Replicación del ADN Flashcards
Introdujo el término dogma central de la biología Molecular
Francis Crick
El dogma central fue roto por…
descubrimiento de la DNA polimerasa RNA dependiente (retrotranscripción)
La replicación del RNA es catalizada por…
RNA replicasas
En la replicación ambas cadenas del dúplex de DNA parental pueden servir como…
molde para la síntesis de una nueva cadena
Los nuevos dúplex sintetizados de novo tienen…
la misma secuencia que el dúplex progenitor
Replicación conservativa
las cadenas originales se mantienen unidas después de servir como molde
Replicación dispersiva
la molécula de DNA original se fragmenta en pequeños pedazos sontetizándose así las cadenas de novo
En la replicación __________ los dúplex hijos tendrían cadenas de DNA antiguo y nuevo
dispersiva
Replicación semiconservativa
la unidad que se mantiene de una generación a otra es una de las dos hebras individuales que formaba parte del dúplex progenitor
En la replicación semiconservativa…
los dúplex hijos están formados por una cadena del progenitor y una cadena de nueva síntesis
Experimento de Messelson-Stahl
N15: isótopo pesado en el que se desarrollan las células
N14: isótopo normal ligero
Resultados del Experimento de Messelson-Stahl
después de una gen el DNA debe es híbrido N15-N14
2da gen: aparecen los dúplex N14-N14
Sig gens: mayor porcentaje de ligeros
Si la replicación fuera conservativa…
las cadenas pesadas progenitoras deberían permanecer intactas
NO HABRÍA CADENAS HÍBRIDAS
En el modelo de la replicación dispersiva…
las cadenas híbridas N15-N14 solo aparecerían en la primera generación
Replicón
unidad del DNA (genoma) en la que se produce un acto individual de replicación
Se dispara una vez y sólo una vez en cada ciclo celular
replicón
Dependiendo de si se forma una o dos horquillas…
pueden ser unidireccionales o bidireccionales
Horquilla de replicación
-punto en el que se está produciendo la replicación
-se mueve desde su punto de comienzo en el origen de replicación
Cada que se encuentras los orígenes de replicación
cada 100 kpb
Cómo se organizan las horquillas de replicación
en focos
Cuántos foso contiene el cromosoma eucariota
entre 100 y 300 que contienen >300 horquilla cada uno
Tasa de replicación en bacterias y eucariotas
bacterias: 50,00 bp/min
eucariotas: 2,000 bp/min
Principal patología asociada a falla durante la replicación
cáncer
Replicación - Iniciación
-primosoma
-primasa y helicasa
Replicación - Elongación
-replisoma
solo existe como un complejo asociado a la estructura de la horquilla de replicación
Replicación - Terminación
dificultad para conocer su función ya que parece ser indispensable
Mutantes de detención rápida
detienen la replicación inmediatamente al subir la temperatura (elongación)
Mutantes de detección lenta
completan la tanda de replicación en curso pero no pueden comenzar otra (iniciación)
Polimerasas
sintetizan ácidos nucleicos
Nucleasas
cortan o degradan los ácidos nucleicos hidrolizando el enlace éster de fosfato de nucleótidos contiguos
Exonucleasas
actúan sobre los extremos del DNA
Endocucleasas
actúan sobre enlaces internos de la molécula de DNA
Polimerasas que sintetizan DNA
DNA polimerasa DNA dependiente
DNA polimerasa RNA dependiente
Polimerasas que sintetizan RNA
RNA polimerasa DNA dependiente
RNA polimerasa RNA dependiente
Participan verdaderamente en la replicación
las DNA replicasas
Actúa en la replicación de la E. Coli
DNA pol.III Replicasa
Replicasa nuclear en eucariotas
delta
Reparación del ADN en eucariotas
beta y epsilon
Replicación DNA mitocondrial
gamma
Proofreading
actividad corregidora 3´-5´ exonucleasa
Es la tendencia a permanecer en una sola plantilla o molde en vez de disociarse, evitando desplizamiento de replicación
procesividad de la enzima
NINGUNA DNA polimerasa puede iniciar la síntesis a partir de nucleótidos libres
verdadero
Qué se requiere para el inicio de la síntesis de DNA
un extremo 3´OH cebador (primer)
La síntesis de DNA es semidiscontínua
verdadero
debido a la estructura antiparalela del dúplex de DNA
Cadena conductora
