Técnica Indireta - Protocolo de Clonagem Molecular Flashcards
Técnica Indireta - Objetivo
Produção de plantas transgênicas → com plasmídeos Ti recombinantes
Bactéria A. tumefaciens - Importância 2
Presente na natureza → infecta a planta
Possui → Plasmídeo Ti (Indutores de Tumor)
Região Vir - Localização
Presente no Ti
Região VIR - Função
Essencial para a transferência do T-DNA → contém genes cujos produtos → vão promover a excisão e a integração → do T-DNA → no genoma da célula vegetal.
Região VIR - Função → Descrição do Processo (processo normal)
Cliva T-DNA → leva e integrar essa região → no genoma do material → resultando na formação da galha da coroa.
Região VIR - Consequência de sua Ausência 2
Pela ação da VIR → o oncogene → é integrado ao DNA da planta.
Sem VIR → não tem inserção do gene → então não tem clonagem.
T-DNA - O que é?
Região oncogene do plasmídeo.
T-DNA - Como resultado da ação do Oncogene T-DNA:
Tumores → crescem.
T-DNA - Como ocorre a Inserção do Gene de Interesse?
Técnicas de recombinação de DNA → gene de interesse → introduzido dentro da região T (do plasmídeo Ti).
T-DNA - Inserção do Gene de Interesse → Consequência
Uma vez inserido → o gene da bactéria → é silenciado → destruindo a sua capacidade de indução tumoral → perdendo a capacidade oncogenica.
Inserção do Gene de Interesse - Uma vez que o gene de interesse foi colocado no T-DNA e inserido na A. tumefaciens:
Ela perde a capacidade de gerar o tumor → e se torna uma bactéria silenciada.
A. tumefaciens Silenciada - O que ocorre agora?
Silenciada → modificada (contendo o plasmídeo recombinante)
Adicionada junto ao tecido vegetal → onde infecta a célula vegetal.
Infecção da Célula Vegetal - Consequência
A. tumefaciens → integra o DNA plasmidial ao genoma bacteriano → conferindo à célula vegetal uma nova característica.
