Manipulación de genes: PCR

Question 1

PCR

Answer 1

Reacción en cadena de la polimerasa

Question 2

Reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de DNA

Answer 2

Reacción en cadena de la polimerasa

Question 3

¿Qué se necesita para realizar una PCR?

Answer 3

• DNA templete
• Primers
• DNA polimerasa
• dNTPs
• Buffer/Cofactor

Question 4

Es el fragmento de DNA que contiene el gen a buscar

Answer 4

DNA templete

Question 5

Es lo que determina el inicio y el término de la región que se va a amplificar

Answer 5

Primers

Question 6

Características que deben tener los primers (5)

Answer 6

• Son diseñados por el investigador, buscando que sea complementario a la secuencia buscada
• Son cortos
• Alto contenido en C y G
• No debe ser autocomplementario
• No debe formar estructuras secuendarias

Question 7

¿Cuánto deben medir los primers?

Answer 7

De 18 a 24 nm

Question 8

dNTPs

Answer 8

Desoxirribonucleótidos trifosfatados

Adenina, Timina, Citocina y Guanina

Question 9

Es una solución amortiguadora necesaria para que la Taq polimerasa haga su función

Answer 9

Buffer / Cofactor

Question 10

Fases de la PCR (3)

Answer 10

1. Desnaturalización
2. Hibridación
3. Extensión

Question 11

Fase donde las cadenas de DNA son calentadas y separadas

Answer 11

Desnaturalización

Question 12

Temperatura a la que se separan las hebras de DNA

Answer 12

95ºC

Question 13

Tiempo que tardan las cadenas de DNA en separarse

Answer 13

20 - 30 segundos

Question 14

Fase donde los primers se alinean al extremo 3´ del templado previamente separado e hibridan con su secuencia complementaria

Answer 14

Hibridación

Question 15

TFórmula para estimar la temperatura melting o de hibridación

Answer 15

Tm = 4 (G+C) + 2 (A+T)

Question 16

Fase en la que la Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado-primers y empieza a agregar dNTP´s complementarios para crear las cadenas completas de DNA

Answer 16

Extensión

Question 17

Dirección en la que es la extensión de las cadenas

Answer 17

5´ a 3´

Question 18

Temperatura óptima para la reacción de extensión

Answer 18

72ºC

Question 19

¿Cuántas veces se repiten las fases?

Answer 19

De 20 - 30 veces

Question 20

Nombre de los equipos donde se realiza la reacción

Answer 20

Termocicladores

Question 21

¿Cómo verificas que la reacción transcurrió eficientemente?

Answer 21

Debes visualizar los amplicones a través de una electroforesis en geles de agarosa