DNA recombinante Flashcards
Es la aplicación de bases biotecnológicas para producir productos que pueden usarse para diagnóstico, prevención y tratamiento
Biotecnología
¿En qué consiste la ingeniería genética?
En la identificación y aislamiento de un gen
DNA recombinante
Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente
¿Qué son las enzimas de restricción?
Son un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de DNA foráneo
¿Qué hacen las enzimas de restricción? (2)
- Degradan el DNA extraño
- No degradan el DNA. propio de la bacteria
¿De qué se encargan las enzimas de restricción?
Monitorean el DNA que entra a la célula y lo destruyen si lo reconocen como malo
Es un sistema de defensa natural de las bacterias
Enzimas de restricción
Tipos de enzimas de restricción
- Endonucleasas
- Enzimas del sistema de modificación
Son las que degradan el DNA extraño, reconocen una secuencia y cortan el DNA
Endonucleasas
Son enzimas del sistema de modificación
Metilasas
¿Qué hacen las metilasas?
Modifican el DNA propio para que no sea degradado
¿Cómo es el DNA metilado?
Inmune
Si no es inmune, sería degradado
¿Qué hacen las endonucleasas? (2)
- Cortan enlaces fosfodiéster del DNA en secuencias específicas
- Reconocen secuencias palindrómicas
¿Quién produce las endonucleasas?
Las bacterias
Tipos de cortes de las enzimas de restricción (2)
- Cohesivos
- Romos
¿Cómo son los cortes cohesivos?
Cortes en diferente posición
3 a 5 nt de diferencia
¿Cómo son los cortes romos?
Cortes simétricos en ambas cadenas
Tipo de corte
Cohesivo
Tipo de corte
Rombo
Molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno
Vector
Tipos de vectores (2)
- Clonación
- Expresión
Ejemplos de vectores
Plásmidos, bacteriófagos
¿Qué nos permite la clonación?
- Almacenar secuencias
- Obtener grandes cantidades de DNA
¿Qué permite la expresión?
Producir un transcrito o proteína
Secuencia específica que es reconocida por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario
Sitio múlriple de clonación
Características de los marcadores de selección
- Resistencia a antibióticos
- Proteína verde fluorescente
Características de los plásmidos (3)
- dsDNA
- Circulares
- Separados del DNA cromosómico
Ejemplos de plásmidos
Bacterias, levaduras
Son virus que infectan a las bacterias
Bacteriófagos
¿Qué hacen los bacteriófagos cuando se modifican genéticamente?
Eliminan genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento
Son vectores híbridos
Cósmidos
Plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago
Fagémidos
Característica de los fagémidos
No tienen sitios cos
Cromosomas artificiales
- BAC (bacterias)
- YAC (levaduras)
¿Cómo se hace la clonación?
Fragmento DNA introducido en un plásmido -> Transformación E. Coli -> Células hijas tienen el plásmido recombinante
Pasos de la clonación
- Preparación del inserto que se va a clonar
- Preparación del vector
- Ligación del inserto y el vector
- Preparación de células competentes
- Transformación celular
- Identificación de las colonias
¿Qué hacen las nucleasas programables?
Reconocen secuencias específicas en un dsDNA