se sintetiza de forma contínua
Cadena retrasada
crece globalmente de 3´a 5´
Cómo se sintetiza la cadena retrasada
en fragmentos de Okazaki de 100-2,000 bases en procariotas y 100-200 bases en aucariotas
Durante el proceso de replicación en células somáticas…
los extremos 5´de los cromosomas sufren acortamiento
Primasa
-locus dnaG
-incorpora un cebador de RNA de unas 11-12 bases
-comienza con la secuencia 5´-pppAG-3´
Dónde realiza pa actividad de la primasa
en la iniciación en el primosoma al comienzo de la síntesis de la cadena conductora y elongación en el replisoma
Qué sintetiza la primasa
ARN
Extiende al ARN cebador dentro del fragmento de Okazaki
La ADN polimerasa III
Utiliza traslación de melladuras para reemplazar el ARN cebador por ADN
ADN polimerasa I
Sella la melladura
la ligasa
única polimerasa con actividad 5´3´ exonucleasa
DNA pol. I
En eucariotas donde no hay una polimerasa con actividad 5´3´ exonucleasa:
-RNAsa H1: Endonucleasa, hace ruptura en dúplex RNA-DNA
-FEN1/MF1: nucleasa, elimina RNA
DNA ligasa
-sella la melladura
Pasos para sellar la melladura
-AMP del complejo enzima-AMP se une al 5´fosfato de la melladura
-se forma enlace fosfodiéster
ATP es cofactor en el…
fago T4
Cofactor ATP - mamíferos
ligasa tipo I. ATP
Helicasa
enzima que separa las cadenas de DNA, empleando la hidrólisis del ATP
Interacciona con el DNA tanto dúplex como de cadena sencilla
helicasa
Es el molde de la cadena retrasada
5´3´
SSB proteína de…..
proteína de unión a cadena sencilla de DNA
Componentes del núcleo de la holoenzima
a: centro catalítico DNA polimerasa
e: exonucleasa 3´5´
0: ensamble de a y e
Componentes de la holoenzima
núcleo: a, e y 0
B: tenaza, mantiene a la polimerasa sobre el DNA
Y: (S, S´ Y, X) coloca las subunidades B sobre el DNA
T: componente de dimerización
Cómo está formado el complejo de preiniciación
por un dímero B, un complejo Y y el DNA
Conecta al primosoma con la polimerasa
Tau
Tras la síntesis del cebador se libera…
la primasa
Hsta donde se extiende el fragmento de okazaki
hasta justo antes del comienzo del siguiente cebador de RNA
Qué actividad tiene Tus (proteína)
anti-helicasa
Hélices alfa de Tus protruyen…
alrededor de la doble hélice en el extremo que bloquea la horquilla de replicación
Síntesis de la cadena conductora continúa hasta…
el elemento ter
Mutaciones en los sitios ter o en Tus no son letales
verdadero
Origen de la replicación
donde se inicia la cadena conductora
es un punto de actuación en cis
Proteínas que se requieren para la replicación
6
DnaA
DnaB
DnaC
HU
girasa
SSB
Son proteínas de motor de inicio de la replicación
DnaB/DnaC
DnaB
es la helicasa
desplaza a DnaA y activa a DnaG primasa
Girasa
quita vueltas, disminuye la tensión
SSB
estabiliza la cadena sencilla impidiendo el dúplex
Metilación del origen de replicación OriC
-11 copias de la secuencia GATC en el origen
-Dam metila la adenina en N6
-asegura que sólo se utilice una vez en cada ciclo
-si los orígenes no están metilados sí son activos
Retraso de la remetilación
el DNA hemimetilado producto del primer ciclo de replicación permanece en el origen
13 minutos luego de la replicación
Represión de la transcripción de dnaA
el promotor de dnaA no se transcribe
Inhibición de la unión de DnaA
seqA es otro proteína que retrasa la remetilación de oriC y dnaA
No tiene por sí sola especificidad por la secuencia oricC
seqA
Secuestro físico del origen
asociación del DNA con la membrana
Se unen al material cromosómico antes de la replicación y se liberan después de esta
MCM 2, 3, 5
factores permisivos
MCM contiene una helicasa
verdadero
Copias del genoma mitocondrial
5-7
El RNA cebador inicia la replicación en…
el origen en la cadena H
La apertura del dúplex en el origen no conduce al comienzo de…
la replicación de ambas cadenas
Replicación de la mitocondria
la cadena H se toma como molde ara la síntesis de una nueva cadena L partiendo del asa D que abarca 500-600 bases
El origen de la cadena H
comienza la síntesis de la cadena L
El origen de la cadena L
comienza la síntesis de la cadena H
