el Southern Blot
la muestra que se está analizando y lo que representa el que haya o no reconocimiento específico de la sonda empleada
Northern Blot
nivel de expresión de un gen relacionado con el cuadro clínico
Dot Blot
útil para muestras de DNA y RNA
permite analizar de forma rápida la presencia de una secuencia específica en una muestra determinada
Hibridación de colonias o placas, Cómo se aplican las muestras en Dot Blot
con un capilar en la membrana directamente
Hibridación de colonias o placas
membrana se pone en contacto con las colonias
membrana se trata y DNA o RNA queda expuesto y pueda hibridar la sonda marcada